H7N9禽流感患者外周血3種主要固有免疫細(xì)胞的變化及意義

崔娟娟， 孫 蔚， 張 星， 朱義玲， 居頌光

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科，江蘇 蘇州 215006）

2013年3月，在上海及安徽3例已死亡的患者體內(nèi)首次分離出一種新型的禽流感病毒H7N9，該病毒可導(dǎo)致嚴(yán)重的致死性呼吸系統(tǒng)疾病[1]。蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院是蘇州市H7N9禽流感的定點(diǎn)收治醫(yī)院，該院感染病科近5年來(lái)共收治26例H7N9禽流感患者，其中18例好轉(zhuǎn)、7例死亡，另有1例自行出院，預(yù)后不明。目前認(rèn)為H7N9禽流感患者機(jī)體免疫系統(tǒng)功能狀況是決定病情發(fā)展和預(yù)后的重要因素。免疫系統(tǒng)包括免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子，其中免疫細(xì)胞分為固有免疫細(xì)胞和適應(yīng)性免疫應(yīng)答細(xì)胞。本研究旨在探討H7N9禽流感患者部分固有免疫細(xì)胞的變化，并闡明其變化的臨床意義。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

參照《人感染H7N9禽流感診療方案》（2014年版）[2]，選取2013年4月—2017年4月蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的H7N9禽流感患者（感染組）25例，其中男20例、女5例，年齡20～83歲。根據(jù)患者臨床治療轉(zhuǎn)歸分為好轉(zhuǎn)組（18例）和死亡組（7例）。以同期蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢健康者25名作為正常對(duì)照組，其中男16名、女9名，年齡25～75歲。2個(gè)組之間性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 檢測(cè)方法

采用肝素鈉抗凝管采集感染組住院第2天清晨、正常對(duì)照組體檢當(dāng)日清晨靜脈血2 mL，上下顛倒混勻5次后備用。治療后所測(cè)數(shù)據(jù)均為患者最后1次抽血檢測(cè)結(jié)果。外周血自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞百分率采用XL AT09010流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman-Coulter公司）及配套試劑檢測(cè)，檢測(cè)數(shù)據(jù)采用Flowjo7.6軟件分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以x ±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 感染組與正常對(duì)照組外周血NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞百分率比較

與正常對(duì)照組比較，感染組治療前外周血NK細(xì)胞百分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），NK T細(xì)胞百分率明顯降低（P=0.001 8），而單核細(xì)胞百分率明顯升高（P=0.006 2）。見(jiàn)表1。

表1 感染組與正常對(duì)照組3種固有免疫細(xì)胞百分率比較（%，）

表1 感染組與正常對(duì)照組3種固有免疫細(xì)胞百分率比較（%，）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 例數(shù) NK細(xì)胞 NK T細(xì)胞 單核細(xì)胞感染組 25 18.47±2.04 11.31±1.20*14.27±3.73*正常對(duì)照組 25 16.68±2.30 18.53±1.72 2.81±0.43

2.2 H7N9禽流感患者中好轉(zhuǎn)組與死亡組治療前后外周血NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞百分率比較

治療前，好轉(zhuǎn)組NK細(xì)胞百分率高于死亡組（P=0.027 1），而2個(gè)組之間NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

與治療前相比，好轉(zhuǎn)組治療后外周血NK細(xì)胞百分率明顯下降（P=0.044 4），NK T細(xì)胞百分率明顯升高（P=0.039 0），而單核細(xì)胞百分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。死亡組治療前后外周血NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞百分率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 好轉(zhuǎn)組與死亡組治療前后外周血NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞百分率比較 （%，）

表2 好轉(zhuǎn)組與死亡組治療前后外周血NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞百分率比較 （%，）

注：與死亡組治療前比較，*P＜0.05；與同組治療前比較，#P＜0.05

組別 例數(shù) NK細(xì)胞 NK T細(xì)胞 單核細(xì)胞好轉(zhuǎn)組治療前 18 20.00±2.52*11.55±1.34 16.39±4.74治療后 18 12.65±2.30#15.58±1.24#23.42±4.18死亡組治療前 7 13.57±1.81 10.55±2.89 7.47±2.81治療后 7 12.62±2.32 4.25±0.73 5.50±1.82

