microRNA—26a和microRNA—199a在胃癌患者血清中的表達檢測及其臨床意義

周軼冰

[摘要] 目的 探討胃癌患者血清中microRNA-26a和microRNA-199a表達檢測及其臨床意義。 方法 收集佳木斯市中心醫院2015年1月～2017年12月期間確診且行根治術的胃癌患者20例作為實驗組，健康人群20例作為對照組，使用qRT-PCR方法對實驗組和對照組血清中microRNA-26a和microRNA-199a的表達水平進行定量檢測，分析檢測結果的臨床意義。 結果 microRNA-26a在實驗組術前血清樣本中的表達水平（1.76±0.54）明顯低于對照組（5.33±1.12）（t=4.55，P=0.002），也明顯低于術后血清樣本中的表達水平（3.89±0.87）（t=5.11，P=0.001）；microRNA-199a在實驗組術前血清樣本中的表達水平（29.54±3.12）明顯高于對照組（6.07±1.34）（t=6.19，P=0.001），也明顯高于術后血清樣本中的表達水平（15.87±2.64）（t=5.76，P=0.001）。 結論 microRNA-26a和microRNA-199a有可能成為胃癌早期診斷的血清標記物。

[關鍵詞] 胃癌；血清樣本；microRNA-26a；microRNA-199a

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2018）23-0022-03

Detection and clinical significance of microRNA-26a and microRNA-199a in serum of patients with gastric cancer

ZHOU Yibing

Department of Second General Surgery， Jiamusi Central Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

[Abstract] Objective To investigate the detection and clinical significance of microRNA-26a and microRNA-199a in serum of patients with gastric cancer. Methods A total of 20 patients who were diagnosed with gastric cancer and underwent radical resection in Jiamusi Central Hospital from January 2015 to December 2017 were selected as the experimental group. 20 healthy people were selected as the control group. The expression levels of microRNA-26a and microRNA-199a in two groups were detected quantitatively by qRT-PCR. The clinical significance of the detection results was analyzed. Results The expression level of microRNA-26a in the preoperative serum samples of the experimental group （1.76±0.54） was significantly lower than that in the control group （5.33±1.12） （t=4.55， P=0.002）， which was also significantly lower than that of the control group after surgery（3.89±0.87） （t=5.11， P=0.001）. The expression level of microRNA-199a in the preoperative serum samples of the experimental group（29.54±3.12） was significantly higher than that in the control group（6.07±1.34） （t=6.19， P=0.001）， and the former was also significantly higher than that in postoperative serum samples（15.87±2.64）（t=5.76， P=0.001）. Conclusion microRNA-26a and microRNA-199a may become serum markers for the early diagnosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； Serum samples； microRNA-26a； microRNA-199a

胃癌是一種死亡率極高的惡性腫瘤，在我國早期診斷率較低，患者確診時已經進入中晚期，導致手術治療的效果并不理想。胃癌的發生是多因素共同作用的結果，分為多個階段，由多種基因共同參與，通常是由于癌基因和抑癌基因表達失調所引起的。microRNA長度約為21個核苷酸，廣泛存在于各種真核生物中，是一種非蛋白質編碼RNA。近年來，國內外許多學者均致力于microRNA在腫瘤組織和血清中異常表達的研究工作，已經證實，microRNA參與很多癌基因和抑癌基因的調控，對癌細胞的增殖、分化和凋亡均起著關鍵作用[1-3]。

本研究選取佳木斯市中心醫院2015年1月～2017年12月期間確診且行根治術的胃癌患者20例作為實驗組，在我院進行健康體檢的健康人群20例作為對照組，使用qRT-PCR方法對實驗組和對照組血清中microRNA-26a和microRNA-199a的表達水平進行定量檢測，分析檢測結果的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集佳木斯市中心醫院2015年1月～2017年12月期間確診且行根治術的胃癌患者20例作為實驗組，入組標準[4，5]：①經我院胃鏡檢查，取病理診斷為胃癌且行手術切除治療，術后由病理學確診；②患者手術過程中未出現大出血；③血清標本采集前未進行放化療；④患者均為初發腫瘤，并無其他任何惡性病史。實驗組中男12例，女8例，患者平均年齡（55.6±4.2）歲，根據腫瘤的TNM分期法對實驗組中的樣本進行分期。隨機選取在我院進行健康體檢的健康人群20例作為對照組，其中男10例，女10例，平均年齡（58.5±6.2）歲，兩組一般資料情況見表1。

