不同方法炮制后白術功效指標含量變化比較

謝麗靜，高秋芳，楊昊鈺

（江蘇省無錫市第三人民醫院中藥房，江蘇 無錫 214000）

中藥種類多、成分雜、性質不一，部分中藥具有刺激性或有毒，而部分中藥則能一藥多用，經不同方法炮制后的中藥飲片，其藥效也不盡相同[1]。因此，中藥需經過特定的炮制手段才可作為臨床用藥。目前，中藥炮制仍停留在經驗、傳統的基礎上，而不同地域對同種中藥炮制的規范、藥物名稱及制作手法均有較大差異，諸多中藥材炮制品質量尚缺乏客觀、統一的標準[2-3]。本研究中對比分析了白術中藥飲片經不同方法炮制后水分、揮發油、內酯類及多糖類成分含量的變化，為將來中藥飲片的炮制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Raystzoxbap型非接觸測溫儀（北京雷泰光點技術有限公司）；烘烤箱可調溫式電爐（重慶家旺家用電器廠）；LCZOA型高效液相色譜儀（包括紫外檢測器，日本島津儀器公司）；Sartorius BP211D型電子分析天平（德國賽多利斯公司）；BUG25-12型超聲波清洗機（上海必能信超聲波有限公司）；UV-100型紫外-可見分光光度計（上海天美科技有限公司）。

1．2 試藥

甲醇、乙腈為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純；純度≥98%的白術內酯Ⅰ（批號為10172-201708）、白術內酯Ⅱ（批號為 10172-201707）、白術內酯Ⅲ（批號為10172-201708），葡萄糖對照品（批號為10172-201709），純度≥98%，均購自南昌貝塔生物科技有限公司；白術藥材產地為浙江磐安，購自浙江磐安縣宣和藥材有限公司，經我院主管中藥師尤英芬鑒定為菊科植物白術 Atractylodes macrocephala Koidz．的干燥根，藥材質量經檢驗均符合藥典規定；飲片炮制中所用灶心土由我院中藥房指定中藥師購得，并經專業技術進行粉碎。

2 方法與結果

2．1 樣品炮制

炮制時，對白術飲片質量有影響的因素包括預熱溫度、電爐火力、炒制時間等。為確保樣品具有代表性及試驗結果的可靠性，將清炒白術與土炒白術分別制備至少10批樣品。飲片炮制方法均參照藥典白術項下炮制方法，并與老藥師的經驗相結合，固定各工藝參數。

凈白術：取白術藥材，切片，洗凈，篩除泥沙。

清炒白術：將電爐功率調至1200 W，鍋中心溫度預熱至350℃后，加入切片、洗凈的白術藥材，翻炒6 min即可。共制備10批。

土炒白術：將電爐功率調至1 200 W，鍋中心溫度預熱至210℃后，放入灶心土翻炒4 min（此時鍋中心溫度應為350℃），加入切片、洗凈的白術藥材，緩慢翻炒6 min，篩除鍋中余土。每100 g藥材需用灶心土25 g，且不重復使用。共制備10批。

麩炒白術：將電爐功率調至1 200 W，待鐵鍋溫度燒至中熱，放入適量麥麩，翻炒加熱至冒出白色煙霧，投入切片、洗凈的白術藥材，不斷翻炒至顏色變為黃褐色，取出，篩除麥麩，并不斷翻滾至飲片涼透。

焦白術：鐵鍋中放入切片、洗凈的白術藥材，將電爐功率調至1 200 W，炒至白術表面呈焦褐色，并將內部呈黃色部分取出，放涼即可。

白術炭：鐵鍋中放入切片、洗凈的白術藥材，將電爐功率調至1 200 W，翻炒至白術表面呈焦黑色、內部可見焦褐色時，取出，放涼即可。

2．2 水分檢測

取2．1項下白術炮制品各3 g，精密稱定，置恒定質量且干燥的扁形稱量瓶內，將瓶蓋打開并置烘烤箱內（100～105℃）干燥5 h，蓋好瓶蓋，移至干燥器內，冷卻30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥60 min，冷卻，稱定質量，連續干燥2次，稱定質量差異不超過5 mg時停止干燥。根據減失的質量計算含水量。