3 討論

免疫細(xì)胞分為適應(yīng)性免疫應(yīng)答細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞）和固有免疫的組成細(xì)胞（NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、單核細(xì)胞等）。如果這些細(xì)胞在數(shù)量上或功能上發(fā)生變化，機(jī)體免疫平衡將被打破，導(dǎo)致疾病發(fā)生或病情惡化。

本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，感染組治療前外周血NK T細(xì)胞百分率明顯降低，而單核細(xì)胞百分率明顯升高。治療前，H7N9禽流感患者中好轉(zhuǎn)組NK細(xì)胞百分率高于死亡組，提示NK細(xì)胞百分比可能與患者的預(yù)后相關(guān)，若NK細(xì)胞百分比較高，則預(yù)后較好；好轉(zhuǎn)組治療后NK細(xì)胞百分率降低，NK T細(xì)胞百分率升高，證明治療后好轉(zhuǎn)的H7N9禽流感患者固有免疫細(xì)胞水平向正常轉(zhuǎn)變，固有免疫功能趨于正常。

黃燕等[3]發(fā)現(xiàn)H7N9禽流感患者好轉(zhuǎn)組治療后外周血Th1細(xì)胞百分率較治療前明顯下降（P＜0.05），可能與患者NK細(xì)胞水平下降，分泌的γ-干擾素（interferon gamma，IFN-γ）減少有關(guān)。單核細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞，可將抗原肽-主要組織相容性復(fù)合物（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ類分子復(fù)合物提呈給CD4+T細(xì)胞，促進(jìn)其發(fā)揮功能。本研究結(jié)果顯示，感染組外周血單核細(xì)胞百分率較高，與毛會(huì)軍等[4]的研究結(jié)果（H7N9禽流感患者治愈組治療后外周血CD4+T絕對(duì)數(shù)較治療前升高）相符。NK T細(xì)胞治療后上升可能與其殺傷病毒感染的靶細(xì)胞的功能相關(guān)。

JI等[5]對(duì)28例H7N9禽流感患者預(yù)后影響因素分析顯示，≥60歲[比值比（odds ratio，OR） =30.0，95%可信區(qū)間（confidence interval，CI） 2.85～315.62]、有基礎(chǔ)肺部疾患（OR=14.40，95%CI 1.30～159.52）、高血壓（OR=6.67，95%CI 1.09～40.43）是死亡的危險(xiǎn)因素。本研究中死亡組年齡為60～83歲，并伴有高血壓等慢性疾病，可能是其死亡的原因之一。

有研究結(jié)果顯示，H7N9感染者與重癥急性呼吸綜合征及H5N1禽流感一樣存在突發(fā)的細(xì)胞因子風(fēng)暴[6]，機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)被打破，表現(xiàn)為免疫抑制作用弱而炎癥反應(yīng)強(qiáng)的相對(duì)過(guò)激或亢進(jìn)狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，H7N9禽流感患者好轉(zhuǎn)組外周血NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞百分率治療前后差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而死亡組治療前后差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由此說(shuō)明細(xì)胞免疫異常在此類病毒性流感的發(fā)病機(jī)制中作用明顯，治療后若患者免疫失衡狀態(tài)得以改善，可能有較好的臨床預(yù)后。因此，監(jiān)測(cè)H7N9禽流感患者免疫細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)，對(duì)患者預(yù)后評(píng)估具有重要的參考價(jià)值。由于本研究中H7N9禽流感患者例數(shù)較少，26例患者中有1例自動(dòng)出院，預(yù)后不明。此外，患者診療是否及時(shí)直接影響著病程長(zhǎng)短及預(yù)后，且患者年齡偏高，部分患者還同時(shí)存在一定的基礎(chǔ)疾病，研究數(shù)據(jù)可能存在一定偏差。