羥基紅花黃色素A納米乳在大鼠體內的藥動學研究

黃鈺茹，郭 綺，石明芯，張 杉，張景勍，趙 華

(1. 重慶醫(yī)科大學藥學院重慶藥物高校工程研究中心，重慶 400016；2. 重慶市藥品技術審評認證中心，重慶 401120；3.四川大學華西第二醫(yī)院藥劑科，四川 成都 610041)

羥基紅花黃色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是紅花中的主要成分，作用廣泛，可降低血壓、保護心肌、抗腫瘤等，尤其對心腦血管疾病有較好的治療效果[1-3]。HSYA具有高水溶性，但腸膜通透性特別差，穩(wěn)定性低，導致口服生物利用度很低[4]。目前，只有HSYA氯化鈉注射劑已被批準臨床使用，但作為治療慢性疾病藥物，長期使用注射劑使用不便，又因其具有安全性差、制備復雜、成本高等缺點，因此迫切需要口服制劑。磷脂屬于兩親脂質，其脂溶性和生物膜相容性均較好，藥物可與磷脂結合制備成磷脂復合物，從而提高其生物利用度[5]。文獻報道[6]，藥物與羥丙基-β-環(huán)糊精結合后，穩(wěn)定性增加且生物利用度提高；納米乳劑可以增強口服藥物滲透性，減緩藥物釋放，促進胃腸道對藥物的吸收，應用前景廣闊[7]。本實驗將HSYA制備成HSYA羥丙基-β-環(huán)糊精磷脂復合物后，再將復合物制備成油包水型HSYA復合物納米乳(HSYA complex nanoemulsion，HCNE)，期望結合磷脂復合物和納米乳的優(yōu)點，在低劑量給藥條件下，提高HSYA的口服生物利用度。

1 材料與方法

1.1儀器AB204S電子分析天平(瑞士Mettler Toledo儀器公司)；QL-901型旋渦混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；高效液相儀(日本SHIMADZU公司)。

1.2試藥HSYA(純度98%，浙江永寧藥業(yè)股份有限公司)；HCNE(實驗室自制)；蘆丁(純度98%，成都曼思特生物科技有限公司)；甲醇、乙腈(色譜純，美國天地有限公司)，其余試劑均為分析純。

1.3實驗動物18只SD大鼠，♂，體質量(230±20)g，購自重慶醫(yī)科大學實驗動物中心，許可證號：SCXK(渝)2016-0001。

2 方法

2.1血漿樣品處理方法精密量取100 μL血漿，加入1 mmol·L-1高氯酸50 μL和50 mg·L-1蘆丁內標溶液10 μL，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液進樣測定。

2.2色譜條件色譜柱：Hypersil ODS2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測波長：403 nm；流動相：乙腈(A)-20 mmol·L-1磷酸緩沖溶液(B，pH=3.5)，梯度洗脫：0～3 min，10% A～20% A；3～13 min，20% A；流速：1 mL·min-1；進樣量：20 μL。

2.3給藥方案與樣品采集、處理18只SD大鼠隨機分成3組，禁食12 h。其中，1、2組分別灌胃HSYA生理鹽水溶液和HCNE，第3組尾靜脈注射HSYA生理鹽水溶液(等同于HSYA 6 mg·kg-1)。1、2組分別于給藥后5、15、30、45 min，以及1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24、48、72 h(第3組給藥后0 min，其余時間點同1、2組)眼眶采血0.3～0.5 mL于肝素化EP管中，6 000 r·min-1離心10 min后，取上清液于-80℃保存待測。

2.4藥動學研究將藥代動力學數(shù)據(jù)用DAS軟件(2.1.1版)進行處理，得到主要藥代動力學參數(shù)，并將HSYA和HCNE的血藥濃度-時間曲線下面積(area under concentration-time curve,AUC(0-72 h))和峰濃度(peak concentration,Cmax)經(jīng)對數(shù)轉化后，進行[1-2α] 90%可信區(qū)間考察，運用統(tǒng)計學分析AUC(0-72 h)、Cmax和達峰時間(peak time,Tmax)(非參數(shù)統(tǒng)計的Wilcoxon符號秩和檢驗)，評價HSYA和HCNE是否具有生物等效性，檢驗標準α=0.05[8]。

3 結果

3.1HCNE藥動學研究靜脈注射的HSYA血藥濃度與時間變化曲線圖見Fig 1，經(jīng)藥代曲線從0 h開始呈下降趨勢，4 h左右?guī)缀跸M。口服給予HSYA和HCNE后藥代曲線如Fig 2所示，在整個藥物代謝期間，HSYA血藥濃度偏低，HCNE的整體血藥濃度值均高于HSYA，HCNE達到最大血藥濃度時間比HSYA晚約0.5 h，其中最大約為HSYA的3倍。

