內皮鈣黏蛋白在子宮內膜異位癥病變組織中的表達及其臨床意義

孫靜，張蕊，王榮毓

（北京市第一中西醫結合醫院 婦產科，北京 100021）

子宮內膜異位癥的發生主要是長期的子宮內膜 腺體細胞侵襲能力改變有關。流行病學研究顯示，現階段臨床子宮內膜異位癥的發病率約為223～455/萬[1]。子宮內膜異位癥的病情進展，能導致患者不孕及卵巢功能的破壞，增加不良臨床預后的發生風險。探討子宮內膜異位癥的發病機制過程中發現，不同分子的表達濃度改變，影響子宮內膜的變形能力，促進子宮內膜腺體細胞的增殖、抑制及凋亡，進而促進腺體細胞侵襲能力的改變。血管內皮鈣黏蛋白（vascular endothelial cadherin, VE-cad）是重要的細胞間連接蛋白，其主要表達于平滑肌、血管內皮組織及肝腎上皮組織。VE-cad能通過干預細胞間的縫隙連接及緊密連接等，促進細胞間纖維蛋白成分的降解，干預子宮內膜腺體細胞的侵襲及轉移風險的改變[2-3]。近年來相關研究發現，子宮內膜異位癥或卵巢巧克力囊腫患者，VE-cad表達濃度可發生變化。為進一步探討VE-cad與子宮內膜異位癥的關系，本研究選取正常子宮，探討相關指標的表達及其與患者病程和其他臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2017年9月北京市第一中西醫結合醫院病理科收集的40例正常子宮內膜、平滑肌組織（正常組）和80例子宮內膜異位癥組織的子宮內膜、平滑肌組織（病例組）。正常組：年齡40～53歲，平均（47.0±5.2）歲；增殖期18例、分泌期22例。病例組：年齡40～54歲，平均（47.5±5.8）歲；增殖期38例、分泌期42例；根據不同內膜的位置，將患者分為在位和異位內膜組，各為40例，納入標準：①子宮內膜異位癥診斷標準參考中華醫學會制定的標準；②正常子宮組織來源于因外傷等原因需要進行子宮切除；③研究對象各項基礎資料完整。排除標準：①子宮內膜癌、卵巢癌等；②近3個月接受內分泌治療；③伴有自身免疫性疾病；④長期應用激素類藥物治療。本研究通過醫院倫理委員會批準，患者及其家屬知情同意。兩組年齡、子宮內膜所處分期比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 實驗方法

收集子宮內膜異位癥患者的子宮內膜病變組織（包括子宮內膜和平滑肌組織），同時收集子宮內膜良性病變組織作為對照組，采用免疫組織化學分析VE-cad在子宮內膜異位癥患者中的異常表達情況，并比較異位或在位子宮內膜組織中VE-cad表達差異情況。

1.3 免疫組織化學檢測方法

所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4 mm，采用免疫組織化學鏈霉卵白素-生物素復合體法染色，二氨基聯苯胺（diamionben zidene, DAB）顯色。VE-cad抗體、PV6000通用型二抗及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察VE-cad的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.4 判斷標準

免疫組織化學結果判定，VE-cad陽性著色表達于細胞膜孔細胞質，其呈黃色、棕黃色及褐色表達。根據著色強度，0分為無色；1分為淡黃色；2分為棕黃色；3分為褐色、黑色。根據陽性細胞比例，陽性細胞數目所占比例≤10%為1分；陽性細胞所占比例＞10%～50%為2分；陽性細胞數＞50%～75%為3分；陽性細胞數所占比例＞75%為4分。兩種積分相乘，總分＜3分為陰性；≥3分為陽性。總分＜3分為（-）表達；總分3～5分為弱陽性（+）表達；總分6～9分為陽性（++）表達；總分＞9分為強陽性（+++）表達。

1.5 統計學方法

數據分析采用SPSS 16.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組子宮內膜中VE-cad表達陽性率比較

3組子宮內膜中VE-cad表達陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；病例組異位內膜組織中VE-cad表達陽性率高于病例組在位內膜組織、正常組子宮內膜組織，見表1和附圖。

2.2 兩組子宮平滑肌組織中VE-cad表達陽性率比較

兩組子宮平滑肌組織中VE-cad表達陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 不同影響因素子宮內膜異位癥患者異位內膜組織中VE-cad陽性率比較

