皮炎靈搽劑質量標準研究

李 娜，趙娜娜，陳 晴，葛 媛，楊 陽，朱 斌

（中國人民解放軍第九七醫院藥劑科，江蘇 徐州 221004）

皮炎靈搽劑為我院非標準自制制劑，由間苯二酚、水楊酸、冰片、醋酸氟輕松等組方，具有抗菌消炎、抗過敏、止癢作用，主治神經性皮炎、慢性濕疹等癥，在我院臨床應用10余年，療效確切。前期，本課題組通過家兔及豚鼠皮膚刺激性實驗[1]、安全性實驗[2]，證實該制劑為較安全的外用制劑。本研究中通過理化鑒別、薄層色譜(TLC)鑒別、相關檢查及對該制劑中間苯二酚、水楊酸含量的測定，以期為其質量控制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：1260型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）；AB265S-5型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司，最大載荷220 g，最小分度值0．01 mg）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號為20160902）。

試藥：皮炎靈搽劑（我院藥劑科制劑室自制，批號分別為 20150611，20150617，20150625，規格均為每瓶20 mL）；間苯二酚對照品（批號為 100389-201202，純度為100%），水楊酸對照品（批號為100106-201104，純度為100%），冰片對照品（批號為110743-200905，純度為100%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇(德國Merck公司)為色譜純，其余試劑(國藥集團化學試劑有限公司)均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2．1 性狀

本品為無色或淡黃色澄明溶液，具有清香氣味。

2．2 鑒別

理化鑒別：取樣品1 mL，加三氯化鐵試液2滴，即顯藍紫色，再加氨試液數滴，即變為棕黃色，符合規定。

TLC鑒別：取冰片5 mg，用75%乙醇溶解至1 mL，即得對照品溶液。取樣品2 mL，作為供試品溶液。按皮炎靈搽劑處方和工藝制備缺冰片的陰性對照品溶液。按2015年版《中國藥典（四部）》TLC法[3]20試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷 -乙酸乙酯（6∶1，V／V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸溶液，于105℃下加熱至斑點顯色清晰，日光燈下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2．3 相關檢查

相對密度：取樣品適量，按2015年版《中國藥典(四部)》通則0601相對密度測定法[3]73-74測定，結果樣品相對密度為1．113。

pH：取樣品適量，按2015年版《中國藥典(四部)》通則0631pH值測定法[3]77-78測定，結果樣品的pH為2．7。

最低裝量：取樣品5瓶，按2015年版《中國藥典(四部)》通則最低裝量檢查法[3]125測定，結果樣品最低裝量為（20．08 ± 0．56）mL，符合規定。

微生物限度：取樣品適量，按2015年版《中國藥典(四部)》通則方法[3]149-151檢測。結果，樣品細菌數≤100cfu／mL，霉菌數≤10 cfu／mL，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌未檢出，均符合規定。

2．4 刺激性試驗

取樣品適量，涂于手臂內側，24 h后進行觀察[4]。結果未見紅腫、水皰等刺激癥狀。

2．5 含量測定

2．5．1 色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（150 mm× 4．6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）-2% 乙酸溶液（B），梯度洗脫（0～15 min，30% →60%A）；流速：1．0 mL ／min；檢測波長：270 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL。

2．5．2 溶液制備

取間苯二酚對照品約10 mg、水楊酸對照品約5 mg，精密稱定，置同一5 mL容量瓶中，加入初始流動相溶解并定容，制成混合對照品貯備液。取適量，用初始流動相稀釋，制成間苯二酚、水楊酸質量濃度分別為0．1 g／L和0．05 g／L的混合對照品溶液。

精密量取樣品80 μL，置4 mL容量瓶中，用初始流動相定容，制成供試品貯備液，精密量取200 μL，置2 mL容量瓶中，用初始流動相定容，經0．45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

按樣品處方和工藝制備缺間苯二酚、水楊酸的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．5．3 方法學考察

專屬性試驗：取 2．5．2項下 3種溶液各適量，按2．5．1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果見圖2。陰性對照無干擾，表明方法專屬性良好。

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別精密量取2．5．2項下混合對照品溶液 0．2，0．4，0．6，0．8，1．0，1．4，1．6，2．0 mL，置 20 mL容量瓶中，加初始流動相定容，搖勻，制成系列混合對照品溶液，各精密量取 20 μL，按 2．5．1 項下色譜條件進樣測定。以待測成分質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得間苯二酚和水楊酸回歸方程分別為 Y＝16 451 X＋47．856，r＝0．999 5(n＝8)，Y＝690 X＋0．340 5，r＝0．999 3(n＝8)。結果表明，間苯二酚和水楊酸質量濃度線性范圍分別為0．02～0．20 g／L和 0．01～0．1 g ／L。

