NT-proBNP 檢測假陽性1例報道

金文青，顧嫣婷

（上海市虹口區四川北路街道社區衛生服務中心檢驗科，上海 200080）

慢性心力衰竭的診斷主要依據病史、臨床表現、超聲心動圖、胸片等指標的綜合評價結果[1]。但許多心力衰竭患者癥狀和體征可能表現不特異，因此目前常用的診斷和監測心力衰竭的指標主要有血清氨基末端B型鈉尿肽原（amino-terminal pro-B-type natriuretic peptide，NT-proBNP）和B型鈉尿肽（B-type natriuretic peptide，BNP）。我國相關指南推薦將NT-proBNP和BNP用于慢性心力衰竭的診斷和鑒別診斷，NT-proBNP＜300 pg/mL或BNP＜100 pg/mL可排除心力衰竭[2]。我們在采用雙向側流免疫法測定NT-proBNP時發現1例可能因患者自身抗體引起NT-proBNP假陽性的病例。

1 病例資料

1.1 病例

患者：男，80歲。2017年5月8日摔倒致右髖部疼痛，急送復旦大學附屬華山醫院治療，X線檢查顯示右側股骨粗隆間骨折，經排除手術禁忌后，于5月22日全麻下行內固定術，術中無輸血。術后給予頭孢拉定抗感染。術后收入上海市虹口區四川北路街道社區衛生服務中心進行康復治療。既往病史：有2型糖尿病史，病程7年余，給予門冬胰島素降糖，血糖控制不佳。既往史：20年前有甲狀腺功能亢進癥病史，于上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院治療，具體不詳；否認冠心病、高血壓病、慢性支氣管炎等病史。無胸悶痛、心悸、氣急、少尿、水腫。傳染病史：70余年前有血吸蟲病史，具體治療不詳，否認肝炎、結核、傷寒等傳染病史。手術外傷史：10年前因摔倒致頸椎骨折，于復旦大學附屬華山醫院行內固定術；否認其他手術外傷史。患者于2017年5月19日NT-proBNP首次檢測結果無效，將樣本1∶1稀釋后重新檢測，NT-proBNP＞15 000 pg/mL，達到危急值，遂報告臨床，但臨床反饋該患者未有任何心力衰竭的臨床表現。

1.2 相關實驗室指標檢測結果

患者肝、腎功能指標均正常，血糖為7.89 mmoL/L，糖化血紅蛋白為8.5%，糖類抗原（carbohydrate antigen，CA）19-9為8.2 U/mL，癌胚抗原為3.8 ng/mL，CA15-3為13.8 U/mL，CA125為6.1 U/mL，總前列腺特異抗原為2.1 ng/mL，游離前列腺特異抗原為0.386 ng/mL，CA72-4為1.10 U/mL，細胞角蛋白19片段為2.17 ng/mL， 神經元特異性烯醇化酶為3.3 ng/mL，鱗狀細胞癌相關抗原為1.51 ng/mL，CA242為3.15 U/mL，抗雙鏈DNA抗體＜100 IU/mL，類風濕因子為36 IU/mL，抗鏈球菌溶血素O為197 IU/mL ，抗谷氨酸脫羧酶抗體陰性，胰島素抗體陰性，抗胰島素抗體陰性，血吸蟲抗體陰性，抗核抗體（顆粒型）陽性，肌酸激酶-MB同工酶質量為2.03 ng/mL，血清肌紅蛋白為35 ng/mL，血清高敏肌鈣蛋白T為11.6 pg/mL。

1.3 心電圖及超聲檢查

心電圖：竇性心律，完全性右束支傳導阻滯。B超：左側頸外動脈斑塊形成，甲狀腺未見明顯異常，頸部未見腫大淋巴結；血吸蟲肝病聲像圖，膽、胰、脾、雙腎未見明顯異常，胸腔腹腔未見積液。心臟超聲：左室收縮舒張功能均正常，主動脈瓣輕度反流。

1.4 NT-proBNP檢測方法

采用瑞萊多功能免疫檢測儀[瑞萊生物工程（深圳）有限公司]及配套試劑（雙向側流免疫法）和cobas h232鈉尿肽原檢測卡（膠體金法，瑞士羅氏公司）檢測NT-proBNP。

2 NT-proBNP檢測結果及假陽性原因查找

2.1 NT-proBNP檢測結果

雙向側流免疫法直接檢測樣本顯示檢測結果無效，儀器提示：C1內控帶吸光度值太小，質控失控，請查明原因重新檢測。根據檢測原理推測可能是異嗜性自身抗體競爭結合化學偶合墊上的抗NT-proBNP抗體偶合物導致C1內控帶吸光度值太小。由此將樣本1∶1稀釋后重新檢測，結果為＞15 000 pg/mL。隨后采用膠體金法檢測，同樣顯示質控帶吸光度小，未能檢測出結果。而后將樣本送至上海交通大學醫學院附屬同仁醫院檢驗科，采用ADVIA Centaur XP 全自動化學發光免疫分析儀（德國西門子公司）及配套試劑（化學發光法）檢測BNP，結果為BNP＜5 pg/mL。因此，根據該患者的BNP檢測結果可排除心力衰竭，且與臨床癥狀與體征相符。由此考慮本實驗室檢測系統結果為假陽性，需考慮存在干擾物質。