2．3 揮發油含量測定

取2．1項下各白術樣品100 g，精密稱定質量，按照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD揮發油測定法甲法測定，計算揮發油含量。

2．4 內酯類成分含量測定

2．4．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm× 4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -水，梯度洗脫；流速：1 mL／min；檢測波長：242 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

2．4．2 溶液制備

稱取 2．1項下白術樣品粉末（過 40目篩）各 2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶內，精密加入甲醇40 mL，密塞后精密稱定，超聲提取（250 W，20 kHz）45 min，取出放冷至室溫，稱定質量，用甲醇補足減失的質量，取上清液，經0．45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。稱取白術內酯Ⅰ2．58 mg、白術內酯Ⅱ2．46 mg、白術內酯Ⅲ3．67 mg，精密稱定，用甲醇溶解后配制成質量濃度為 0．103 2，0．146 8，0．098 4 g／L 的溶液，經微孔濾膜濾過，取續濾液，即得對照品溶液。

2．4．3 方法學考察

專屬性試驗結果顯示，在擬訂色譜條件下，甲醇對測定無干擾。線性關系考察及回收率試驗結果見表1。精密度、穩定性、重復性試驗結果的 RSD均小于3%，表明測定方法可行。

表1 內酯類成分含量測定線性關系考察及回收率試驗結果

2．5 多糖類成分含量測定

2．5．1 顯色條件考察

顯色溫度及波長：分別考察對照品溶液及供試品溶液在不同溫度下的最大吸光度及最大吸收波長，結果顯示，在沸水中，溶液均在490 nm波長處有最大吸收。故選用沸水顯色，測定波長為490 nm。

顯色時間：吸取供試品溶液2 mL，共4份，置試管內；取2 mL蒸餾水，作為空白溶液；取葡萄糖對照品溶液1 mL，加蒸餾水稀釋至2 mL。分別加入顯色劑5 mL，搖勻后靜置 10 min，分別在沸水中顯色 10，20，30，40 min，取出并靜置20 min，于490 nm波長處檢測吸光度。結果沸水中顯色30 min吸光度最高，故將30 min作為顯色時間。

顯色劑用量：吸取供試品溶液 2 mL，共 5份，置試管內，取2 mL蒸餾水，作為空白溶液。分別加入顯色劑5 mL，搖勻后靜置10 min，分別在沸水中顯色30 min，取出并靜置15 min，于490 nm波長處檢測吸光度。結果顯色劑用量5 mL時吸光度最高，故將5 mL作為顯色劑用量。

2．5．2 溶液制備

取葡萄糖對照品，加入蒸餾水溶解，稀釋成質量濃度為1 g／mL的溶液，吸取5 mL，置50 mL容量瓶內，用蒸餾水稀釋至50 mL，搖勻，即得對照品溶液。取白術藥材粗粉2 g，置250 mL錐形瓶中，加入80%乙醇100 mL，冷浸30 min，回流提取1．5 h，濾過，再次加入80%乙醇100 mL，回流提取1 h，濾過；用80%熱乙醇洗滌藥渣并揮干乙醇，加入蒸餾水100 mL，回流提取1 h，濾過；合并2次濾液，冷卻后加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，吸取2 mL置容量瓶，加入蒸餾水稀釋至100 mL，搖勻，即得供試品溶液。

2．5．3 方法學考察

線性關系考察結果顯示，線性回歸方程為A＝28．350 C ＋0．084 7，r＝0．999 6（n＝7），葡萄糖質量濃度線性范圍為 0．006 2～0．050 0 g／L。精密度試驗結果的 RSD為1．24%（n＝6），穩定性試驗結果的 RSD為 1．23%（n＝5），重復性試驗結果的 RSD＜3%（n＝6），加樣回收試驗結果見表2。可見，多糖含量測定方法可行。

