溫腎固疏方對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝以及脂代謝的影響

舒高 宋曉飛 張軻 陳曉東 梁鵬展

1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510006 2. 南陽(yáng)市中心醫(yī)院骨科，河南 南陽(yáng) 473000 3. 宜賓市第二人民醫(yī)院小兒外科，四川 宜賓 644000 4. 深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳 518000 5. 深圳平樂(lè)骨傷科醫(yī)院，廣東 深圳 518000

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是絕經(jīng)后女性較為常見(jiàn)的一種全身性骨疾病。絕經(jīng)后女性由于雌激素分泌不足，導(dǎo)致骨吸收抑制能力衰退，使得骨量流失加快；此外，有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)女性雌激素水平下降還會(huì)導(dǎo)致血脂代謝異常的發(fā)生發(fā)展[1]，成為影響絕經(jīng)后女性身體健康和生活質(zhì)量的社會(huì)衛(wèi)生問(wèn)題。西醫(yī)中常用的補(bǔ)充雌激素療法在治療過(guò)程中會(huì)增加患者發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)[2]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎對(duì)骨骼的生長(zhǎng)具有重要的作用。近年來(lái)有研究報(bào)道指出，采用中醫(yī)補(bǔ)腎療法可以改善絕經(jīng)后女性的骨質(zhì)疏松癥狀[3]。本研究在建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型的基礎(chǔ)上，研究溫腎固疏方對(duì)大鼠模型骨代謝及脂代謝指標(biāo)的影響，探討其改善骨質(zhì)疏松和脂代謝異常的的作用機(jī)制，以期進(jìn)一步發(fā)掘中醫(yī)藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥及脂代謝異常的臨床價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

80只雌性未孕SPF大鼠(200±20)g由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(豫)K2016-0002。大鼠在12 h：12 h的循環(huán)照明時(shí)間環(huán)境中飼養(yǎng)，溫度為22.0～24.0°C，濕度為50%～60%。所有實(shí)驗(yàn)均按照動(dòng)物保護(hù)與利用準(zhǔn)則(批準(zhǔn)文號(hào)SCXK 2012-0012)進(jìn)行。

1.2 試劑

溫腎固疏方由本院藥房提供。I型膠原氨基端延長(zhǎng)肽(PING)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)、骨保護(hù)素(OPG)、骨鈣素(BGP)試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 模型建立與分組干預(yù)

80只雌性未孕SPF大鼠在喂養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分為假去勢(shì)組20只和去勢(shì)組60只。去勢(shì)組大鼠麻醉后，取俯臥位于手術(shù)面板上，在左右兩側(cè)腹后壁肌肉層較薄弱處打開(kāi)腹腔，找到卵巢后將其連帶輸卵管末端輕輕提出體外，結(jié)扎后用眼科剪將卵巢全部切除；假去勢(shì)組保留卵巢，只切除周?chē)倭恐荆溆嗖僮魍?shì)組。術(shù)后30 d，將去勢(shì)大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=20)、雌激素組(n=20)和實(shí)驗(yàn)組(n=20)。雌激素組按照0.05 mg/(mL·100 g)戊酸雌二醇，實(shí)驗(yàn)組按照20 g/(kg·d)溫腎固疏方藥劑，對(duì)照組和假去勢(shì)組大鼠按照0.5 mL/100 g生理鹽水，每天灌胃給藥1次，連續(xù)治療8周。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

最后一次治療后，大鼠心室抽血處死，搜集血液不抗凝，放置2 h后，分離血清，使用英諾華D280自動(dòng)分析儀，測(cè)定血清血脂水平。取右側(cè)股骨，使用法國(guó)medilink超聲骨密度儀測(cè)量其骨密度(BMD)值。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟要求，采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定PING、TRACP5b、OPG、BGP四項(xiàng)骨代謝指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠骨密度值比較

與假去勢(shì)組相比，對(duì)照組大鼠的股骨和股骨近端的BMD顯著降低(P<0.05)；雌激素組和實(shí)驗(yàn)組大鼠同樣部位的BMD均較對(duì)照組顯著增加(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠右側(cè)股骨Table 1 BMD value of the femur in rats in each

注：與假去勢(shì)組比較，△P<0.05；與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.2 各組大鼠血清骨代謝指標(biāo)比較

與假去勢(shì)組相比，對(duì)照組大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平顯著提高(均P<0.05)，OPG水平明顯下降(P<0.05)；灌胃治療后，雌激素組和實(shí)驗(yàn)組大鼠的PING、TRACP5b、BGP水平均較對(duì)照組顯著提高(均P<0.05)，而OPG水平顯著降低(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 各組血清PING、TRACP5b、BGP、OPG含量Table 2 The contents of serum PING, TRACP5b, BGP, and OPG in each group

