慢性淋巴細胞白血病患者骨髓INF—γ、IL—2、IL—4、IL—10及IL—1β水平的變化及意義

石沁 歐陽紅梅 宋建新

摘 要：目的 探討CLL患者骨髓中INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10及IL-1β水平的變化及意義。方法 選取我院初診CLL患者66例為病例組，根據Binet分期分為BinetA期29例，BinetB期21例，BinetC期16例；選取同期來我院健康體檢者30例為對照組，另取38例治療中的CLL患者為治療組。應用流式細胞儀分析各組患者骨髓INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β表達，觀察在CLL患者不同時期的表達差異。結果 IFN-γ、IL-2表達在CLL各組中均低于對照組（P<0.05），而BinetC期患者表達低于BinetB期（P<0.05），BinetB期低于BinetA期（P<0.05），與Binet分期呈負相關。INF-γ、IL-2在CLL治療后雖高于BinetA期，但P>0.05，而低于對照組（P<0.05）。IL-4、IL-10、IL-1β表達高于對照組（P<0.05），BinetB期高于BinetA期（P<0.05），BinetC期高于BinetB期（P<0.05），與Binet分期呈正相關。治療后IL-4、IL-10、IL-Iβ與BinetA期比較有所降低，但P>0.05，與對照組比較仍高于對照組（P<0.05）。結論 CLL患者骨髓微環境細胞因子表達紊亂，Th1類細胞因子INF-γ、IL-2隨著CLL Binet分期的進展逐漸減低，IL-4、IL-10、IL-1β則逐漸增高，與CLL的發生、發展相關。

關鍵詞：慢性淋巴細胞白血病；骨髓；細胞因子

中圖分類號：R733.72 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.17.047

文章編號：1006-1959（2018）17-0149-03

Abstract：Objective To investigate the changes and significance of INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10 and IL-1β in marrow of CLL patients.Methods 66 patients with newly diagnosed CLL in our hospital were selected as the case group.According to Binet stage，there were 29 cases of BinetA stage，21 cases of BinetB stage and 16 cases of BinetC stage.30 cases of healthy physical examination in our hospital were selected as control group.The CLL patients in the treatment group were the treatment group.Another 38 patients with CLL under treatment were treated.The expressions of INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10 and IL-1β in marrow of each group were analyzed by flow cytometry，and the expression differences in different periods of CLL patients were observed.Results The expressions of IFN-γ and IL-2 in CLL group were lower than those in control group（P<0.05），while those in BinetC stage were lower than BinetB stage（P<0.05），and BinetB stage was lower than BinetA stage（P<0.05），negatively correlated with Binet staging.INF-γ and IL-2 were higher than the BinetA phase after CLL treatment，but P>0.05，which was lower than the control group（P<0.05）.The expressions of IL-4， IL-10 and IL-1β were higher than those of the control group（P<0.05），the BinetB phase was higher than the BinetA phase（P<0.05）， the BinetC phase was higher than the BinetB phase（P<0.05），positively correlated with Binet staging.After treatment，IL-4，IL-10，IL-Iβ and BinetA phase were decreased，but P>0.05，which was still higher than the control group（P<0.05）.Conclusion The expression of cytokines in bone marrow microenvironment of patients with CLL is disordered.The cytokines of Th1 type cytokines INF-γ and IL-2 decrease with the progression of CLL Binet stage，and IL-4，IL-10 and IL-1β gradually increase，and CLL occurrence and development are related.

