肺癌患者外周血腫瘤異常蛋白的表達及臨床意義

徐瑞彤，徐艷玲，王彤，成紅艷，戴冠群

南京醫科大學第一附屬醫院全科醫學科，南京210029

肺癌是在目前各種腫瘤疾病中發病率和病死率最高的惡性腫瘤，據統計，2014年美國新發肺癌患者約占全部腫瘤患者的13%，而在新發腫瘤病死的患者中，肺癌的病死率約占27%[1]。多數肺癌患者被確診時已屬于中晚期，錯失了行根治性外科手術的機會，這也是造成肺癌預后差的根本原因[2]。腫瘤標志物是指特征性存在于惡性腫瘤細胞中，或是由惡性腫瘤細胞異常產生的物質，或是宿主對腫瘤的刺激反應而產生，并能夠反映腫瘤發生發展、監測腫瘤對治療的反應的一類物質。臨床中常規推薦的肺癌相關腫瘤標志物具體如下：癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、神經元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE），細胞角質蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）、胃泌素釋放肽前體（progastrin-releasing peptide，ProGRP）以及鱗狀上皮細胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCAg）等[3]。鑒于這些腫瘤標志物在肺癌診斷中的靈敏度和特異度相對較低[4-5]，因此，確定能夠協助診斷肺癌的新型腫瘤標志物迫在眉睫。腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是各種正常細胞惡變時產生的標志性物質和共性物質，作為早期診斷腫瘤的腫瘤標志物，其具有特異度、靈敏度高的特點。TAP檢測技術通過“糖蛋白質變”，即“糖蛋白中糖鏈結構的異常變化”輔助診斷腫瘤，而現有的腫瘤標志物通過“糖蛋白量變”輔助診斷腫瘤，二者相互結合、綜合判斷，可以顯著提高對腫瘤輔助診斷的準確性[6-7]。本研究通過檢測肺癌患者及健康者外周血中TAP的表達水平，探討TAP在肺癌組織中的表達及臨床意義，旨在為臨床中肺癌的早期診斷與篩查提供科學、有效的方法，從而對目前的肺癌篩查技術進行有益的補充，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2016年7月至2017年12月于南京醫科大學第一附屬醫院全科醫學科經組織病理學檢查確診為肺癌的初治患者125例為肺癌組。納入標準：①經組織病理學確診為肺癌；②所有患者均未接受放療、化療、靶向藥物治療或手術治療。排除標準：①合并嚴重心、肝、腎功能不全；②合并免疫系統疾病；③合并心腦血管疾病；④合并造血系統疾病；⑤合并嚴重感染性疾病。選取同期于本院體檢的120例健康者作為健康對照組。納入標準：①年齡＞18歲；②全身體檢基本正常。排除標準：①有惡性腫瘤既往史及現病史；②合并嚴重感染性疾病或疾病急性加重；③合并肺部基礎疾病；④胸部X片表現異常者。125例肺癌患者中，男91例，女34例；年齡為39～90歲，平均年齡為（65.0±10.6）歲，年齡＜60歲者34例，≥60歲者91例；TNM分期：I+Ⅱ期54例（43.2%），Ⅲ+Ⅳ期71例（56.8%）；病理類型：肺腺癌88例，肺鱗癌25例，小細胞肺癌12例。120例健康者中，男性85例，女性35例；年齡為41～88歲，平均年齡為（65.0±14.2）歲，年齡＜60歲者45例，≥60歲者75例。兩組患者的性別、年齡等基線資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經南京醫科大學第一附屬醫院醫學倫理委員會批準，所有研究對象均對本研究知情同意并自愿簽署知情同意書。

1.2 標本采集及檢測方法

入組前，于清晨空腹狀態下采集兩組研究對象的外周靜脈血25 μl，制作成3份血涂片，自然晾干。待血涂片晾干后將試劑搖勻并靜置10 min，使用膠頭滴管吸取上清液，垂直滴加3滴至血涂片上，靜置待干2 h，在4倍物鏡下觀察TAP凝聚顆粒。TAP檢測綜合診斷儀和TAP凝聚助劑由浙江瑞生醫療科技有限公司提供，檢測嚴格按照說明書進行操作。

