高危型HPV E6/E7 mRNA聯合液基細胞學檢查提高宮頸病變檢出率的研究

馬娜　張艷　喬娜

[摘要] 目的 研究高危型人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA聯合液基細胞學檢查提高宮頸病變檢出率的應用價值。 方法 選取2016年1月～2017年12月于延安市人民醫院接受宮頸病變檢查的249例患者為研究對象，其中宮頸炎癥（170例）、宮頸上皮內瘤變Ⅰ（CINⅠ）（32例）、CINⅡ（28例）、CINⅢ（14例）、宮頸癌（5例）。對所有患者均進行高危型HPV E6/E7 mRNA檢查、液基細胞學檢查以及組織病理活檢。并以病理活檢結果為金標準，比較不同檢查方式的檢出率、靈敏度、特異性。 結果 高危型HPV E6/E7 mRNA檢查對宮頸炎癥、CIN的檢出率分別為83.53%、71.62%，均明顯高于液基細胞學檢查的68.24%、56.76%，又明顯低于聯合檢查的94.71%、90.54%，差異均有統計學意義（P < 0.05）。高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷CINⅠ的檢出率為68.75%，明顯高于液基細胞學檢查的43.75%，又明顯低于聯合檢查的90.63%，差異均有統計學意義（P < 0.05）。高危型HPV E6/E7 mRNA檢查與液基細胞學檢查診斷癌前病變的靈敏度分別為76.60%、68.09%，均明顯低于聯合檢查的91.49%；高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷癌前病變的特異性為81.19%，明顯高于液基細胞學檢查的64.36%，又明顯低于聯合檢查的94.06%，差異均有統計學意義（P < 0.05）。 結論 高危型HPV E6/E7 mRNA聯合液基細胞學檢查可顯著提高宮頸病變檢出率，具有較高的臨床診斷價值，推廣應用價值較好。

[關鍵詞] 宮頸病變；高危型人乳頭瘤病毒；液基細胞學檢查；宮頸上皮內瘤變

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）11（b）-0080-04

[Abstract] Objective To study the application value of the high-risk human papillomavirus （HPV） E6/E7 mRNA combined with liquid based cytology in the improvement of detection rate of cervical lesion. Methods From January 2016 to December 2017， 249 patients with cervical lesions in Yan′an People′s Hospital were selected as the subjects. There were 170 cases of cervical inflammation， 32 cases of cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ （CIN Ⅰ）， 28 cases of CIN Ⅱ， 14 cases of CIN Ⅲ， 5 cases of cervical cancer. The detection of high-risk HPV E6/E7 mRNA， liquid based cytology and histopathological biopsy were carried among all patients. The detection rate， sensitivity， and specificity of different examination methods were compared with the results of pathological biopsy. Results The detection rate of high risk type HPV E6/E7 mRNA examination in the diagnosis of cervical inflammation， CIN was 83.53%， 71.62%， which was significantly higher than liquid based cytology of 68.24%， 56.76%， and was significantly lower than the joint detection of 94.71% and 90.54% respectively， the differences between groups were statistically significant （P < 0.05）. The detection rate of high-risk type HPV E6/E7 mRNA examination in the diagnosis of CIN Ⅰwas 68.75%， which was significantly higher than the liquid based cytology of 43.75%， the joint detection was significantly lower than the 90.63%， the differences between groups were statistically significant （P < 0.05）. The sensitivity of the high-risk HPV E6/E7 mRNA examination and the diagnosis of precancerous lesions was 76.60% and 68.09% respectively， which was significantly lower than 91.49% of the joint detection. The specificity of high-risk HPV E6/E7 mRNA in diagnosing precancerous lesions was 81.19%， which was significantly higher than the liquid based cytology of 64.36%， was significantly lower than the joint detection of 94.06%， the differences between groups were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The high risk HPV E6/E7 mRNA combined with cytological examination can significantly improve the detection rate of cervical lesions， which has higher clinical diagnostic value， and worth popularizing.