1.2 方法

1.2.1 收集血清樣本 采用真空采血管裝入促凝劑作為促凝管，抽取實驗組中患者術前以及術后7 d外周血5 mL，同時抽取對照組外周血5 mL，將收集的血清樣本置入促凝管中，放入離心機，3000轉速離心10 min，取管內上清液置于2 mL離心管內，放入冰箱保存，溫度-80℃[6-8]。

1.2.2 提取血清中總RNA 取血清樣本20 μL，加入裂解液，置入振蕩器混勻，再加檢測外參CR100，繼續振蕩混勻；將樣本放置5 min，分離核酸蛋白復合物，加入同體積氯仿，繼續振蕩混勻，再將樣本放置5 min；將樣本放入離心機內離心，取無色水相置入新的離心管；將1 μL無水乙醇加入500 μL轉移液，轉入吸附柱，放置2 min后離心機離心；向吸附柱加入去蛋白液和漂洗液，反復離心棄廢液，將吸附柱放置在超凈工作臺上晾干后轉入新的離心管，加入DEPC處理水20 μL，放置2 min后離心機離心，收集總RNA，放入冰箱備用，溫度-80℃[9-11]。

1.3 統計學方法

所有數據均采用SPSS20.0統計學軟件進行統計分析，其中年齡、腫瘤大小等患者的計量資料的組間差異使用非配對t檢驗，具體數據采用（x±s）表示，而各組間microRNA-26a和microRNA-199a表達水平的差異則采用U檢驗，P<0.05為差異有統計學意義，所有P均為雙側。

2結果

采用qRT-PCR法對實驗組術前、術后和對照組中血清樣本的microRNA-26a和microRNA-199a表達水平進行定量檢測，結果發現microRNA-26a在實驗組術前血清樣本中的表達水平（1.76±0.54）明顯低于對照組（5.33±1.12）（t=4.55，P=0.002），也明顯低于術后血清樣本中的表達水平（3.89±0.87）（t=5.11，P=0.001）；microRNA-199a在實驗組術前血清樣本中的表達水平（29.54±3.12）明顯高于對照組（6.07±1.34）（t=6.19，P=0.001），也明顯高于術后血清樣本中的表達水平（15.87±2.64）（t=5.76，P=0.001），見表2。

3討論

胃癌具有早期診斷率低、死亡率高等特點，是多因素共同作用的結果，分為多個階段，由多種基因共同參與，通常是由于癌基因與抑癌基因表達失調所引起的。近年來，國內外許多學者均致力于microRNA在腫瘤組織和血清中異常表達的研究工作，已經證實，microRNA參與很多癌基因和抑癌基因的調控，對癌細胞的增殖、分化和凋亡均起著關鍵作用。

近年來，很多學者均把研究焦點集中在了惡性腫瘤的早期診斷上，尤其是腫瘤的血清標記物以其無創、易取材、檢測方便等特點得到了廣泛的重視。胃癌是一種死亡率極高的惡性腫瘤，在我國早期診斷率較低，患者確診時已經進入到中晚期，導致手術治療的效果并不理想，并且臨床上常用的一些腫瘤標記物對于胃癌缺乏敏感性，因此尋找胃癌早期診斷的血清標物就尤為重要。microRNA長度約為21個核苷酸，廣泛存在于各種真核生物中，是一種非蛋白質編碼RNA，通過對癌基因和抑癌基因的調控參與腫瘤細胞增殖、分化的整個過程[12]。

本研究初步探討了胃癌患者血清中microRNA-26a和microRNA-199a表達檢測及其臨床意義，我們對20例胃癌患者實驗組術前、術后和對照組的血清樣本中microRNA-26a和microRNA-199a的表達水平進行了定量檢測，結果發現胃癌患者術前血清樣本中microRNA-26a的表達水平顯著低于術后，而胃癌患者術后血清樣本中microRNA-26a的表達水平又顯著低于對照組；胃癌患者術前血清樣本中microRNA-199a的表達水平顯著高于術后，而胃癌患者術后血清樣本中microRNA-199a的表達水平又顯著高于對照組，因此microRNA-26a和microRNA-199a有可能成為胃癌早期診斷的血清標記物[13，14]。