1.3 評價標準

鏡下觀察可見不規則圓形晶型顆粒，呈淡綠色、淡黃色或棕黃色，顆粒中心色淡且亮，有屈光性，四周混合物較多且呈棕黑色或墨綠色，則判斷為TAP表達陽性；若未觀察到上述顆粒，則判斷為TAP表達陰性。TAP凝聚物面積＜121 μm2，判斷為TAP表達陰性，或表示無明顯凝聚物；121 μm2≤凝聚物面積＜225 μm2，判斷為TAP表達陽性，或表示凝聚物較小；凝聚物面積≥225 μm2，判斷為TAP表達陽性，或表示凝聚物面積較大。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件對數據進行統計分析。計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TAP陽性表達率的比較

肺癌組患者肺癌組織中TAP的陽性表達率為66.4%（83/125），明顯高于健康對照組健康者正常組織中的15.0%（18/120），差異有統計學意義（χ2=66.757，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征肺癌患者TAP表達情況的比較

Ⅲ+Ⅳ期肺癌組織中的TAP的陽性表達率明顯高于I+Ⅱ期肺癌組織，差異有統計學意義（P＜0.01）；不同性別、年齡、組織學分型肺癌患者的肺癌組織中TAP的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征肺癌患者肺癌組織中TAP的表達情況

3 討論

近年來，肺癌的發病率、病死率呈逐年升高趨勢，嚴重威脅了人類的生命健康和安全，且早期肺癌缺乏特異性的臨床表現，患者確診時多已處于肺癌晚期，因此，尋求對早期肺癌的診斷方法對提高患者的生存率至關重要。TAP是惡性腫瘤發展過程中具有共同特征的糖蛋白。與正常的糖鏈蛋白相比，TAP具有較長的糖鏈、更復雜的分支結構、異常的質量和數量，外周血中TAP的表達水平可以間接地反映腫瘤細胞的數量和腫瘤的惡性程度[8-10]。

目前，大部分肺癌患者死于轉移和復發，早期診斷并且及時發現轉移對于延長患者的生存時間和提高患者的生活質量非常重要。盡管CT掃描和超聲波檢查可以被用來識別肺癌患者的轉移，但它們也具有一定的局限性[11-12]。正電子發射斷層顯像-計算機斷層掃描（positron emission tomography-computed tomography，PET-CT）對于局部淋巴結轉移和遠處轉移的評估價值較高，但費用亦較高，大多數患者難以負擔[13]。腫瘤標志物對于早期發現并診斷肺癌具有一定的臨床價值，然而目前臨床廣泛應用的肺癌相關血清學腫瘤標志物的靈敏度和特異度有限。對于肺癌高危人群，傾向于聯合檢測多種腫瘤標志物，從而達到對肺癌患者早期發現、早期診斷的目的。TAP檢測技術在1個反應體系中對幾十種糖鏈異常的腫瘤標志物進行綜合檢測，在促凝劑的幫助下，TAP凝集，形成特殊的晶型顆粒，繼而測量凝聚物面積。這顯著提高了腫瘤檢測的靈敏度和準確性，即TAP檢測比傳統腫瘤標志物檢測的靈敏度、特異度更高，彌補了傳統腫瘤標志物檢測“漏檢現象嚴重，無法早期發現腫瘤”的不足，且費用低、無創傷，更適宜腫瘤篩查[14]。

本研究結果顯示，肺癌組患者的肺癌組織中TAP的陽性表達率為66.4%，明顯高于對照組的15.0%，且TNM分期較晚的肺癌患者肺癌組織中TAP的陽性表達率明顯高于TNM分期較早的肺癌患者（P＜0.01），表明TAP的表達水平與肺癌的發生可能有關。這可能是由于在肺癌的發生過程中，惡性腫瘤組織產生多種異常的糖鏈蛋白，從而表現為TAP表達水平的升高。

綜上所述，TAP可以作為早期發現肺癌的重要指標，結合患者的癥狀、體征、其他腫瘤標志物和影像學檢查等，可在一定程度上提高對肺癌的檢出率。但本研究仍存在一定的局限性，例如樣本量相對較少，并且未對患者進行隨訪觀察。后續擬擴大樣本并且進行前瞻性的研究，從而進一步證實并豐富該研究的結果。有些研究指出TAP可以作為評估腫瘤患者化療效果的重要指標[15-16]，其可能的機制是由于在化療的過程中，對于治療有效的患者，其腫瘤細胞發生了縮小或者凋亡，惡性腫瘤組織產生的異常糖鏈蛋白減少，TAP的形成也隨之減少。但是其能否作為評估肺癌患者治療效果的指標，仍需要更進一步深入的研究。