采用EBV-DNA載量檢測方法檢測1306例患者臨床分析

闞惠娟 ，薛雪 ，虞健

1.江蘇省蘇州市立醫院東區兒科，江蘇蘇州 215001;2.江蘇省蘇州市立醫院東區檢驗科，江蘇蘇州 215001

Epstein-Barr病毒（EBV）是1964年由 EpsteinBarr等人在一個非洲患者體內發現的是，屬于γ亞科皰疹病毒[1]。EBV主要經過唾液傳播，感染后可長期潛伏于體內，一旦活化，可導致全身幾乎所有臟器損害。目前臨床上用于EBV的實驗室檢測方法主要有病毒培養、免疫學檢測、EBV-DNA載量檢測三大類。虞敏等認為EBV-DNA載量檢測對小兒EB病毒感染是否處于活動期重要意義[2]。該文采用EBV-DNA載量檢測方法分析2014年11月—2017年5月在蘇州市立醫院東區住院患者1306例進行臨床分析。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在蘇州市立醫院東區的1306例住院患者進行EBV-DNA檢測，該研究經過醫院倫理委員會討論同意，并經患者家屬簽字同意。這些患者臨床表現有：發熱、扁桃體腫大、淋巴結腫大、肝脾腫大、肝功能異常及鼻咽部腫瘤、不明原因反復感染的患者。

1.2 EBV-DNA載量的檢測方法

采用湖南圣湘生物科技有限公司的EB病毒核酸定量檢測試劑盒，取外周血樣本，使用同公司的全血基因組提取試劑處理，得到DNA作為待測樣本，提取血清EBVDNA具體按照說明書進行，將待測樣本嚴格按照說明書進行PCR擴增，檢驗結果的參考區間見試劑盒說明書。

1.3 統計方法

統計方法采用Excel建立數據庫，運用統計學分析軟件IBM SPSS19.0進行統計分析。計數資料采用[n（%）]表示，行χ2檢驗，各組間率的比較采用行×列字χ2檢驗，當總樣本量n≥40且所有的單元格的理論頻數 （期望頻數）T≥5時，采用 Pearsonχ2檢驗，根據 person χ2的結果，當總樣本量n≥40但有1≤T＜5時，采用連續性校正χ2檢驗，當總樣本量n＜40，或最小理論頻數T＜1，或檢驗所得P值接近于檢驗水準α，采用Fisher確切概率法檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同年齡段EBV感染情況

成人與兒童均可感染EBV，在檢測的1306例住院患者中共檢出407例EBV-DNA陽性患者，整體檢出率31.16%（表1）。其中男性和女性EBV感染率陽性率分別為32.19%，29.88%（表2），差異無統計學意義（P＞0.05）。0～＜14歲兒童、14歲以上EBV-DNA陽性率分別318例（24.35%）和89例（6.81%），差異有統計學意義（P＜0.05）。在14歲以下兒童中，各年齡組：0～1歲、1～3歲、3～6歲，6～14歲，EBV-DNA陽性率分別為13.51% ，27.4% ，38.35%和32.87%。其中男性感染陽性率分別為17.24%、33.94%、37.33%、33.78%、，女性感染率分別為0.00%、28.49%、39.49%、31.91%（表3），運用統計學分析軟件IBM SPSS statistic 19.0進行統計分析，不同年齡患者EBV感染率差異有統計學意義（P＜0.05），不同性別兒童EBV感染率差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 2014年11月—2017年5月期間不同年齡段EBV感染的分布情況

