IL-2治療與肝細胞癌化療敏感性的相關性

平秀琴 秦萍 王黎洲

【摘要】 目的 探究白細胞介素-2（IL-2）治療與肝細胞癌（HCC）化療敏感性的相關性。方法 選取經IL-2治療的36例肝細胞癌化療患者為觀察組， 取 S-P 免疫組織化學方法;選擇同期非IL-2治療的36例肝細胞癌化療患者為對照組， 檢測肝細胞癌存檔石蠟包埋切片組織中多藥耐藥相關蛋白1（MRP1）、IL-2 受體α鏈的表達。觀察免疫組化實驗結果， 比較兩組MRP1、IL-2受體α鏈表達。結果 細胞漿內和（或）細胞膜是MRP1 在肝組織中的表達定位， 其中較顯著的是胞漿內。其陽性細胞呈彌散性或灶狀分布， 免疫組化染色為棕黃色細顆粒狀， 在癌旁及肝癌組織、肝硬化表達中顯著增高， 正常肝細胞中低表達， 細胞間質中無顯著著色情況出現。同時以PBS代替一抗為陰性對照組， 細胞胞漿和細胞外間質都存在， 可見散在棕黃色著色于兩張切片鏡下， 考慮實驗操作污染造成， 結果均視為陰性， 且余切片沒有染色。IL-2受體α鏈其免疫組化染色呈胞膜型， 呈棕黃色。且PBS液為一抗對照組無顯著著色。觀察組MRP1、IL-2受體α鏈表達吸光度A分別為（0.33630±0.04466）、（0.30180±0.04022）高于對照組的（0.30070±0.03763）、（0.26300±0.02223）， 差異有統計學意義（P<0.05）。結論 針對肝細胞癌患者， 采用IL-2治療， 在增加機體抗腫瘤免疫時， 相應的提升了患者肝癌細胞對化療藥物的耐受性， 所以在以化療為主要手段時聯合應用IL-2降低臨床治療效果。

【關鍵詞】 肝細胞癌;白細胞介素-2;化療;敏感性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.35.022

在我國， 肝細胞癌為常見惡性腫瘤之一， 最佳的治療方式是手術切除， 但是當前僅僅有30%的切除率[1]。針對難以手術切除及鞏固治療的患者， 主要的治療方式是化療。但是肝癌并非化療敏感的腫瘤， 因多藥耐藥蛋白降低肝癌化療的療效， 且又因臨床診斷的肝癌大多數是晚期， 對化療藥物不敏感， 大多處在G0期[2]。另外針對肝癌的綜合治療， 免疫治療的介入提供了全新思路， 臨床及實驗證明聯合或單用， 可實現對消化道惡性腫瘤治療效果的顯著增加。但是當前IL-2和化療間是否存在拮抗或協同作用， 報道依舊很少。此次研究對IL-2治療與肝細胞癌化療敏感性的相關性進行探究， 結果如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年1～12月經IL-2治療的36例肝細胞癌化療患者作為觀察組， 選擇同期非IL-2治療的36例肝細胞癌患者為對照組。患者均簽訂了知情同意書。存檔石蠟包埋組織切片， 實施二次切除的肝細胞癌標本。觀察組年齡18～85歲， 平均年齡（52.2±11.4）歲;男20例， 女16例;部分患者為皮下注射， 1個療程時間為7 d， 100萬 U/（次·d）， 進行1～4次不等， 部分患者經肝動脈所置化療泵或門靜脈注射， 28～33 d-1， 5～10 次不等， 100萬U/次。對照組年齡19～84歲， 平均年齡（51.8±11.3）歲;男19例， 女17例。排除化療史、手術方式或經動脈化療栓塞（TACE）、病程、腫瘤分期等因素對MRP1表達影響作用。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。患者均簽訂了知情同意書。

1. 2 方法 觀察組取S-P免疫組織化學方法， 對照組檢測肝細胞癌存檔石蠟包埋切片組織中MRP1、IL-2 受體α鏈的表達。存檔石蠟包埋組織切片， 實施二次切除的肝細胞癌標本。

1. 2. 1 試劑 選擇美國Santa Cruz 生物技術有限公司生產的， 武漢苑凌生物實驗器械公司的鼠抗人MRP1單抗（sc-18835）。同時選擇美國Sigma公司生產、北京中山生物技術有限公司的 DAB顯色劑及S-P免疫組化試劑盒;武漢博士德生物工程有限公司生產的抗IL-2受體α鏈單抗[3]。

1. 2. 2 方法

1. 2. 2. 1 圖象分析 選擇半定量方法， 把切片放大200倍取圖， 同時對各切片的染色強度進行分析， 選擇高清晰度醫學圖文分析系統HMIAS-2000。經盲法取3個視野， 計算吸光度， 獲得的平均值是切片的吸光度值[4]。