2.2 回收試驗

采用回收試驗驗證是否存在干擾物質。因為原倍檢測為無效結果，將樣本稀釋后檢測，根據最小稀釋倍數推出期望值，結果顯示實測值與期望值的偏移明顯，說明該患者血清中存在干擾物質。見表1。

表1 NT-proBNP回收實驗

2.3 復檢

7月11日患者樣本送檢，復檢NT-proBNP，檢測結果與之前相同，顯示檢測無效，將樣本送至上海市第十人民醫院檢驗科，采用cobas e601全自動電化學發光免疫分析儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑（電化學發光法）檢測NT-proBNP，結果為72.48 pmol/L，該儀器當天質控為在控。

3 隨訪

該患者于2017年7月14日出院，出院時神清、氣平，心率70次/min，律齊。2017年8月29日隨訪，患者主述未有任何不適，當天采集患者靜脈血，同時做心臟超聲檢查。心臟超聲提示左室收縮舒張功能均正常，主動脈瓣輕度反流。本實驗室NT-proBNP檢測結果仍然為無效。將樣本送至上海蘭衛醫學檢驗所，采用cobas e601全自動電化學發光免疫分析儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑（電化學發光法）檢測NT-proBNP。結果為46.16 pg/mL，儀器當天質控為在控。

4 討論

NT-proBNP升高主要見于急慢性心力衰竭、冠心病、慢性腎病。NT-proBNP是慢性心力衰竭最強的獨立預后因素之一，適用于不同嚴重程度的心力衰竭。如果檢驗結果發生假陽性會引起臨床醫生的錯誤判斷，因此檢測時更應小心謹慎。

本實驗室使用的瑞萊多功能免疫檢測儀的檢測原理為雙向側流免疫法，通過雙抗體夾心法制備而成。檢測時樣本中的NT-proBNP首先與化學偶合墊上的抗NT-proBNP抗體偶合物發生免疫反應，形成免疫復合物。免疫復合物隨著樣本在硝基纖維素膜上層析流動，當免疫復合物移動至硝基纖維素膜上的檢測區（NT-proBNP測試帶）時，與預先包被在硝基纖維素膜上的抗NT-proBNP抗體發生反應，從而被固定在檢測區。血液中的NT-proBNP越多，測試帶上的復合物越多，條帶上的吸光度值就越高。另外，本研究還采用cobas h232鈉尿肽原檢測卡（膠體金法）檢測NT-proBNP。該檢測方法是對NT-proBNP分子表位進行單克隆抗體和多克隆抗體的檢測。在血液樣本中，抗體與NT-proBNP一起形成夾心復合物，將紅細胞從樣本中去除后，血漿流過金標記NT-proBNP夾心復合物聚集的檢測區，出現紅色線即表示陽性。

由于這2種檢測方法均是由2個單克隆抗體組成復合體或是由單克隆抗體或多克隆抗體組成復合體的夾心免疫分析法。由于檢測方法的局限性，當人體內存在人抗大鼠抗體（human anti-mouse antibody，HAMA）或異嗜性自身抗體時，除了正常的抗原抗體復合物之外，還會形成HAMA介導的固相抗體/標記抗體復合物，使檢測結果變為高值，引起假陽性結果。雖然這類檢測方法已經通過特殊方法盡量減少這些抗體對檢測結果的影響，但在已知患者含有這些抗體時仍需小心檢測[3]。本研究根據試劑說明書的要求，排除高濃度甘油三酯、膽紅素及由溶血所致的高濃度血紅蛋白導致的錯誤檢測結果。回收試驗結果顯示該患者可能存在影響結果的抗體。檢測發現該患者抗核抗體為陽性。抗核抗體屬于異嗜性自身抗體的一種。有研究結果顯示，酶標記抗人IgG可與非特異性吸附的IgG或類風濕因子、抗核抗體等自身抗體結合，導致假陽性的產生[4]。故推測該患者自身抗體可能是引起NT-proBNP假陽性的原因[5]。

綜上所述，采用雙向側流免疫法或膠體金法檢測NT-proBNP時顯示結果無效，提示血清中可能存在異嗜性抗體時需注意：（1）了解患者是否已接受大鼠源性單抗免疫藥物治療；（2）檢查樣本是否有高濃度甘油三酯和嚴重黃疸；（3）稀釋后檢測，了解有無干擾性抗體；（4）采用不同的檢測系統檢測同一樣本，以得到可靠的結果；（5）保存樣本，以備復查；（6）告知臨床醫生可能引起NT-proBNP假陽性的干擾因素。