[Key words] Cervical lesions； Human papillomavirus of high-risk type； Cytological examination of liquid base； Cervical intraepithelial neoplasia

宮頸癌是全球范圍內較為常見的女性生殖系統惡性腫瘤之一，其病死率在女性惡性腫瘤疾病中位居第四，嚴重威脅著女性人群的生命健康安全[1]。因此，對宮頸癌患者進行早期有效的診斷及干預顯得尤為重要。近年來，隨著相關研究的不斷深入，有研究顯示，高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）高負荷量與持續性感染在宮頸癌的發生、發展過程中發揮著至關重要的作用[2]。另有研究報道表明，高危型HPV的E6與E7基因所表達的蛋白具有干擾細胞周期、凋亡以及染色體穩定的作用，從而會促使細胞永生化，進一步引發宮頸癌[3]。鑒于此，本文通過研究高危型HPV E6/E7 mRNA聯合液基細胞學檢查提高宮頸病變檢出率的應用價值并予以分析，旨在為臨床早期診斷宮頸癌提供一種有效手段，進一步為臨床治療方案的制訂提供參考依據，現作以下報道：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年12月于延安市人民醫院接受宮頸病變檢查的249例患者為研究對象。納入標準[4]：①年齡>18歲；②性生活史≥2年；③非月經期；④臨床病歷資料完整。排除標準：①入院前3 d接受過陰道用藥或陰道沖洗或進行性生活者；②既往有HPV感染史者；③有宮頸手術史者；④存在神經系統疾病或交流溝通障礙者。年齡20～77歲，平均（45.62±11.38）歲。根據疾病類型不同分為宮頸炎癥170例，宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）74例，其中根據CIN分級標準：CINⅠ32例、CINⅡ28例、CINⅢ14例，宮頸癌5例。所有患者均簽署了知情同意書，醫院醫學倫理委員會已批準。

1.2 研究方法

1.2.1 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測 采用專門的HPV取樣器采集患者宮頸分泌物樣本，并將其置入15 mL的離心管中，以3000 r/min（半徑為80 mm）連續離心5 min，去除上清液，采用2 mL的蒸餾水進行清洗后再次離心處理，去除上清液，隨后加入300 μL的裂解劑蛋白酶K，放置于65℃條件下靜置30 min，取出后采集上清液，應用高危型HPV E6/E7 mRNA檢查試劑盒（購自美國Hologic公司）予以檢測，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。通過計算機軟件自動讀取高危型HPV E6/E7 mRNA拷貝數值，結果<1 copy/mL即為陰性，≥1 copy/mL即為陽性。

1.2.2 液基細胞學檢查 采用液基細胞學專用取材刷徹底插入宮頸口，同一方向旋轉5周，采集宮頸口以及宮頸管的脫落上皮下包，并將其置入含有PreservCyt保存液的小瓶內。予以制片、固定、染色處理后，由2名經驗豐富的專業病理科醫師采用雙盲法進行判讀，當判讀結果存在差異時由2名醫師討論確定最終結果。相關儀器以及試劑均購自上海裕隆生物科技有限公司。

1.3 觀察指標

比較不同診斷方式對宮頸病變的檢出率，不同診斷方式對CIN的檢出率。以病理活檢為金標準，分析不同診斷方式診斷癌前病變的靈敏度、特異性情況。靈敏度=真陽性人數/（真陽性人數+假陰性人數）×100%。特異性=真陰性人數/（真陰性人數+假陽性人數）×100%。

1.4 CIN分級標準

①CINⅠ：細胞異型性較輕，排列不整齊但仍保持極性，且異常增殖細胞僅限于上皮層下1/3；②CINⅡ：細胞異型性較為明顯，且排列紊亂，異常增殖細胞占據上皮層下2/3；③CINⅢ：異常增至的細胞擴展至上皮層的2/3或全層。將CINⅡ及以上病變記為癌前病變[5]。

1.5 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同診斷方式對宮頸病變的檢出率比較

高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷宮頸炎癥、CIN的檢出率明顯高于液基細胞學檢查，又明顯低于聯合檢查，聯合檢查對宮頸炎癥、CIN的檢出率明顯高于液基細胞學檢查，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 不同診斷方式對CIN的檢出率比較

高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷CINⅠ的檢出率明顯高于液基細胞學檢查，又明顯低于聯合檢查，聯合檢查診斷CINⅠ的檢出率明顯高于高危型HPV E6/E7 mRNA檢查，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 不同診斷方式診斷癌前病變的靈敏度、特異性情況比較

