強精片對弱畸精子癥患者精子ICSI結局的影響*DNA完整性及

張培海 李俊君 陽 方 董 良 俞旭君 常德貴 陳帝昂**

1. 成都中醫藥大學附屬醫院（四川成都 610072）；2. 成都中醫藥大學第二附屬醫院

據WHO統計，約15%的育齡期夫婦不能自然生育，男性因素約占1/2，其中70%為弱畸精子癥導致[1]，偏高的精子DNA碎片率（sperm DNA fragmentation index, DFI）和核蛋白不成熟度是重要原因[2,3]。越來越多的不育夫婦受益于輔助生殖技術特別是卵胞漿內單精子顯微注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）術前良好的精液質量，能夠極大改善ICSI妊娠結局。本研究以此為切入點，觀察強精片對弱畸精子癥患者DFI、核蛋白不成熟度、ICSI妊娠結局的影響，并探討指標間的相關性。

資料與方法

一、一般資料收集

收集2014年6月至2015年12月到我院就診、需行ICSI治療的男性弱畸精子癥患者，女方檢查無明顯異常；年齡最小者22歲，最大者45歲，平均年齡（33.03±5.54）歲；不育年限1～12年，平均（4.54±2.40）年。隨機分為試驗組和對照組。通過基線分析，兩組患者男性年齡、不育年限、女方年齡無明顯差異，具有可比性。

二、 診斷標準

1. 病史：夫婦未采用任何避孕措施同居生活1年以上，女方檢查無異常；

2. 按照《人類精液檢查與處理實驗室手冊》（WHO 第5版），精子濃度＞15×106/mL，精子總數＞39×106/一次射精、按嚴格標準進行精子形態學檢查，正常精子形態＜4%，同時滿足前向運動（PR）精子百分率＜32%。

三、入選標準

1. 符合診斷為弱畸精子癥者。

2. 了解并簽署知情同意書。

四、排除標準

排除夫妻雙方染色體核型異常或生殖系及泌尿系炎癥導致的男性不育，女性卵細胞發育異常、激素紊亂等導致的不孕不育，由于子宮疾病、排卵障礙等引起的不孕不育，免疫性不育患者和有嚴重慢性疾病、肝腎疾病患者。

五、試驗方法

采用隨機對照的方法，將患者分為試驗組、對照組，每組各36例。試驗組：ICSI治療前服強精片（院內制劑，川藥制字：Z20070621），5片，tid；對照組：ICSI治療前服維生素C（國藥準字：H51022742）0.1g，tid、維生素E（國藥準字：H20003539）0.1g，tid；3個月為1個療程，1個療程后觀察ICSI妊娠結局。

六、 觀察指標

1. DFI、精子核蛋白不成熟率 （1）DFI正常參考值：精子DNA碎片率＜15%；（2）核蛋白不成熟率正常參考值：核蛋白不成熟率＜30%。

2. 3個月后ICSI治療的妊娠結局 （1）受精率＝受精卵數／取卵數×100%；（2）妊娠率＝妊娠周期數／移植周期數×100%。

七、統計分析

采用SPSS 21.0及JMP 9.0進行統計學分析處理。定量數據采用（±s）符合正態分布的成組定量數據采用成組t檢驗。組間均數的兩兩比較采用單因素方差分析，方差不齊則采用秩和檢驗。率的比較采用卡方檢驗。相關性分析用于描述兩兩變量間的相關關系。P＜0.05表示具有統計學意義。

結 果

DNA碎片率及核蛋白不成熟率比較一、兩組治療前、后精子

兩組治療前精子DFI均不符合正態分布，P＞0.05，差異無統計學意義；精子核蛋白不成熟率均符合正態分布，P＞0.05，差異無統計學意義。兩組具有可比性。

試驗組治療后精子DFI和精子核蛋白不成熟率與對照組相比較，均具有顯著的統計學差異（P＜0.05，表1）。這說明通過強精片、維生素C、維生素E治療后患者精子DNA碎片率及核蛋白不成熟率均有改善，且強精片作用明顯。

表1 兩組治療前和治療后DFI和精子核蛋白不成熟率的比較（±s）

表1 兩組治療前和治療后DFI和精子核蛋白不成熟率的比較（±s）

與對照組比較, *： P＜0.01

DFI(%) 精子核蛋白不成熟率(%)治療前 治療后 治療前 治療后試驗組 36 21.18±7.30 12.62±3.44* 25.61±8.94 21.43±4.70*對照組 36 18.73±3.75 21.43±4.70 25.28±8.17 22.32±7.61 n

