妊娠期糖尿病母親新生兒臍血MMP-9、SICAM-1水平與NBNA的相關(guān)性研究

郝麗，殷其改

（連云港市第一人民醫(yī)院，江蘇 連云港 222002）

妊娠合并糖尿病是妊娠期最常見(jiàn)的合并癥，孕婦糖尿病嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)慢性缺血缺氧，導(dǎo)致新生兒腦損傷隨之發(fā)生。某些炎癥因子參與了腦損傷過(guò)程，并產(chǎn)生重要作用。研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、可溶性細(xì)胞粘附分子-1（SICAM-1）在腦損傷中明顯增高[1]。本實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)母親妊娠期合并糖尿病時(shí)嬰兒臍血中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、可溶性細(xì)胞粘附分子-1（SICAM-1）表達(dá)水平改變情況，同時(shí)研究其與NBNA相關(guān)性，為早期發(fā)現(xiàn)新生兒腦損傷并指導(dǎo)臨床早期干預(yù)提供一定的臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 妊娠期糖尿病母親嬰兒及正常對(duì)照組嬰兒皆出生于連云港第一人民醫(yī)院產(chǎn)科，其中妊娠期糖尿病母親嬰兒組為實(shí)驗(yàn)組33例，同期孕周相似、血糖正常孕婦所分娩的新生兒50例為對(duì)照組。排除：①胎盤(pán)早剝；②臍帶脫垂、真結(jié)、扭轉(zhuǎn)；③妊娠合并紫紺型先天性心臟病或伴心功能不全；④較大面積肺部感染；⑤慢性肺功能不全如駝背、哮喘反復(fù)發(fā)作；⑥重度貧血；⑦妊娠期高血壓；⑧妊娠合并慢性腎炎；⑨新生兒嚴(yán)重感染、貧血、先天發(fā)育畸形、中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形、溶血性疾病或先天性心臟疾病。

實(shí)驗(yàn)組男嬰18例，女?huà)?5例，出生體質(zhì)量2.54 kg-5.35 kg（3.78±0.64）kg，胎齡37+1周-41+1周（38.57±0.99）周，APgar評(píng)分一分鐘3分-9分（8.67±1.08）分；對(duì)照組男嬰27例，女?huà)?3例，出生體質(zhì)量2.93 kg-4.5 kg（3.45±0.35）kg，胎齡37+4周-41+3周（39.61±1.03）kg，APgar評(píng)分一分鐘8分-9分（8.94±0.24）分。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較：性別、出生體質(zhì)量、胎齡差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均于生后采集臍靜脈血3 mL，立即于室溫條件下離心，3,000轉(zhuǎn)/min，離心10 min；分離到血清存放于-70oC冰箱等待統(tǒng)一檢測(cè)。

1.2.2 MMP-9、SICAM-1的檢測(cè) 選用上海西唐生物科技有限公司MMP-9、SICAM-1試劑盒，采用酶聯(lián)免疫雙抗夾心法（ELISA法）進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒要求方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 NBNA測(cè)定 NBNA測(cè)試由受過(guò)專門(mén)培訓(xùn)的醫(yī)生采用鮑秀蘭等制定的20項(xiàng)NBNA測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)評(píng)：評(píng)價(jià)有無(wú)腦損傷及腦損傷程度。

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組MMP-9、SICAM-1水平比較（Mean±SD,ng/mL）

表2 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組NBNA得分比較（M,P25-P75）

1.3 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 17.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。MMP-9、SICAM-1用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用矯正t檢驗(yàn)；NBNA呈偏態(tài)分布，用中位數(shù)（M）及四分位數(shù)間距（P25-P75）表示，兩組比較采用秩和正態(tài)近似法檢驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)組MMP-9、SICAM-1與NBNA相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組MMP-9、SICAM-1含量較正常對(duì)照組升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 實(shí)驗(yàn)組NBNA得分較對(duì)照組降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組MMP-9、SICAM-1分別與NBNA得分進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析，實(shí)驗(yàn)組兩者均呈負(fù)相關(guān)，相應(yīng)秩相關(guān)系數(shù)rs分別為-0.618；-0.549；對(duì)照組無(wú)明顯相關(guān)性。見(jiàn)表3。