表2 多糖加樣回收試驗結果（n＝6）

2．6 樣品中各指標含量測定結果

結果見表3。可見，凈白術水分含量最高，其次為清炒白術，土炒白術與麩炒白術相當（t＝1．715，P＝0．104）且均高于焦白術與白術炭（P ＜0．05），焦白術高于白術炭（t＝80．322，P＝0．05）；清炒白術揮發油含量最高，其次為凈白術，土炒白術、麩炒白術、焦白術與白術炭相當（F＝1．247，P＝0．182）；白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ含量凈白術均低于其他炮制白術（兩兩之間則無差異），白術內酯Ⅱ含量則均無明顯差異（F＝1．421，P＝0．144）；凈白術多糖含量低于后 5種炮制品(P＜0．05）；但后5種炮制品多糖含量相當，差異無統計學意義（F＝1．547，P＝0．131）。

3 討論

炮制中藥飲片是我國中醫藥傳統制藥的特色，中藥經過炮制加工后，在功效、性味、歸經、作用趨向、毒副作用等諸多方面均會發生明顯變化，從而保證中藥最大限度地發揮其功效[4]。輔料的性能及作用不同，在藥材炮制期間所起到的作用也不盡相同，從而炮制的中藥飲片用途也不相同。如本研究中所選白術，經麩炒后能緩和燥性，促進藥物健脾之效增強，多用于運化失常、健脾不和導致的食少脹滿、表虛自汗、倦怠乏力之證；而經土炒后得到的白術則主要用于脾虛泄瀉之證，有極佳的止瀉健脾之效[5]，反映了中醫藥在臨床用藥方面的靈活性，提示了炮制工藝與藥性之間存在的密切聯系。因此，正確認識炮制工藝對炮制品功效及毒副作用起到的實質作用，是研究中藥炮制原理的關鍵。

近年來，多數研究均集中于對輔料炮制中藥飲片后有效成分的測定及毒副作用的變化等方面，化學研究方法是其研究的主要思路，對生藥材與炮制藥材所含成分進行對比分析，觀察炮制前后藥材中的成分變化是質變還是量變，以及是否產生新的成分，再進一步對不同成分或單體進行提取分析，后與藥理試驗結果相結合以解釋中藥飲片炮制原理[6-7]。這類研究思路在很大程度上可以解釋中藥飲片炮制原理，但忽略了藥材在炮制期間除輔料外，炒、蒸、炙、煮等其他因素對藥材功效的影響；而現有研究則無法解釋中藥飲片在炮制前后藥材所含成分的改變及功效毒理等變化是因加熱引起還是因輔料引起，或者是輔料與加熱共同作用的結果[8]。另一方面，目前的研究均注重炮制方法導致藥材本身成分發生變化，而忽視了藥材在體內的化學改變，而這些改變均與藥材的功效及毒副作用關系密切[9]。特別是經輔料炮制，在炮制期間輔料可能在藥物表面附著，并隨著飲片一起進入機體內，輔料一方面本身可能有功效，而另一方面可能會對藥物在體內的吸收及代謝產生影響，從而達到減毒增效目的[10]。因此，建立與輔料炮制特點相符的研究思路與方法極為關鍵。

表3 不同方法炮制白術飲片各指標測定結果比較（s，n＝10）

表3 不同方法炮制白術飲片各指標測定結果比較（s，n＝10）

注：與凈白術比較，aP ＜0．05；與清炒白術比較，bP ＜0．05；與土炒白術比較，cP ＜0．05；與麩炒白術比較，dP ＜0．05；與焦白術比較，eP＜0．05。