Key words：Chronic lymphocytic leukemia；Marrow；Cytokines

慢性淋巴細胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是以成熟B淋巴細胞克隆性增殖且腫瘤細胞凋亡受阻、生存期延長為特征的異質性惡性疾病[1]。目前認為CLL的發病機制與免疫異常有關，免疫功能紊亂在其發生、發展過程中起著重要作用[2]。細胞因子是一類小分子分泌蛋白，也是機體免疫系統的重要組成部分，在維持骨髓微環境乃至全身免疫穩態中發揮重要作用。本文應用流式細胞儀檢測CLL不同分期及治療后骨髓微環境中INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10及IL-1β水平的變化，探討腫瘤微環境中細胞因子在CLL發生、發展中的意義。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2014年12月～2018年4月臨滄市云縣人民醫院血液科門診及住院收治的CLL患者66例為病例組，本研究征得所有受試者知情同意。其中男39例，女27例，年齡49～84歲，平均年齡（67.53±15.48）歲。根據Binet分期將患者分為BinetA期29例，BinetB期21例，BinetC期16例。選取同期來我院健康體檢者30例為對照組，其中男18例，女12例，年齡48～76歲，平均年齡（61.51±12.64）歲。另取隨訪過程中38例符合中國慢性淋巴細胞白血病的診斷與治療指南（2011版）[3]的患者予以治療，作為治療組。各組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2主要試劑與儀器 INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β試劑盒購自BD公司。流式細胞儀為Beckman Coulter公司FC500。

1.3方法

1.3.1標本采集 常規骨髓穿刺，抽取骨髓液2.0 ml EDTA抗凝，3000 r/min離心30 min，收集上清，-80 ℃凍存待測。

1.3.2 INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β檢測 按照試劑盒說明書設計流式細胞術方案，繪制標準曲線；計算所需微球量，混合微球，以1500 r/min離心10 min，棄上清，加入丟棄上清相同量的增強劑混合待用。取試管編號，每管加入20 μl離心后的骨髓上清液、混合微球50 μl及PE染料50 μl，避光孵育3 h，加入wash buffer液600 ml混勻，1500 r/min離心10 min，棄上清，加入300 μl wash buffer液混勻上機檢測，用FCAP分析軟件分析。

1.4統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，應用Pearson行相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β在各組CLL中的表達 與對照組相比，INF-γ、IL-2在CLL各組中均減低，差異具有統計學意義（P<0.05）；而BinetC期患者表達低于BinetB期，BinetB期低于BinetA期（P<0.05）；INF-γ、IL-2在CLL治療后雖高于BinetA期，但差異無統計學意義（P>0.05），而低于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。IL-1β、IL-4、IL-10在CLL各組表達高于對照組（P<0.05），BinetB期高于BinetA期（P<0.05），BinetC期高于BinetB期（P<0.05）；治療后IL-Iβ、IL-4、IL-10與BinetA期比較有所降低，但差異無統計學意義（P>0.05），與對照組比較仍高于對照組（P<0.05），見表1。

2.2 IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ、IL-1β在CLL各組中的相關性 在BinetA期、BinetB期、BinetC期中IFN-γ、IL-2與CLL的分期呈明顯負相關（r=-0.242、-0.304、-0.164、-0.231、-0.179、-0.207，P<0.05），IL-4、IL-10、IL-1β與疾病的分期呈正相關（r=0.846、0.793、0.629、0.751、0.637、0.892、0.749、0.717、0.673，P<0.05）。

3討論

CLL是具有高度異質性的惡性疾病，同為CLL的患者，由于分期不同，其預后也不盡相同。有研究表明，在CLL微環境中產生的細胞因子水平的變化，細胞因子的多效性、重疊性作用及平衡關系，決定著CLL的嚴重程度[4]。在對急性白血病和慢性粒細胞白血病的研究中發現，患者血清或骨髓微環境中IL-2、INF-γ水平明顯減低，且與患者病情進展及預后呈負相關；Th2類細胞因子及IL-1β病情進展及預后呈正相關[5-7]。

本次研究結果顯示，CLL骨髓Th1類細胞因子IL-2、INF-γ低于對照組，隨著CLL疾病Binet分期進展，IL-2、INF-γ水平逐漸降低且與Binet分期呈負相關，即對照組>BinetA期>BinetB期>BinetC期；而Th2類細胞因子IL-4、IL-10及多功能炎性因子IL-1β則高于對照組，而隨著CLL疾病Binet分期進展進一步增高且與Binet分期呈正相關，即對照組

綜上所述，INF-γ、IL-2隨著CLL Binet分期的進展逐漸減低，IL-4、IL-10、IL-1β則逐漸增高，與CLL的發生、發展相關。

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收稿日期：2018-6-11；修回日期：2018-6-25

編輯/王海靜