經(jīng)DAS 軟件(2.1.1 版)對HSYA和HCNE數(shù)據(jù)計算后，得出非室模型主要藥動學參數(shù)見Tab 1。分析數(shù)據(jù)可看出，給藥方式為靜脈注射時，HSYA的AUC和Cmax均較大，Tmax為0.03 h，說明HSYA在體內迅速達到最大血藥濃度；給藥方式為口服灌胃時，HSYA與HCNE相比，Cmax和AUC(0-72 h)分別增加了164.38 ng·L-1和449.28 ng·L-1·h-1，證明口服吸收增加；清除率(clearance,Cl)和表觀分布容積(apparent volume of distribution,V)分別減少了1.4 L·h-1·kg-1和15.6 L·kg-1，表明體內停留時間增加。房室模型主要藥動學參數(shù)見Tab 2，從AUC(0-72 h)的比較看出，與HSYA相比，HCNE的相對生物利用度約為131.71%(非房室模型)或157.14%(房室模型)，HSYA的絕對生物利用度為5.94%(非房室模型)或4.99%(房室模型)。非房室模型和房室模型得出的結果幾乎一致。對兩種分析結果進行對比，HCNE均提高了HSYA的血藥濃度，降低了清除率，提高了HSYA的口服生物利用度。

3.2生物等效性評價生物等效性比較結果見Tab 3，AUC(0-72h)和Cmax分別超出規(guī)定范圍80%～125%和70%～143%。統(tǒng)計學分別分析AUC(0-72h)、Cmax和Tmax，得出AUC(0-72h)和Tmax的P>0.05，差異無顯著性，Cmax的P<0.05，差異有顯著性。綜合結果表明，HSYA與HCNE二者生物不等效，后者具有較高的生物利用度。

Tab 1 Non-compartment pharmacokinetic model parameters with single dose injection HSYA, oral HSYA and HCNE in rats n=6)

C0: the initial concentration of injection; Fr: relative bioavailability; Fa: absolute bioavailablity

Tab 2 Compartment pharmacokinetic model parameters with single dose injection HSYA, oral HSYA and HCNE in rats n=6)

Tab 3 The bioequivalence comparison of HSYA and HCNE after intragastric administration (at the identical dose of 6 mg·kg-1 of HSYA, n=6)

Fig 1 Mean plasma concentration-time curve of HSYAafter a single intravenous injection administration n=6)

Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of HSYA and HCNE after a single oral administration n=6)

4 討論

將中藥制備成羥丙基-β-環(huán)糊精磷脂復合物，較單一的磷脂復合物或羥丙基-β-環(huán)糊精包合物更能促進藥物的吸收，更有利于提高藥物的生物利用度[9-11]。目前，生物藥劑學III類藥物HSYA的研究中，暫無單獨將其制備成羥丙基-β-環(huán)糊精磷脂復合物后的藥代動力學文獻報道，但生物藥劑學II類藥物如姜黃素有相關研究。本團隊前期研究了姜黃素羥丙基-β-環(huán)糊精磷脂復合物、姜黃素羥丙基-β-環(huán)糊精包合物、姜黃素磷脂復合物、姜黃素原料藥在大鼠體內的藥動學特征，結果表明，前三者姜黃素制劑的AUC分別為姜黃素原料藥的5.89、1.49、1.17倍，證實復合制劑效果優(yōu)于單一制劑[12]。故在此基礎上，本研究制備了HCNE，藥動學結果表明，HCNE提高了HSYA的口服生物利用度。

Lv等[13]選用自雙重乳化藥物遞送系統(tǒng)(self-double-emulsifying drug delivery systems, SDEDDS)來改善HSYA的吸收，其將大豆磷脂、中鏈甘油三酯、油酸等輔料與HSYA混合，制備成w/o/w雙層自微乳，HSYA雙層自微乳相對于HSYA的生物利用度為217%。本研究制備的HCNE相對于HSYA的生物利用度為132%，兩者差異可能是由于劑型與給藥劑量不同。在藥動學研究中，Lv等[13]制備的HSYA雙層自微乳，不到10 h血藥濃度幾乎為零，HCNE在24 h仍保持較高血藥濃度，說明HCNE緩釋效應更好。再與HCNE制備工藝相比，HSYA雙層自微乳制備更復雜，且SDEDDS可引起腸黏膜損傷，致一定程度的毒性，安全性有待改善；而HCNE制備簡單，易于產(chǎn)業(yè)化。周鵬等[14]研究證明，HSYA的轉運與其質量濃度和時間呈正相關，HCNE的生物利用度提高不夠明顯，可能與給藥劑量較低有關。本實驗可為后期加大給藥劑量的劑型研究提供參考。

(致謝: 本實驗在重慶醫(yī)科大學重慶高校藥物工程研究中心完成，在此真誠感謝實驗室的所有老師和同學。)