炮制方法 水分含量（%） 揮發油含量（%） 內酯類成分含量(mg／g)多糖含量（%）31．01 ± 1．57 46．41 ± 2．02a 47．01 ± 1．98a 46．57 ± 2．14a 45．71 ± 1．57a 45．84 ± 1．62a 1．671 0．097凈白術清炒白術土炒白術麩炒白術焦白術白術炭F值P值11．01 ± 0．12 9．02 ± 0．12a 6．17 ± 0．06ab 6．12 ± 0．07ab 4．01 ± 0．03abcd 2．74 ± 0．04abcde 126．579 0．000 0．77 ± 0．02 1．31 ± 0．06a 0．61 ± 0．03ab 0．59 ± 0．02ab 0．58 ± 0．03ab 0．56 ± 0．02ab 1．857 0．067白術內酯Ⅰ0．44 ± 0．02 0．52 ± 0．03a 0．53 ± 0．02a 0．54 ± 0．03a 0．54 ± 0．02a 0．53 ± 0．03a白術內酯Ⅱ0．29 ± 0．01 0．29 ± 0．02 0．30 ± 0．02 0．31 ± 0．03 0．29 ± 0．03 0．31 ± 0．04白術內酯Ⅲ0．41 ± 0．02 0．74 ± 0．04a 0．76 ± 0．03a 0．77 ± 0．03a 0．75 ± 0．04a 0．76 ± 0．04a

本研究中將白術經6道不同炮制工藝分別制備成凈白術、清炒白術、土炒白術、麩炒白術、焦白術及白術炭。凈白術是白術的原藥材，在去除雜質后曬干即可，其功效偏于利水消腫、健脾燥濕，對四肢浮腫、脾胃虧虛有理想療效，同時對腹痛、便秘、腹脹、嘔吐改善作用極佳，臨床多與陳皮、黨參、茯苓配伍治療風濕關節痛。清炒白術健脾功效極佳，多用于安胎、和胃、止瀉、健脾。土炒白術功效主要偏于燥濕、補脾、止瀉，如參苓白術散中所用的土炒白術可治療脾胃氣虛之證，癥見形體虛弱、或吐或瀉、飲食不消、四肢無力等，效果顯著。麩炒白術有理想的健脾益氣之效，《脾胃論》中提到，麩炒白術用于補中益氣湯，對脫肛、中氣下陷、臟器下垂等作用極佳，且治愈后復發率低。焦白術又稱焦術，有增強醒脾、收斂止瀉、溫化寒濕之效，具有澀腸止瀉、補氣健脾之效，常用于寒性、慢性腹瀉，且焦白術收澀溫中之效較干炒白術更佳。白術炭收斂止血之效較其他方法炮制的白術飲片更理想，常用于慢性、寒性腹瀉長久所致出血癥的治療[11-12]。

本研究結果顯示，與凈白術相比，清炒白術、土炒白術、麩炒白術、焦白術、白術炭中多糖含量更高，而白術中多糖是止瀉健脾的中藥物質基礎，相較于其他白術飲片，凈白術止瀉之效較弱。通過揮發油含量分析可知，白術土炒后揮發油含量明顯降低，且主要成分含量有較大變化，但清炒白術的揮發油含量則有明顯升高。出現該結果的原因可能與炮制輔料吸附揮發油有關，而在清炒過程中揮發油揮發后多被飲片表面所吸附，因此清炒白術出油快且含量高。因蒼術酮是揮發油中主要燥性成分，土炒后揮發油含量降低，則蒼術酮含量降低，提示土炒白術藥性緩和，刺激性較小，這與中醫藥炮制傳統理論相符[13]。多糖與內酯類成分含量測定結果顯示，土炒、麩炒等輔料炮制后白術中的內酯類成分與多糖含量增加，與凈白術及清炒白術相比發現，加熱是導致白術化學成分發生改變的主要原因，而受到輔料炮制的影響并不明顯，提示在后續中藥飲片炮制工藝中需注意炮制火力及火候控制，應關注藥材在炒制期間成分變化的動態規律，為未來中藥飲片的炮制工藝提供合理、科學的參考依據[14-15]。

綜上所述，經不同方法炮制的中藥飲片的水分、揮發油、內酯類成分及多糖含量均不相同，特別是藥材本身與其他方法炮制后比較差異最明顯，臨床應根據具體情況選擇炮制方法，以保證用藥的有效性及安全性。