ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥患者血脂代謝的關(guān)系

劉慧方

（梅州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 梅州 514000）

血脂水平與載脂蛋白E（apolipoprotein E，Apo E）基因多態(tài)性存在相關(guān)性，與冠心病和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)[1]。ApoE基因位于19號(hào)染色體，具有明顯的基因遺傳多態(tài)性，有3種主要的異構(gòu)體即E2、E3、E4，其分別由1個(gè)基因位點(diǎn)的3個(gè)等位基因ε2、ε3、ε4編碼。在普通人群中存在 6 種基因型：3 個(gè)純合子（E2/ E2、E3/ E3、E4/ E4），3 個(gè)雜合子（E2/ E3、E2/ E4、E3/ E4）。按組分為E2型（E2/E2，E2/E3）、E3型（E3/ E3，E2/ E4）、E4型（E3/E4，E4/E4）。本研究通過對(duì)ApoE基因多態(tài)性和血脂水平變化的研究，以探討針對(duì)ApoE基因型變化而制定個(gè)體化治療方案。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年1—12月梅州市人民醫(yī)院高脂血癥患者總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三脂（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）其中一項(xiàng)異常增高的142例，其中男100例、女42例，年齡45～86歲。排除合并周圍血管疾病或周圍血管栓塞性疾病者、大動(dòng)脈炎、血液病 、結(jié)核 、惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全、入院前1周內(nèi)使用降脂藥物者。

1.2 儀器與試劑

DNA提取試劑盒購自北京天根公司，TC-96型PCR儀購于杭州博日科技有限公司，MK100-2A型雜交儀及ApoE基因型檢測(cè)試劑盒（基因芯片法）購自珠海賽樂奇生物技術(shù)有限公司，AU5400全自動(dòng)生化分析儀購自日本奧林巴斯公司，TC、TG、LDL-C檢測(cè)試劑盒購自北京中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 方法

抗凝血標(biāo)本采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，用于ApoE基因分型檢測(cè)。血清標(biāo)本用于血脂水平檢測(cè)。血液標(biāo)本置于-20 ℃冰箱中凍存。按試劑盒說明書提取全血基因組DNA，ApoE基因進(jìn)行擴(kuò)增，隨后將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交，對(duì)ApoE基因行分型檢測(cè)，基因芯片的位置設(shè)置見圖1。同時(shí)測(cè)定不同ApoE基因型血清標(biāo)本的TC、TG、LDL-C水平，所有操作均按照試劑盒說明書進(jìn)行。最終分析收集的標(biāo)本中ApoE基因的分布頻率及其與血脂水平的相關(guān)性。

圖1 ApoE基因的位置設(shè)置

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，2個(gè)組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ApoE基因表型檢測(cè)

ApoE基因表型分為：E2型（E2/E2、E2/E3）；E3型（E2/E4、E3/E3）；E4型（E3/E4、E4/E4）。見圖2。

圖2 ApoE基因表型

2.2 ApoE基因表型分布

ApoE基因表型E3型等位基因占比最高（65.49%），其次是E4型等位基因（17.53%），最后是E2型等位基因（16.90%）。見表1。

表1 142例高脂血癥ApoE基因表型分布

2.3 不同高脂血癥類型ApoE基因型的比較

142例高脂血癥患者，其中高TC 51例，高TG 70例，高LDL-C 49例。51例高TC血癥中E4表型比例最高（41.03%），E3表型其次（27.83%），E2表型最低（14.29%）；31例高TG血癥中E2表型比例最高（66.67%），E 3表型其次（3 9.1 3%），E 4表型最低（28.21%）；22例高LDL-C血癥中E4表型比例最高（30.77%），E3表型其次（28.70%），E2表型最低（19.05%）。

2.4 不同ApoE基因型高脂血癥患者血脂水平的比較

E4基因型TC水平高于E2基因型和E3基因型（P＜0.05）；3個(gè)組TG和LDL-C水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同ApoE基因表型高脂血癥患者血脂水平的比較（， mmol/L）