高危型HPV E6/E7 mRNA檢查與液基細胞學檢查診斷癌前病變的靈敏度及特異度均明顯低于聯合檢查；高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷癌前病變的特異性明顯高于液基細胞學檢查，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表3。

3 討論

HPV感染屬于宮頸病變的重要原因之一，且有研究報道顯示，絕大部分的宮頸癌患者均存在HPV感染[6-9]。然而，從HPV感染發展至宮頸癌需經過較長的時間，HPV感染后在體內具有較長的潛伏期，90%的患者可通過自身免疫功能予以清除，然而仍有少部分高危持續感染者會進展為宮頸癌[10-11]。目前，美國以及其他歐洲國家以將高危型HPV DNA檢測聯合液基細胞學檢查作為宮頸癌初篩的基本方案[12-13]。然而從感染HPV開始直至癌前病變，甚至是浸潤癌尚且有數年的時間，且癌前病變存在一定的進展性以及可逆轉性。價值大部分HPV感染是無癥狀與暫時性的，絕大部分新發感染者可在短時間內消退。因此，HPV DNA雖有較高的敏感性，但特異性較低，從而可能導致過多的無意義感染檢出，進一步加重患者的經濟以及心理負擔[14-15]。而HPV mRNA檢測可檢測到存在轉錄活性的病毒，有效提高了特異性。而液基細胞學檢查廣泛應用于宮頸癌的篩查中，在一定程度上提高了宮頸上皮內瘤變的靈敏度，然而該檢查方式存在一定的假陽性率[16-17]。由此，筆者通過研究高危型HPV E6/E7 mRNA聯合液基細胞學檢查提高宮頸病變檢出率的應用價值，以期為宮頸癌的篩查提供一種有效手段。

本研究發現，高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷宮頸炎癥、CIN的檢出率均明顯高于液基細胞學檢查，又明顯低于聯合檢查，與此同時，高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷CINⅠ的檢出率明顯高于液基細胞學檢查，又明顯低于聯合檢查，這符合葉麗君等[18-20]的研究報道，說明了HPV E6/E7 mRNA檢查診斷宮頸病變的檢出率較高，且聯合液基細胞學檢查可明顯提高檢出率。究其原因，在高危型HPV持續感染引發宮頸癌的過程中，病毒DNA發生整合，從而使得病毒基因E2區開放讀碼框出現損害，進一步促使病毒癌基因E6與E7的上流調節出現異常，而E6/E7致癌基因的表達可通過檢測其mRNA轉錄水平實現。因此，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測可確診高危持續感染者，并為宮頸癌的篩查和疾病預測提供可靠信息。且與液基細胞學檢查具有一定的互補作用，從而提高了臨床宮頸病變的檢出率。此外，高危型HPV E6/E7 mRNA檢查與液基細胞學檢查診斷癌前病變的靈敏度均明顯低于聯合檢查；高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷癌前病變的特異性明顯高于液基細胞學檢查，又明顯低于聯合檢查，這提示了HPV E6/E7 mRNA檢查聯合液基細胞學檢查有效提高癌前病變的診斷敏感度、特異性。分析原因，HPV E6/E7屬于病毒癌基因，在抑癌基因p53以及Rb的降解過程中發揮至關重要的作用，且在病毒基因整合至宿主的DNA過程中，E2片段缺失導致HPV早期基因HPV E6/E7 mRNA表達。另有研究報道顯示，HPV E6/E7 mRNA會對正常細胞周期產生一定的干擾作用，從而使得細胞基因組穩定性降低，進一步導致正常的宿主細胞朝惡性方向轉化[21-23]。因此，HPV E6/E7 mRNA檢測可準確反映疾病發展情況。在與液基細胞學檢查聯合應用時，可有效降低其假陽性率，提高了臨床診斷價值。

綜上所述，高危型HPV E6/E7 mRNA聯合液基細胞學檢查可顯著提高宮頸病變檢出率，具有較高的臨床診斷價值，值得臨床推廣應用。然而，本研究尚且存在樣本量較少的缺陷，可能導致研究結果發生一定程度的偏倚。因此，在今后的研究中我們應增大樣本量，以獲取更為準確、可靠的數據。

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（收稿日期：2018-06-12 本文編輯：任 念）