microRNA-26a是一種能夠抑制多種促癌基因微小RNA，通過調控下游靶基因，抑制腫瘤細胞的增殖和分化，從而抑制腫瘤的形成，有研究已經證實，microRNA-26a在胃癌組織中的表達水平也顯著降低，這與本研究結果一致，通過對患者病理特征的研究，發現microRNA-26a的表達水平與TNM分期存在一定的相關性，胃癌患者TNM分期越晚，microRNA-26a的表達水平越低，因此microRNA-26a不僅可以作為胃癌早期診斷的血清標記物，還有可能成為判斷胃癌患者TNM分期以及預后情況的標記物[15]。

很多研究顯示microRNA-199a和多種腫瘤均存在著表達的差異，本研究發現microRNA-199a在胃癌患者血清樣本中的表達顯著升高，并且在病理分級、TNM分期不同的樣本中，microRNA-199a的表達水平也具有一定的差異性，是否與其他的臨床指標有關還有待證實。

綜上所述，胃癌患者術前血清樣本中microRNA-26a和microRNA-199a的表達水平有顯著變化，術前、術后血清樣本中的表達也有顯著差異，這些均提示microRNA-26a和microRNA-199a有可能成為胃癌早期診斷的血清標記物，但由于本研究的實驗樣本數量有限，對microRNA-26a和microRNA-199a與胃癌的分期、分型以及浸潤程度的相關性還有待更進一步的研究。

[參考文獻]

[1] 毛玉娣，丁西平，王華. 微小RNA與胃癌關系的研究進展[J]. 中國藥理學通報，2016，32（6）：756-760.

[2] 王文江. 新輔助化療對晚期乳腺癌患者血漿microRNA及腫瘤相關指標的影響[J]. 海南醫學院學報，2015， 21（11）：1509-1511，1515.

[3] 付海龍，楊歡，毛佳慧，等. 胃癌外體（exosome）內miRNA-1的檢測分析[J]. 臨床檢驗雜志，2016，34（2）：103-106.

[4] 唐云云，唐海林，蘇琦. microRNA在胃癌中的生物學作用[J]. 中國腫瘤臨床，2014，41（2）：131-133.

[5] Shin VY，Ng EK，Chan V，et al. A three-miRNA signature as promising non-invasive diagnostic marker for gastric cancer[J]. Molecular Cancer，2015，14（1）：202.

[6] 國麗，黃超，葉美，等. 胃癌中P16，Survivin和Rb基因甲基化狀態[J]. 實用醫學雜志，2016，32（14）：2380-2382.

[7] 彭昭，田翠時，王貴生，等. PCNA、8-OhdG在胃癌組織中的表達及意義[J]. 實用醫學雜志，2016，32（8）：1274-1276.

[8] 張冰潔，金由辛，馬中良. microRNA在腫瘤中的作用[J].自然雜志，2014，10（5）：364-372.

[9] 董兵斌，徐阿曼. 胃癌手術風險及影響因素研究現狀[J].中國腫瘤臨床，2015，42（2）：125-128.

[10] Tong F，Cao P，Yin Y，et al. MicroRNAs in gastric cancer：From benchtop to bedside[J]. Digestive Diseases and Sciences，2014，59（1）：24-30.

[11] 鄒文斌，李兆申. 中國胃癌發病率及死亡率研究進展[J].中國實用內科雜志，2014，34（4）：408-415.

[12] Jayawardana K，Schramm SJ，Tembe V，et al. Identification，review，and systematic cross-validation of microrna prognostic signatures in metastatic melanoma[J]. J Invest Dermatol，2016，136（1）：245-254.

[13] 陳章乾，金楊晟，吳慶，等. 胃癌多藥耐藥相關microRNA的篩選和鑒定[J]. 現代生物醫學進展，2014，14（17）：3201-3205.

[14] Hu Y，Liu J，Jiang B，et al. miR-199a-5p loss up-regulated DDR1 aggravated colorating epithelial-to-mesenchymal[J]. Dig Dis Sci，2014，59（9）：2163-2172.

[15] Yin J，Hou P，Wu Z，et al. Circulating miR-375 and miR-199a-3p as potential biomarkers for the diagnosis of hepatocellular carcinoma[J]. Tumor Biol，2015，36（6）：4501-4507.

（收稿日期：2018-05-21）