TC型維生素D受體基因增加房顫發病風險

欒正云， 黃燕， 沙敏， 徐捷， 郭婷， 葉軍， 丁蔚,*

(1. 江蘇大學醫學院， 江蘇 鎮江 212013； 2. 泰州市人民醫院中心實驗室， 江蘇 泰州 225300)

心房顫動(房顫)是臨床上最常見的持續性快速心律失常，可產生嚴重的臨床事件。目前，藥物治療房顫的效果有限，并且對房顫并發癥的療效也不佳。維生素D受體(vitamin D receptor,VDR)表達于多種免疫細胞，如巨噬細胞、樹突狀細胞和激活的T細胞表面，另外在心肌細胞和成纖維細胞等表面也有表達。VDR基因位于常染色體12q12-14，是甾體類受體超家族中的一員，由14個外顯子和數個內含子組成，總長度約75 kb。近年來國內外有關VDR等位基因頻率的研究表明，VDR的基因型與身高[1]、骨質疏松[2-3]、糖尿病視網膜病變[4-5]等相關，且VDR等位基因分布因人種不同也存在較大差異[6]。本研究通過檢測房顫患者外周血VDR基因rs2228570單核苷酸多態性(SNP)，探討VDR基因多態性對房顫發病的影響，為該疾病的臨床治療提供理論依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

房顫患者173例來源于泰州市人民醫院2016年2月至2017年1月的住院患者，其中男104例，女69例，平均年齡(60.09±19.59)歲。另選擇同期在泰州市人民醫院體檢中心健康體檢者173例作為健康對照組，其中男92例，女81例，平均年齡(54.50±15.01)歲。

1.2 引物的設計與合成

在NCBI基因數據庫中找出VDR的序列信息(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_000376.2)，再找出rs2228570部分的序列信息(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=2228570)，根據基因序列及參考文獻，設計VDR基因rs2228570位點擴增引物，由南京一道生物科技有限公司合成。rs2228570位點引物序列：上游5′-GCACCAAGGATGCCAGCTGGCCCTGGCACT-3′；下游5′-CACCTTGCTTCTTCTCCCTCCCTTTCCACT-3′。

1.3 血液樣本基因提取

清晨空腹采集EDTA-K2抗凝靜脈血，混勻。使用Blood Gen Mini Kit血液基因組柱式提取試劑盒(北京康為世紀生物科技有限公司)提取VDR基因。

1.4 VDR基因的PCR擴增及測序

反應體系：基因組模板3 μL 、DEPC水39 μL、10×Tag緩沖液 5 μL、2.5 mmol/L dNTP(江蘇省弗泰生物科技有限公司，Cat No.：BS004)1 μL、正向引物(50 pmol/L)0.5 μL、反向引物(50 pmol/L)0.5 μL、Taq酶(江蘇省弗泰生物科技有限公司，Cat No.：RD003)1 μL。然后進行PCR：預變性95 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s,35個循環;72 ℃ 5 min。將PCR產物測序、分析，結果見圖1。

圖1 VDR基因rs2228570的多態性測序圖

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 一般資料

見表1。與健康對照組比較，房顫組白細胞計數、中性粒細胞百分比、總膽固醇、三酰甘油、C反應蛋白均顯著升高(P<0.05或<0.01)，而淋巴細胞百分比顯著降低(P<0.01)。

表1 健康對照組、房顫組一般資料比較

2.2 兩組VDR基因rs2228570多態性

VDR基因 rs2228570的SNP的差異分析結果顯示，房顫組VDR基因的CC型占20.2%(35/173)、TC型占68.8%(119/173)、TT型占11.0% (19/ 173)；對照組 CC型占31.2%(54/173)、TC型占43.4%(75/173)、TT型占25.4%(44/173)，兩組基因型分布差異有統計學意義(χ2=23.956，P<0.01)。

2.3 房顫組VDR基因rs2228570不同基因型患者實驗室指標的差異

VDR基因rs2228570的TC型房顫患者白細胞計數、中性粒細胞百分比顯著高于CC型和TT型(P<0.05)，而淋巴細胞百分比、單核細胞百分比顯著低于CC型和TT型(P<0.05)。而不同基因型房顫患者肌酸激酶、CK-MB、總膽固醇、三酰甘油、C反應蛋白均無統計學差異(P>0.05)。見表2。

3 討論

房顫的發病機制非常復雜，心臟的電生理、炎癥、心房重構、腎素-血管緊張素-醛固酮系統等在房顫的發病機制中都具有重要的作用。VDR屬于類固醇激素/甲狀腺受體超家族成員，表達于心臟中的心肌細胞和成纖維細胞表面，由427個氨基酸殘基組成，其與25-OH-VD3結合后的復合物可與靶基因上游啟動子區或調控區域上的特定DNA序列相結合，進而對靶基因的轉錄表達進行調控。

表2 VDR基因rs2228570不同基因型房顫患者實驗室指標差異

a：P<0.05，與TC型比較

本研究顯示，房顫組VDR基因rs2228570的TC型比例顯著高于健康人群，且TC型房顫患者白細胞計數、中性粒細胞比例顯著高于CC型和TT型，而淋巴細胞比例、單核細胞比例顯著低于CC型和TT型。該結果提示rs2228570位點的TC型是房顫發病的危險因素，可能與炎癥的發生相關，從而導致房顫的發病。本研究為回顧性研究，且樣本數偏少，VDR基因多態性與房顫發生、發展和預后之間的關系，仍有待于進一步大規模的前瞻性研究證實。