子宮內膜異位癥患者異位內膜組織中VE-cad表達與患者年齡、病程有相關性（P＜0.05）。年齡越大、病程越長的患者異位內膜組織中VE-cad表達率越高；子宮內膜異位癥患者異位內膜組織中VE-cad表達與患者是否應用止痛藥無關（P＞0.05）。見表3。

表1 3組子宮內膜中VE-cad表達陽性率比較

附圖 兩組異位內膜組織中VE-cad陽性表達 （×400）

表2 兩組子宮平滑肌組織中VE-cad表達陽性率比較

表3 不同影響因素子宮內膜異位癥患者異位內膜組織中VE-cad陽性率比較

3 討論

現階段臨床對子宮內膜異位癥的治療主要通過手術及圍手術期的藥物治療為主。但長期的臨床隨訪研究發現，子宮內膜異位癥臨床治療總體有效率或治療后妊娠結局等均無改善[1]。生物學治療能在無創、精準治療等方面發揮積極的臨床價值，而本研究通過對子宮內膜異位癥發病過程中相關因子分析，能為臨床疾病的診療提供理論參考。同時本研究對VE-cad表達與子宮內膜異位癥患者病程的關系研究，可為揭示臨床疾病持續性進展、病情惡化的內在原因提供參考。

VE-cad結構包括多個含巰氨基酸，能在促進局部纖維蛋白酶的末端磷酸化過程中發揮作用，促進局部組織中金屬蛋白酶的上調，增加細胞間質的分解。同時VE-cad能提高細胞的異型性，促進腺體細胞膜穩定性的下降，增加其對臨近正常組織細胞的黏附能力，并提高其通過淋巴或者組織液滲透轉移的風險[4-5]。相關基礎方面研究顯示，VE-cad能在提高癌細胞的擴散、促進癌細胞的淋巴結轉移及遠期器官轉移等方面發揮作用，并增加局部血管內皮的通透性[6-7]。惡性腫瘤的發生或者臨床分期的進展過程中，VE-cad高表達對患者的病情進展具有重要的促進作用[8-9]。而在子宮內膜異位癥中的分析研究不足，本研究的創新性在于：探討子宮內膜及平滑肌組織中VE-cad差異性表達；揭示VE-cad在子宮內膜異位病灶組織中的表達。

子宮內膜異位癥病灶組織中可發現相關指標的異常表達，其中VE-cad表達濃度上升，高于子宮內膜原位病灶組織，提示VE-cad能影響到異位癥病灶部位子宮內膜組織的細胞病變，從機制上可能與VE-cad對細胞的生物學特征的改變有關[10-11]：①VE-cad表達能影響到子宮內膜腺體細胞的持續性DNA擴增風險，導致細胞對卵巢上皮或者輸卵管上皮細胞的黏附及浸潤風險上升；②VE-cad表達能促進異位癥病灶組織中的血管內皮細胞的新生，促進新生血管的形成，并提高異位癥病灶組織的局部血流灌注。部分研究者在分析不同累及部位子宮腺肌癥患者的蛋白譜的表達后發現，VE-cad表達陽性率可平均上升≥25%，且患者異位癥病灶破壞越為明顯，手術治療后的復發率越高，VE-cad表達陽性率上升越為明顯[12-13]。VE-cad表達主要定位于子宮內膜腺體細胞的周邊及部分細胞質中，染色強度越深，VE-cad表達濃度越高，這可能提示VE-cad蛋白能夠影響到細胞間質的代謝或者細胞內信號通路的傳導等，進而影響到子宮內膜腺體的浸潤及侵襲過程。但本次研究并未發現VE-cad在異位癥病灶或者原位平滑肌組織中的表達差異：一方面考慮到VE-cad蛋白主要表達于內膜組織中；另一方面考慮與VE-cad蛋白主要作用腺體細胞，而對平滑肌細胞的影響較小。長期的VE-cad濃度蓄積能增加其對于腺體細胞病理改變的調控作用，而應用鎮痛藥物如GNRH類藥物或者米非司酮等，并不能影響到VE-cad表達水平，其濃度較為穩定，提示臨床可通過隨訪VE-cad蛋白的表達，進而評估子宮腺肌癥患者的病情變化。

綜上所述，子宮腺肌病異位內膜組織中VE-cad呈高表達，而年齡越大、病程越長，VE-cad蛋白的表達陽性率越高。但關于VE-cad表達與子宮腺肌癥患者的臨床分期、治療預后關系仍然需要進一步探討。