注：與假去勢(shì)組比較，△P<0.05；與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.3 各組大鼠血脂指標(biāo)比較

與假去勢(shì)組大鼠比較，對(duì)照組大鼠四項(xiàng)血脂指標(biāo)水平均明顯惡化(均P<0.05)；灌胃治療后，雌激素組和實(shí)驗(yàn)組大鼠的4項(xiàng)血脂指標(biāo)水平較對(duì)照組均發(fā)生顯著改善(均P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血脂指標(biāo)水平Table 3 The levels of serum lipids in each group

注：與假去勢(shì)組比較，△P<0.05；與對(duì)照組比較，*P<0.05。

3 討論

骨代謝是破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞共同作用的過(guò)程。正常水平的雌激素不僅可直接通過(guò)成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞表面的受體刺激成骨細(xì)胞形成、抑制破骨細(xì)胞；還能通過(guò)降低甲狀旁腺素的骨骼刺激來(lái)抑制破骨細(xì)胞[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后女性的雌激素水平下降，導(dǎo)致骨單位的激活頻率增加，骨轉(zhuǎn)換和重建加快，促進(jìn)了骨單位流失，使骨量下降[6]。骨鈣素(BGP)是一種由49個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，在調(diào)節(jié)骨鈣代謝中起重要作用，其水平變化能反應(yīng)骨代謝程度。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后雌激素下降，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體血液含鈣量降低，誘發(fā)甲亢發(fā)生，進(jìn)而使得高代謝型骨質(zhì)疏松骨鈣素升高[7]。I型膠原氨基端延長(zhǎng)肽(PINP)是骨形成的特異性指標(biāo)，骨更新率越快，該值越高，反之越低，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松女性血清PING值較正常女性明顯下降[8]。抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP5b)是反映破骨細(xì)胞活動(dòng)狀態(tài)的重要標(biāo)志物，破骨細(xì)胞在骨吸收過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的TRACP5b，有關(guān)研究提出絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者的TRACP5b水平明顯高于骨密度正常的女性[9]。骨保護(hù)素(OPG)是雌激素影響骨代謝的重要路徑，是骨質(zhì)疏松發(fā)生的重要因素之一[10]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)女性的骨密度與OPG水平之間存在正相關(guān)關(guān)系[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與假去勢(shì)組大鼠相比，去勢(shì)組大鼠的股骨及其近端的骨密度值明顯下降(P<0.05)，并且骨代謝指標(biāo)水平明顯惡化(均P<0.05)，與上述研究結(jié)果基本相符。

國(guó)內(nèi)相關(guān)研究證實(shí)，絕經(jīng)后女性雌激素分泌下降與血脂異常的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[12]。本研究結(jié)果顯示，去勢(shì)組大鼠的血脂指標(biāo)水平較假去勢(shì)組明顯惡化(均P<0.05)，與王景等[13]研究結(jié)果基本一致，表明絕經(jīng)后血脂代謝異常與雌激素分泌下降有關(guān)，主要原因是雌激素分泌下降導(dǎo)致肝臟酶對(duì)膽固醇、甘油三酯合成的抑制作用降低。

溫腎固疏方主要由骨碎補(bǔ)、淫羊藿、黨參、補(bǔ)骨脂等藥材組成，以益腎滋陰為主，輔以溫陽(yáng)補(bǔ)氣。溫腎固疏方一方面可以通過(guò)強(qiáng)腎溫陽(yáng)來(lái)加強(qiáng)對(duì)骨的營(yíng)養(yǎng)，刺激骨形成，具有抗骨質(zhì)疏松的功效。例如其中的重要成分骨碎補(bǔ)總黃酮能夠抑制骨保護(hù)素的減少，進(jìn)而減少骨量的吸收。另一方面，骨碎補(bǔ)、淫羊藿、補(bǔ)骨脂等中藥成分中含有類(lèi)似植物雌激素活性的異黃酮物質(zhì)，可降低雌激素水平減少對(duì)骨代謝和脂代謝產(chǎn)生的不良作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用溫腎固疏方治療的實(shí)驗(yàn)組大鼠的股骨及其近端的骨密度值，骨代謝指標(biāo)和血脂指標(biāo)均較對(duì)照組明顯改善(均P<0.05)，表明溫腎固疏方通過(guò)發(fā)揮補(bǔ)腎壯骨及類(lèi)雌激素的作用，有效提高絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，調(diào)節(jié)骨代謝和脂代謝指標(biāo)水平，達(dá)到改善骨質(zhì)疏松和調(diào)節(jié)血脂代謝的效果。