二、ICSI治療后兩組患者受精率和妊娠率比較

ICSI治療后，強精片干預治療的試驗組受精率為68.66%，對照組受精率為41.31%，差異具有統計學意義（P＜0.0001）；試驗組妊娠率為32.65%，對照組妊娠率為30.51%，兩組率的比較采用卡方檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 兩組患者ICSI治療后受精率和妊娠率分析

討 論

男性不育癥為男性生殖系統常見疾病之一，近年來其發病率呈不斷上升趨勢。輔助生殖技術作為不孕不育癥的一種重要治療手段，對精子質量有確切的要求[4]，良好的精液質量，包括DNA碎片率低的精子能夠提高精卵結合能力，改善著床情況，增加優質胚胎率，降低流產率[1]。其中精子DNA完整性（包括精子DNA碎片率及精子核蛋白不成熟率）作為一種新的精子功能評價指標受到越來越多的關注[6]。引起精子DNA損傷的原因有很多，主要有生殖道炎癥、睪丸部高溫、精索靜脈曲張、吸煙、環境因素、藥物與放療、化療等。精子DNA損傷的治療應針對病因對癥治療并輔以抗氧化藥物[4,6]。

祖國醫學關于男性不育癥的論述多集中在“無嗣”、“無子”等方面。中醫認為腎藏精，主生殖和發育。精子的生成依賴于腎的滋養與溫煦，故精子質量異常所致男性不育癥與祖國醫學中的腎虛關系密切。大多數醫家認為腎精不足是其基本病機，與血瘀等病理產物關系密切。

強精片由人參、當歸、枸杞子、菟絲子、淫羊藿、鹿角膠、車前子、益母草、桃仁、丹參等藥物組成，具有補腎填精、活血化瘀的功效，充分體現“陰陽氣血并調、肝腎兼顧；補中有通、補中有清”的特點?，F代醫學研究表明，補腎填精、活血化瘀可改善睪丸、附睪功能及精子發生、成熟的微環境，促使缺陷精子修復為正常精子[7,8]。我們前期研究表明也證明，強精片可提高精子濃度、活力，能降低精子畸形率和精子頭部畸形率的百分比，增加附睪液唾液酸（SA）含量，降低精子膜甘油-3-磷酰膽堿（GPC）含量[9]，并能顯著改善不育大鼠附睪精子質量，提高睪丸附睪器官系數，增加附睪質量和管壁厚度，促進損傷附睪上皮恢復和上皮細胞的分泌，從而改善附睪精子成熟功能[10,11]。

基礎研究表明，精子DNA完整性的損傷往往是穩定的雙鏈結構斷裂成單鏈，其中發生的機制可能與染色質組裝缺陷、凋亡異常、氧化應激等有關系[12]。精子DNA損傷與體外受孕率和胚胎質量呈負相關[13]。精子DNA的完整是作為精子發揮功能的基本條件，當精子DNA完整的時候，核膜能夠正常包裹住其基因團塊，一旦精子DNA受到損傷出現斷裂導致碎片產生后，DNA碎片會逐漸透過核膜，導致DNA攜帶的遺傳基因信息丟失，與女性卵原核結合后形成的受精卵基因組學可能就會產生異常，進而導致生化妊娠、無胎心、先兆流產、反復流產等[14]。

本研究顯示，強精片治療后患者精子DNA碎片率及核蛋白不成熟率明顯改善，可能是通過抗氧化作用降低DFI，清除精液中多余的活性氧自由基而使精液中ROS趨于平衡，從而抑制氧化應激反應，減少精子DNA損傷。同時，試驗組、對照組受精率有明顯改善，說明強精片可能通過改善患者精子頭部的某些與受精相關的成分。但是強精片與維生素C和維生素E并沒有顯著改善ICSI的妊娠率，這個可能因為后階段的妊娠情況主要是取決于女方的相關因素，與男性的精子質量關系不大所致。

同樣，前期回顧性研究[15]中，收集不同因素致無精子癥患者，均采用睪丸活檢取得其精子，無論是來自梗阻性或非梗阻性無精子癥的精子，還是正常大小睪丸或小睪丸的精子，ICSI的受精率有差異，然而ICSI妊娠率無明顯差異。

目前，中藥治療弱畸精子癥已成為研究熱點。采用強精片治療男性弱畸精子癥有效，能夠明顯降低精子DFI。如果增加ICSI周期數量，能夠顯著改善ICSI術后受精率的優勢，為患者及其家屬提供更大的妊娠機會。然而，強精片提高ICSI患者的受精率，而患者的妊娠率未見明顯改變，其作用機制有待進一步研究。