ELISA法檢測血液HBsAg灰區區間問題的探討

李麗平 ，楊堃 ，彭小華 ，吳青蓮

(1、新余市中心血站，江西 新余 338000；2、新余市渝水區珠珊衛生院，江西 新余 338033)

當前血液篩查以ELISA法和核酸兩種方法同時檢測，通過ELISA法檢測血液中的病毒特異性抗原或抗體，核酸則同時檢測HBV－DNA、HCVRNA和HIV－RNA。ELISA法以標本OD值/臨界值即S/CO值作為判斷標本陰陽性的標準，試劑說明書規定標本S/CO值≥1為陽性，S/CO值＜1為陰性，在實際工作中常出現標本S/CO值＜1，而核酸檢測為HBV－DNA陽性的情況，說明在試劑說明書規定的S/CO值＜1的某個區間設置一個范圍判定標本結果為陽性或待檢，可以最大程度減少低濃度標本漏檢的可能。現報告如下。

1 材料與方法

1．1 標本來源與處理 2012年3月1日至2017年12月6日本站ELISA法檢測HBsAg結果S/CO值在0．5～4范圍內的標本195例，留取2管標本，其中一管用于核酸檢測，另一管用于血清學檢測。

1．2 儀器 Uranus－AE－100全自動酶免分析儀、Hamilton STAR全自動混樣儀、Ezbead System－32提取儀、7500型實時熒光定量PCR擴增儀。

1．3 試劑 HBsAg檢測試劑由廈門新創、北京萬泰用兩個廠家提供，核酸檢測試劑由上海浩源生物科技有限公司提供。

1．4 方法 用兩種 ELISA法試劑進行 HBsAg檢測，S/CO值在0．5～4范圍內的標本，取相同的試劑進行再檢，同時對HBsAg單試劑陽性標本和陰性標本進行核酸檢測，核酸結果判定：Ct＞45為陰性，Ct≤45為陽性。

2 結果

2．1 S/CO 值在 0．5－4 范圍內的 HBsAg 檢測結果2012年3月1日至2017年12月6日，本站共檢測標本46122例，其中ELISA法HBsAg檢測結果S/CO值在0．5～4范圍內的標本195例，初檢陽性結果 S/CO 值 0．5＜S/C≤0．8標本 13 例， 核酸檢測陽性 1 例；結果 0．8＜S/C≤1．0 標本 45 例，再檢陽性 7 例，核酸檢測陽性 8 例；結果 1．0＜S/C≤4．0 標本137例，再檢陽性33例，核酸檢測陽性4例。見表1。

2．2 HBV－DNA陽性標本中兩種試劑初檢結果HBsAg初檢陽性標本中，HBV－DNA檢測陽性的13例標本有8例為一種試劑結果陽性，另一試劑顯弱色，5例為單試劑初檢陽性，其中S/CO值≤1．0范圍的標本HBV－DNA陽性9例。見表2。

2．3 4 例HBV－DNA陽性標本ELISA法結果 4例雙試劑均呈弱色，S/CO值在0．5以下，核酸檢測HBV－DNA陽性。見表3。

3 討論

2012年3 月1 日至2017年12月6日共檢測無償獻血者血液標本46122例，其中HBsAg陽性441（0．96%）例，HBV－DNA 陽性 81（0．18%）例，核酸陽性率高于其他地區[1－3]。HBsAg單試劑陽性182（S/CO≥0．8）例，再檢陽性 40 例，ELISA 法檢測影響因素很多[4]，可能是慢性乙肝感染者病毒S區或X區基因突變影響[5]，也可能是HBV感染的早期窗口期，HBsAg病毒處于低水平狀態，或是ELISA方法的局限性和血液標本本身的影響，導致大部分標本初檢結果為非特異性反應。ELISA法HBsAg單試劑陽性核酸檢測陽性12例，其中檢測結果在0．7≤S/CO 值≤1．0范圍的標本 HBV－DNA 陽性有9例，8例HBV－DNA陽性的ELISA法檢測結果一種試劑結果陽性，另一試劑顯弱色，4例HBVDNA陽性的ELISA法檢測結果S/CO值均在0．5以下。

表1 S/CO值在0.5-4范圍內的HBsAg檢測結果

表2 HBV-DNA陽性標本中兩種試劑初檢結果（S/CO值）

表3 4例HBV-DNA陽性標本ELISA法結果

ELISA法再檢陽性集中在 S/CO大于 0．8，為40例，核酸陽性集中在S/CO值大于0．7，為13例，有文獻顯示單試劑陽性而核酸陰性，中和試驗陽性的情況[6]，說明核酸結果為陰性，而單試劑再檢仍為陽性的標本仍存在一定的風險。

ELISA法檢測HBsAg的試劑說明書規定標本S/CO值≥1為陽性，S/CO值＜1為陰性。在表1中0．5＜S/CO值≤1．0的標本數為58例， 其中結果在0．7≤S/CO值≤1．0的標本45例，再檢陽性7例，核酸陽9例，占HBsAg單試劑陽性標本核酸檢測陽性的69．2%，而這部分標本按試劑說明書結果判定要求為陰性，說明ELISA法檢測試劑在結果S/CO值小于1．0的標本判定上應該設定一個范圍，才能減少HBsAg的漏檢，這個范圍設置多少才合適，沒有文獻報道[7－10]。

從表 1、 表 2中數據看出 0．8≤S/CO 值≤1．0標本ELISA法再檢陽性和核酸檢測陽性最多，表3中4例核酸陽性的標本其S/CO值均在0．5以下且兩種試劑都不同程度的顯色，說明核酸檢測可以最大限度降低風險，同時彌補ELISA法的不足[11－14]，從以上實驗數據可以看出ELISA法檢測HBsAg結果S/CO在1．0以下的設置灰區是非常有必要的，筆者建議使用國產ELISA法試劑檢測HBsAg，且還沒有開展核酸檢測的實驗室應設置一個灰區，灰區范圍在0．7≤S/CO值≤1．0是比較合適的，既降低了低濃度HBsAg的漏檢，又減少了標本再檢導致的試劑浪費，同時使用兩個不同廠家試劑檢測的，兩種試劑結果均出現弱色，該標本應該考慮淘汰。