表2 2014年11月—2017年5月期間不同性別EBV感染的分布情況

表3 2014年11月—2017年5月期間14歲以下不同年齡段EBV感染的分布情況

不同性別EBV感染陽性率差異無統計學意義，P=0.4，＞0.05。

2.2 EBV病毒所致疾病臨床表現

1306例住院患兒者中共檢出的407例EBV-DNA陽性患者，其中，14歲以上患者89例，14歲以下患者318例，其臨床診斷分布情況見分別見表4、表5

表4 14歲以上EBV-DNA陽性者臨床診斷分布

表5 14歲以下EBV-DNA陽性者臨床診斷分布

3 討論

EBV，又稱人類皰疹病毒4型，類似于其他皰疹病毒，EBV基因組為雙鏈線性DNA分子，EBV的感染周期包括初始感染和潛伏感染。初始感染階段促進了EBV的傳播并引起原發感染，也對潛伏感染的建立起到了一定的作用[3]。EBV通過gp 350/200與B細胞表面的CR2相結合而進入B細胞，并誘導其分化為記憶性B細胞，形成長期潛伏感染，EB病毒在潛伏感染在B細胞中，EBV很少發生復制，從而逃避了機體的免疫監視，并且還可以誘導B細胞分化為類淋巴母細胞系細胞[4]。

活動期的EBV可破壞淋巴細胞，進入血液循環，絕大多數的血漿游離DNA片段大小為82～181kb，因此可采用PCR檢測血漿中游離DNA的含量，通過定量分析可以準確測定出病毒載量，從而反映體內EBV復制情況。由于血漿EBV-DNA僅存在于病毒血癥期，EBV感染2周后開始迅速下降，因此早期檢測血清EBV-DNA可提高EBV現癥感染，并對EBV感染是否處于活動期有重要指導意義[5]。該研究提取外周血全血中EBV-DNA進行定量檢測，共檢出EBV-DNA陽性407例，陽性率31%，其中男性243例，女性173例，男：女約1.3左右，不同性別EBVDNA陽性率差異無統計學意義（P＞0.05）。

該次研究的1306例患者中，發現所有年齡段均可感染EB病毒，故而EBV人群中普遍存在，有研究表明90%的健康人可終身攜帶[6]。該次研究中0～14歲兒童占78%，考慮與兒童免疫力低下，從而易感染EBV有關[7]。其中0～1歲、1～3歲、3～6歲，6～14歲，EBV-DNA 陽性率分別為13.51% ，27.4% ，38.35% 和32.87%，1～6歲兒童 EBV-DNA陽性率在14歲以下兒童中占大部分，約有68%左右，由此可見，1～6歲兒童對EBV尤其易感。其原因可能與1～6歲期間，兒童免疫系統逐步發育，但尚未發育成熟，其免疫功能容易受到病毒侵襲有關。該次研究結果與王春遠、張勝等的研究相符[8-9]，而朱嬋紅等[10]分析335例外周血EBVDNA檢測結果發現，0～3歲兒童EBV感染陽性率77%，與該研究略有差異，考慮可能與不同區域、不同人群有關。

該次研究中共檢出的407例EBV-DNA陽性患者，其中14歲以上89例，14歲以下318例，不同年齡段患者感染EBV后的臨床表現各有不同。14歲以下患者感染EBV后臨床表現有：呼吸系統疾病占88%，傳染性單核細胞增多癥9.7%，其他疾病2.3%，其中合并有支原體感染136例（43%），見表5。呼吸系統疾病包括支氣管肺炎、上呼吸道感染、扁桃體炎、急性支氣管炎，合并有肝功能異常4%，合并有血液系統改變2%。由此可見兒童EBV感染后主要引起呼吸道感染，且容易合并支原體感染。有研究發現，EBV合并支原體感染可加重肺內外損傷，且EBV拷貝數高低是影響MP混合EBV感染后肺炎肺內外損傷程度的重要原因[11]。14歲以上EBV-DNA陽性患者臨床表現以腫瘤為主（表4），其中鼻咽癌占79%。EBV是第一個發現能引起腫瘤的疾病毒[12]，目前EBV-DNA已成為鼻咽癌重要腫瘤標志物，在鼻咽癌的診斷、分期、治療、預后中有重要指導意義[13]。由于EBV具有潛伏感染方式，14歲以下兒童期初發感染患者，在EBV活動期后一部分被清除，另有一部分將進入潛伏感染狀態，成長過程中，在自身機體的免疫力低下或者環境改變等情況下，潛伏感染的EBV會被大量激活，再次進入裂解復制階段，引起某些疾病，如傳染性單核細胞增多癥、慢性EBV感染(CAEBV)、嗜血細胞綜合征（HLH）及腫瘤性疾病。因此兒童期EBV感染需引起重視并加強隨訪。