1. 2. 2. 2 S-P免疫組織化學染色 常規化的把上述標本石蠟切片， 微波抗原修復， 蛋白酶消化。選擇蘇木素輕度襯染細胞核。參見S-P試劑盒說明書的具體步驟[5]。DAB顯色， 以IL-2受體α鏈抗體為陰性對照， 抗MRP1抗體經磷酸鹽緩沖液（PBS）液代替。

1. 3 觀察指標 觀察免疫組化實驗結果， 比較兩組MRP1、IL-2受體α鏈表達。

1. 4 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 免疫組化實驗結果 細胞漿內和（或）細胞膜是MRP1在肝組織中的表達定位， 其中較顯著的是胞漿內。其陽性細胞呈彌散性或灶狀分布， 免疫組化染色為棕黃色細顆粒狀， 在癌旁及肝癌組織、肝硬化表達中顯著增高， 正常肝細胞中低表達， 細胞間質中無顯著著色情況出現。同時以PBS代替一抗為陰性對照組， 細胞胞漿和細胞外間質都存在， 可見散在棕黃色著色于兩張切片鏡下， 考慮實驗操作污染造成， 結果均視為陰性， 且余切片沒有染色。IL-2受體α鏈其免疫組化染色呈胞膜型， 呈棕黃色。且PBS液為一抗對照組無顯著著色。

2. 2 兩組MRP1 、IL-2受體α鏈表達比較 觀察組MRP1、IL-2受體α鏈表達高于對照組， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

在腫瘤免疫治療中， IL-2為關鍵的細胞因子之一， 可經提升淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）、自然殺傷（NK）細胞活性， 激活腫瘤浸潤淋巴細胞， 增強細胞毒性T細胞（CTL）對腫瘤細胞殺傷作用， 使腫瘤生長停止， 誘導機體抗腫瘤免疫反應， 改善化療所致的免疫抑制[6]。此次研究中， 細胞漿內和（或）細胞膜是MRP1在肝組織中的表達定位， 其中較顯著的是胞漿內。其陽性細胞呈彌散性或灶狀分布， 免疫組化染色為棕黃色細顆粒狀， 在癌旁及肝癌組織、肝硬化表達中顯著增高， 正常肝細胞中低表達， 細胞間質中無顯著著色情況出現。同時以 PBS 代替一抗為陰性對照組， 細胞胞漿和細胞外間質都存在， 可見散在棕黃色著色于 兩張切片鏡下， 考慮實驗操作污染造成， 結果均視為陰性， 且余切片沒有染色。IL-2受體α鏈其免疫組化染色呈胞膜型， 呈棕黃色。且PBS 液為一抗對照組無顯著著色。觀察組MRP1 、IL-2受體α鏈表達高于對照組， 差異有統計學意義（P<0.05）。說明IL-2的治療具有顯著有效性， 患者對化療藥物的耐藥性經IL-2 的治療顯著增加。

綜上所述， 對肝細胞癌患者采用IL-2治療， 在增加機體抗腫瘤免疫時相應的提升了患者肝癌細胞對化療藥物的耐受性， 所以在以化療為主要手段時聯合應用IL-2會降低臨床治療的效果。

參考文獻

[1] 周黎強， 余春慧， 趙亮. 肝動脈灌注化療術與口服索拉非尼治療晚期肝癌的療效. 臨床醫學研究與實踐， 2018， 3（18）：24-25.

[2] 白琛， 唐芳， 楊茹， 等. 肝動脈化療栓塞聯合恩替卡韋治療乙型肝炎相關性原發性肝細胞癌的療效及其對炎性因子和免疫功能的影響. 蘭州大學學報（醫學版）， 2016， 42（1）：10-15.

[3] 劉俊， 武金才， 鄭進方， 等. 中晚期肝癌介入治療后應用血必凈的臨床療效觀察. 海南醫學， 2018， 29（3）：413-415.

[4] 賈利剛， 張媛， 田菲. 葉酸聯合辛復寧對人乳頭瘤病毒感染宮頸癌患者血清CRP、HGF、IL-2、TNF-α水平影響研究. 中國生化藥物雜志， 2015， 35（10）：96-98.

[5] 肖琦. Foxp3、Il-2、Il-10和TGF-β1在肝細胞癌中的表達及TACE對其表達的影響. 南昌大學， 2012.

[6] 邱盛續， 徐正進， 連圣杰. 肝動脈化療栓塞術聯合射頻消融術對大肝癌患者的療效及免疫功能狀態的影響. 福建醫藥雜志， 2019， 41（1）：30-33.

[收稿日期：2019-04-25]