表2 不同ApoE基因表型高脂血癥患者血脂水平的比較（， mmol/L）

注：與E4基因型比較，*P＜0.05

基因類型 例數(shù) TC TG LDL-C E2 24 4.41±0.35*2.92±0.25 2.68±0.21 E3 93 4.70±0.40*2.38±0.22 2.92±0.18 E4 25 5.30±0.22 2.61±0.64 3.14±0.28

3 討論

高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)極其重要的危險(xiǎn)因素，而動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致CHD的主要原因。ApoE基因是目前被研究較多的血脂相關(guān)基因，是參與調(diào)節(jié)機(jī)體血脂代謝的重要因子，其基因多態(tài)性與血脂水平密切相關(guān)[2]。ApoE是多種脂蛋白的結(jié)構(gòu)蛋白， 在血漿脂質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)和代謝過程中起著重要的作用。對(duì)ApoE基因型與血脂水平關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，E2在降低 TC 水平上具有一定的優(yōu)勢(shì)，E4與較高的TC水平相關(guān)，可能與高血脂相關(guān)的疾病有關(guān)[3]。ZHANG等[4]、GRAMMER等[5]的meta分析認(rèn)為ApoE基因是CHD的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。劉金鳳等[6]認(rèn)為E4等位基因的表達(dá)是脂質(zhì)代謝紊亂的重要危險(xiǎn)因素。ZENDE等[7]報(bào)道ApoE基因型血清中 TC、LDL-C及TG水平高于其他基因型。ApoE基因多態(tài)性與TC水平密切相關(guān)，不受環(huán)境、性別、年齡等遺傳因素干擾而存在，不同的ApoE基因型TC 水平由高到低依次為E4/E4、E3/E4、E2/E4、E3/E3、E3/E2、E2/E2。ApoE各基因型編碼的ApoE異構(gòu)體與脂蛋白受體的親和性及其在體內(nèi)的代謝速度不同，最終影響個(gè)體間血脂的水平。

本研究中以高脂血癥患者為研究對(duì)象，ApoE3基因型例數(shù)占總例數(shù)的65.42%，E4等位基因占17.53%，E2等位基因占16.90%，與相關(guān)報(bào)道[8-9]的結(jié)果有差異，這可能與研究對(duì)象不同有關(guān)。本研究的142例高脂血癥患者中，51例高TC血癥患者E4基因型比例最高（41.03%），E2基因型最低（14.29%）；31例高TG血癥患者E2基因型比例最高（66.67%），E4基因型最低（28.21%）；22例高LDL-C血癥患者E4基因表型比例最高（30.77%），E2基因型最低（19.05%）。高脂血癥患者因ApoE基因型不同而變化，E2、E3基因型TC水平與E4基因型相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TC水平為E4基因型＞E3基因型＞E2基因型，與劉國棟等[10]研究報(bào)道相符。

ApoE基因型的變化可應(yīng)用于臨床指導(dǎo)患者正確選擇調(diào)脂藥物，實(shí)現(xiàn)對(duì)其個(gè)體化的精準(zhǔn)醫(yī)療， 降低冠心病的發(fā)病率和心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。ApoE2基因型屬于保護(hù)類基因型，對(duì)他汀類藥物敏感，治療效果較好，故首選他汀類藥物[11-12]。ApoE3基因型屬于大眾類基因型，血脂異常無明顯偏性，他汀類藥物治療正常，而采用黃酮類藥物降脂效果更好。E4基因型可增加CHD、心肌梗死、腦梗死、老年癡呆患病風(fēng)險(xiǎn)，宜低脂、低鹽、低糖飲食，忌煙酒[13]，他汀類藥物治療效果較差，治療時(shí)應(yīng)加大劑量治療[14-15]，但需注意監(jiān)測(cè)藥物不良反應(yīng)。

綜上所述，高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化和心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，ApoE基因多態(tài)性對(duì)血清血脂水平具有重要影響，臨床上可根據(jù) ApoE基因表型的變化指導(dǎo)患者選擇適合的降脂藥物，以降低CHD的發(fā)病率和心血管事件風(fēng)險(xiǎn)。隨著研究的不斷深入，ApoE基因多態(tài)性將對(duì)這些疾病的診斷及預(yù)防發(fā)揮重要的作用。