黑木耳液體菌種配方優化試驗

王慶武 李秀梅 蘭玉菲 安秀榮

（泰安市農業科學研究院，山東泰安271000）

黑木耳（Auricularia auricular）是我國傳統食用菌[1]，目前栽培所用菌種大部分為固體菌種，液體菌種尚未廣泛使用[2]。固體菌種生產周期長，菌齡不整齊[3]，接種用工多，成本高。與固體菌種相比，液體菌種菌絲生長快，生產周期短[4-5]，菌齡一致，接種快，成本低，解決了固體菌種擴大生產中難以同步性發育的問題[6]。因此，黑木耳液體菌種代替傳統固體菌種愈來愈受到人們的關注。為培養出優質黑木耳液體菌種，筆者研究以同一培養時間菌絲體生物量為衡量指標，對黑木耳液體菌種培養所需的碳源、氮源、無機鹽及維生素進行優化研究，以篩選出最佳配比，為黑木耳液體菌種的培養提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試黑木耳菌株：泰安市農科院保藏菌株TH02。

斜面培養基：馬鈴薯20%（去皮煮汁），麩皮4%（煮汁），葡萄糖2%，KH2PO40.2%，MgSO40.1%，瓊脂2%，加水1 L。

碳源優化液體基礎培養基：蛋白胨0.2%，KH2PO40.2%，MgSO40.1%，花生油0.05%。

氮源優化液體基礎培養基：葡萄糖2%，KH2PO40.2%，MgSO40.1%，花生油0.05%。

1.2 試驗方法

1.2.1 母種制備

無菌條件下挑取冰箱內保藏的邊長4 mm的菌種塊接種于新鮮斜面培養基上，25～28℃培養至菌絲長滿斜面，待用。

1.2.2 碳源試驗

在碳源基礎液體培養基中，分別加入2%的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖、淀粉、玉米粉7種碳源，組成供試培養基。250 mL三角燒瓶中分別裝入150 mL供試培養基，121℃、0.11 MPa高壓蒸汽滅菌30 min，壓力降至0 MPa時開鍋取瓶，冷卻至室溫。無菌條件下分別接入6塊菌齡一致的邊長2 mm經活化的母種塊，于25～28℃、160 r∕min恒溫搖床培養10 d，每處理3次重復。

1.2.3 氮源試驗

在氮源基礎液體培養基中，分別加入0.2%的蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、（NH4）2SO4、NH4NO3、麩皮6種氮源，組成供試培養基。試驗方法同1.2.2。

1.2.4 碳、氮源配比試驗

選定最佳碳氮源后，采用L9（34）法進行正交試驗。試驗方法同1.2.2。

1.2.5 無機鹽試驗

以最佳碳氮源組合為基礎培養基，分別加入無機鹽KH2PO4、MgSO4、CaSO4，采用L9（34）法進行正交試驗。試驗方法同1.2.2。

1.2.6 維生素試驗

以上述試驗結果為基礎培養基，分別添加0.001%、0.005%、0.01%、0.015%、0.02%濃度的維生素B1組成供試培養基，上述基礎培養基作為對照。試驗方法同1.2.2。

1.2.7 菌絲生物量測定

各處理培養液移入離心管，離心機10 000 r∕min離心5 min，60℃條件下菌絲烘至恒重，計算各處理菌絲體干重。

2 結果與分析

2.1 碳源對黑木耳菌絲體生物量的影響

由表1可以看出，以玉米粉為碳源的培養基中，菌絲體生物量最高，平均達到255.33 mg∕100 mL，其次是淀粉，平均達到184.33 mg∕100 mL，乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖培養效果較差，但均優于無碳源培養基。

表1 碳源對黑木耳菌絲體生物量的影響

2.2 氮源對黑木耳菌絲體生物量的影響

由表2可以看出，在酵母膏為氮源的培養基中，黑木耳菌絲體生物量最高，平均達到202 mg∕100 mL，其次是麩皮，平均達到180 mg∕100 mL，牛肉膏、蛋白胨、（NH4）2SO4、NH4NO3培養效果較差，但均優于無氮源培養基。

表2 氮源對黑木耳菌絲體生物量的影響

2.3 碳、氮源配比對菌絲體生物量的影響

由表4可以看出，4個單因子對菌絲體生物量的影響順序為A＞B＞C＞D，玉米粉影響最大，其次是淀粉、酵母膏，麩皮影響最小。極差分析結果表明，最佳碳氮源配比為A3B3C1D1。

表3 正交試驗因素水平 %%

表4 L9（34）正交試驗結果

2.4 無機鹽對菌絲體生物量的影響

由表6可以看出，3個無機鹽單因子對菌絲體生物量的影響順序為A＞C＞B，KH2PO4對菌絲體生物量影響最大，其次是CaSO4，MgSO4對菌絲體生物量影響最小。極差分析結果表明，最佳無機鹽配比為A3B3C2。

表5 正交試驗因素水平表 %%

表6 L9（34）正交試驗結果

2.5 維生素對菌絲體生物量的影響

由圖1可以看出，維生素B1對菌絲體生物量有影響，在添加維生素培養基上菌絲體生物量均高于無維生素培養基，維生素添加量在0.015%時菌絲體生物量達到最大，為1360 mg∕100 mL，此后隨添加量的增加菌絲體生物量反而降低。

圖1 維生素添加量對菌絲生物量的影響

3 小 結

試驗表明，碳源對黑木耳菌絲生長影響較大，但不同碳源之間差異較明顯，適宜的碳源為玉米粉和淀粉。不同氮源對菌絲生長有一定的促進作用[6]，有機氮對菌絲生長影響較大，而無機氮對菌絲生長影響較小，表明有機氮優于無機氮，試驗適宜的氮源為酵母膏和麩皮。菌絲生長需要適宜的碳氮源配比[7]，適宜的碳氮比利于菌絲生長，通過復合碳氮源正交試驗，適宜的碳氮配比為玉米粉3%、淀粉4%，酵母膏0.1%，麩皮0.2%。菌絲生長對無機鹽需要量很少，但它們是微生物活動中不可缺少的物質[8]，一般在低濃度時對菌絲生長有促進作用，三種無機鹽相比，KH2PO4用量最大，CaSO4用量最少，適宜的配比為KH2PO40.3%、MgSO40.15%、CaSO40.05%。一定量的維生素對菌絲生長有明顯促進作用，但需求量不是越多越好，試驗得出適宜的維生素B1添加量為0.015%，效果較好。