3 討論

妊娠期糖尿病對(duì)新生兒造成的諸多不良影響，常表現(xiàn)為新生兒低血糖、生后體質(zhì)量大、呼吸障礙等疾病，但近年研究顯示由于孕婦糖尿病嚴(yán)重時(shí)胎盤(pán)血管可發(fā)生痙攣、硬化、狹窄，導(dǎo)致絨毛間血流灌注不足，嚴(yán)重者可出現(xiàn)胎兒宮內(nèi)缺血缺氧[2]，進(jìn)而可造成畸形胎兒、流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)等情況的發(fā)生[3]。胎兒宮內(nèi)缺血缺氧是否會(huì)引起胎兒腦損傷并延續(xù)至生后，目前尚無(wú)較大樣本的臨床報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)早期預(yù)測(cè)妊娠期糖尿病母親新生兒腦損傷的發(fā)生具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

多項(xiàng)研究顯示，當(dāng)胎兒或新生兒期缺血缺氧時(shí)，壞死的腦細(xì)胞釋放出一些蛋白質(zhì)及細(xì)胞因子，如基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9、MMP-2、S100B蛋白、SICAM-1、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、髓鞘堿性蛋白（MBP）等，這些蛋白質(zhì)及細(xì)胞因子可在血液中檢測(cè)到，研究這些指標(biāo)有助于了解是否存在腦損傷及腦組織損傷的范圍、程度。

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）是一類結(jié)構(gòu)與氨基酸組成相似，依賴鋅離子的蛋白水解酶，迄今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了26種。其具有降解多種細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrx,ECM）成分的功能，具有不同程度的特異性。近年來(lái)，MMPs被認(rèn)為參與了腦卒中后的病理生理過(guò)程，腦缺血時(shí)MMPs上調(diào)并且可以直接導(dǎo)致神經(jīng)元死亡，而應(yīng)用廣譜MMPs抑制劑或抗體可減少腦梗死的體積。研究發(fā)現(xiàn)在短暫局灶性腦缺血鼠模型中MMPs（尤其是MMP-9、MMP-2）的異常活躍直接導(dǎo)致神經(jīng)元程序性死亡和腦損害，腦缺血缺氧后蛋白溶解酶包括MMPs和纖溶酶等通過(guò)降解基底膜成分，使微血管通透性增加，血腦屏障（blood brain barrier,BBB）完整性被破壞。而血腦屏障的開(kāi)放是腦缺血再灌注后腦水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡的重要原因。所以，MMPs與腦損傷的關(guān)系逐漸為人們所重視，尤其是MMP-9、MMP-2與缺氧缺血性腦損傷關(guān)系密切[4]。我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在糖尿病母親嬰兒臍血血清中MMP-9明顯升高，且與NBNA得分負(fù)相關(guān)，說(shuō)明腦損傷程度越重，升高越明顯，因此，MMP-9可作為缺氧后腦損傷的一項(xiàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

細(xì)胞粘附分子是細(xì)胞合成的，介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)間接觸和結(jié)合的分子總稱，細(xì)胞粘附分子-1（intercellular adhesion molecule,ICAM-1）為90 ku-115 ku單鏈跨膜糖蛋白，是免疫球蛋白超家族主要成員，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多種腦損傷中起重要作用。研究表明缺血性腦損傷時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)上調(diào)ICAM-1等粘附分子加重炎癥反應(yīng)，這些粘附分子與血循環(huán)中的白細(xì)胞結(jié)合并促使白細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，白細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)釋放多種炎癥介質(zhì)、蛋白水解酶等細(xì)胞毒性物質(zhì)，導(dǎo)致血腦屏障破壞、腦組織水腫及神經(jīng)元變性壞死，造成缺血后腦組織嚴(yán)重的病理改變[5]。ICAM-1可以從細(xì)胞表面脫落，成為可溶性ICAM-1（SICAM-1），測(cè)體液中SICAM-1水平可以反映ICAM-1含量。有文獻(xiàn)已報(bào)道[6]，嚴(yán)重腦外傷及急性腦梗死患者血清sICAM-1水平明顯升高，隨病情好轉(zhuǎn)逐漸下調(diào)，ICAM-1可能通過(guò)募集炎癥細(xì)胞、釋放細(xì)胞毒物質(zhì)等引起腦組織的持續(xù)性損傷。本研究表明，在糖尿病母親嬰兒臍血血清中SICAM-1明顯升高，且與NBNA得分負(fù)相關(guān)，說(shuō)明腦損傷程度越重，升高越明顯，因此，SICAM-1可作為缺氧腦損傷的一項(xiàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

綜上所述，MMP-9、SICAM-1在妊娠糖尿病母親所產(chǎn)新生兒臍血中表達(dá)明顯上升，且與新生兒NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。臍血MMP-9、SICAM-1可作為新生兒腦損傷的指標(biāo)，通過(guò)監(jiān)測(cè)其水平變化推測(cè)新生兒腦損傷程度及預(yù)后，為更早知曉干預(yù)新生兒腦損傷提供無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)，有重要臨床意義。但其具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究探討。