精密度試驗：取2．5．2項下混合對照品溶液適量，按2．5．1項下色譜條件連續進樣6次，結果間苯二酚和水楊酸峰面積的 RSD分別為0．42%和0．56%（n＝6），表明日內精密度良好。按2．5．1項下色譜條件連續3 d進樣測定，每天測定3次，結果間苯二酚和水楊酸峰面積的 RSD 分別為 0．45% 和 0．59% （n＝9），表明日間精密度良好。

穩定性試驗：取2．5．2項下同一供試品溶液（批號為 20150617）適量，分別于室溫下放置 0，1，2，4 h 后按2．5．1項下色譜條件進樣測定。結果間苯二酚和水楊酸峰面積的 RSD 分別為 0．20% 和 1．01% （n＝4），表明供試品溶液室溫放置4 h內基本穩定。

重復性試驗：精密稱取樣品（批號為20150617）適量，依法制備供試品溶液，再按2．5．1項下色譜條件連續進樣5次，測定，記錄峰面積并計算含量。結果，間苯二酚和水楊酸平均含量分別為 31．56 g／L和 30．85 g／L，RSD 分別為 1．42% 和 1．98%（n＝5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量樣品（批號為20150611）適量，共 6 份，每份 0．6 mL，分別加入低、中、高質量濃度的間苯二酚、水楊酸對照品，依法制備供試品溶液，再按2．5．1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n＝9)

2．5．4 樣品含量測定

取3批樣品各適量，依法制備供試品溶液，再按

2．5．1項下色譜條件進樣測定，平行測定3次，記錄峰面積并計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（s，n＝3）

表2 樣品含量測定結果（s，n＝3）

注：相對含量指測定值與標示量的比值。

批號 間苯二酚 水楊酸20150611 20150617 20150625含量（g／L）30．30 ± 0．01 29．71 ± 0．03 30．10 ± 0．04相對含量（%）101．00 99．03 100．33含量（g／L）30．44 ± 0．10 31．67 ± 0．63 31．76 ± 0．11相對含量（%）101．47 105．57 105．85

3 討論

皮炎靈搽劑處方由間苯二酚（30 g）、水楊酸（30 g）、冰片（10 g）、醋酸氟輕松（0．25 g）等藥物組方。其中，水楊酸具有軟化角質、止癢消炎的作用；間苯二酚能殺滅細菌和真菌，同時也有止癢和溶解角質的作用[5]；冰片能消腫止痛且有抗菌作用；醋酸氟輕松可抗炎、止癢、抗過敏，輔以皮膚助滲劑二甲基亞砜可增強藥效；同時使用甘油可減少藥物刺激且濕潤、保護皮膚。考慮間苯二酚在乙醇或水中極易溶解，水楊酸在乙醇中易溶、水中微溶，冰片在乙醇中易溶，醋酸氟輕松在乙醇中微溶、水中不溶，故選擇75%乙醇作為溶劑，一方面保證處方中各藥物能全部溶解，另一方面75%乙醇也是臨床常用的消毒劑。

前期，我院主要采用滴定法測定間苯二酚和水楊酸的含量，但該方法受人為操作影響因素較大。為改進和提升質量標準，本研究中采用高效液相色譜法測定間苯二酚和水楊酸的含量。經方法學驗證，該方法簡便快捷、靈敏準確、重復性好，適用于皮炎靈搽劑的質量控制。

測定間苯二酚和水楊酸含量時，220，230，254，270，276 nm均可作為檢測波長[6-10]。預試驗表明，在220，230，254，276 nm波長處，色譜圖雜峰較多；而在270 nm波長處，間苯二酚與水楊酸分離度均較好，色譜圖雜峰較少，且對測定無干擾。因此，確定檢測波長為270 nm。

本研究中參考文獻[11-14]，考察了流動相為甲醇-磷酸二氫鉀溶液（0．1 mL NaOH 調 pH 至 6．14）（35 ∶65、40 ∶60、20 ∶80，V／V），甲醇 -0．05%磷酸溶液（20 ∶80、30 ∶70、50 ∶50，V／V），甲醇 -2%乙酸溶液（25 ∶75、20∶80、35 ∶65、30 ∶70，V／V）時等度和梯度洗脫對色譜行為的影響，結果表明，流動相為甲醇-2%乙酸溶液、梯度洗脫時間為15 min時，各色譜峰分離良好，無拖尾。