家用便攜式凝血檢測儀的一致性分析

蔡培培，張 威，周連群，嚴(yán)茹紅，朱紅楠△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州科技城醫(yī)院檢驗科，江蘇蘇州 215153；2.中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所，江蘇蘇州 215153)

活化部分凝血活酶時間(APTT)是臨床凝血四項檢測中的一項，是內(nèi)源凝血系統(tǒng)缺陷篩查實驗和普通肝素抗凝治療中抗凝效果的重要指標(biāo)[1-2]，臨床醫(yī)學(xué)也將其視作監(jiān)測凝血功能的重要指標(biāo)之一[3-4]。目前，對APTT的檢測主要是利用光學(xué)全自動凝血檢測儀，雖然其具有檢測精度高，但體積大、價格昂貴、檢測時間長，無法實現(xiàn)類似床旁檢測血糖儀設(shè)備那樣讓患者時刻了解自身凝血狀況[5]。本研究采用派瑞林修飾石英晶體微天平(P-QCM)芯片的家用便攜式凝血檢測儀(簡稱P-QCM凝血儀)對APTT進(jìn)行了檢測，分析其重復(fù)性和穩(wěn)定性，并與全自動凝血檢測儀Sysmex CS 2000i(簡稱Sysmex CS 2000i凝血儀)臨床實測進(jìn)行了對比，旨在判斷其臨床可靠性，為實現(xiàn)床旁檢測凝血提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來源 收集2017年1月南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州科技城醫(yī)院收治的17例健康孕婦血液，其中10例上午空腹采血2.7 mL加入含3.8%枸櫞酸鈉0.3 mL的真空試管中，立即混勻，分離血漿待測。另外7例作為血漿和全血檢測樣本，其中血漿樣本制備方法如前所述，全血樣本無需處理，直接進(jìn)行檢測。

1.2儀器與試劑 Sysmex CS 2000i凝血儀及其配套APTT試劑(希森美康公司)，P-QCM凝血儀及其配套芯片和試劑(中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所提供)，KDC-2046低速冷凍離心機(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)，APTT激活劑、APTT起始劑 25 mmol CaCl2(上海太陽公司)等。

1.3方法

1.3.1P-QCM凝血儀檢測 在進(jìn)行APTT檢測前空室進(jìn)行頻率測定。將50 μL APPT激活劑放入37 ℃水浴中孵育2 min，然后與50 μL血漿樣本在微離心管中混勻，37 ℃孵育3 min。采用移液槍將100 μL混合液滴加到檢測室，整個芯片完全覆蓋且無氣泡。然后，添加50 μL 25 mmol的CaCl2溶液進(jìn)行混凝反應(yīng)，且整個檢測過程中均保持在37 ℃條件下。另外，全血樣本檢測無需進(jìn)行前處理，直接將其滴加到檢測室進(jìn)行檢測。

1.3.2Sysmex CS2000i凝血儀檢測 按儀器設(shè)定檢測參數(shù)自動測定并報告APPT，試劑全部為該檢測儀配套試劑。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并對2臺儀器的檢測結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析。 以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1P-QCM凝血儀檢測的穩(wěn)定性和重復(fù)性 以10例健康孕婦的新鮮血液進(jìn)行P-QCM凝血儀的頻率波動數(shù)據(jù)檢測，其頻率CV%為2.58%，表明所采用的P-QCM凝血儀具有相對的穩(wěn)定性。同時，以同一樣本進(jìn)行10次APTT檢測，其CV%為1.24%，具有良好的重復(fù)性。見表1。

表1 P-QCM凝血儀的頻率波動和APTT檢測結(jié)果

續(xù)表1 P-QCM凝血儀的頻率波動和APTT檢測結(jié)果

2.2臨床實測結(jié)果比較 P-QCM在APTT檢測方面的結(jié)果與目前實驗室所用SYSMEX CS 2000i凝血儀具有良好的線性擬合，線性回歸決定系數(shù)(R2)達(dá)0.983，表明P-QCM凝血儀可用于APTT的檢測。見圖1。

圖1 P-QCM凝血儀檢測與Sysmex CS 2000i凝血儀檢測的檢測結(jié)果對比

P-QCM凝血儀檢測全血(s)血漿(s)136.05528.14236.05528.32336.05528.10437.01028.60536.05528.11635.65027.21736.05528.12CV(%)1.151.51

圖2 P-QCM凝血儀全血與血漿APTT曲線導(dǎo)數(shù)對比

2.3P-QCM凝血儀檢測的全血檢測結(jié)果 以7例血液樣本進(jìn)行全血和血漿檢測，血漿APTT點比全血APTT點少8 s，全血和血漿的CV%分別為1.15%和1.51%，表明P-QCM能實現(xiàn)對全血APTT的穩(wěn)定性檢測。見表2。同時，P-QCM凝血儀全血與血漿APTT對比曲線導(dǎo)數(shù)擬合也進(jìn)一步佐證了上述的時間差。見圖2。

3 討 論

POCT是對目前實驗室檢測的有效補充，而血液方面的快速檢測，更能對某些疾病提供有效的監(jiān)控和預(yù)防?，F(xiàn)有的POCT凝血儀主要是采用電化學(xué)類傳感器[6-7]，其需要配套的試劑或試紙條，成本相對較高，而壓電傳感器具有更高的檢測靈敏度、響應(yīng)速度也更快，且能實現(xiàn)免離心[8-9]。

本研究結(jié)果顯示，以10例健康孕婦的新鮮血液進(jìn)行P-QCM凝血儀的頻率移動數(shù)據(jù)檢測，其頻率CV%為2.58%，表明P-QCM凝血儀具有良好的穩(wěn)定性。但頻率也表現(xiàn)出一定的降低，可能由于可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成了纖維蛋白，凝聚在了生物材料表面上，而這種在生物材料表面形成的纖維蛋白網(wǎng)與之前文獻(xiàn)報道的凝血因子Ⅻ有著直接的聯(lián)系。因此，接觸點的激活對生物材料相關(guān)凝聚物的激活是一個重要的因素[10-11]。同時，以同一樣本進(jìn)行10次APTT檢測，其CV%為1.24%，比常規(guī)醫(yī)院檢驗科對凝血實驗重復(fù)性要求的CV%為4.0%存在明顯的差異[12]，甚至比目前臨床在用的POCT凝血儀檢測結(jié)果的CV%小[13-14]。表明本研究所用的P-QCM凝血儀具有較高的重復(fù)性。

本研究以10例健康孕婦的新鮮血液進(jìn)行APTT檢測，每次測定10次，P-QCM凝血儀檢測的結(jié)果與醫(yī)院檢驗科室Sysmex CS 2000i檢測儀所測得的結(jié)果進(jìn)行線性回歸擬合，R2=0.983，表明本研究所用的家用式的P-QCM凝血儀能用于對APTT的檢測，甚至比目前在用的POCT凝血儀在APTT檢測方面具有更好的擬合性[14]。此外，后續(xù)采用7例血液樣本進(jìn)行了全血和血漿檢測，血漿APTT點比全血APTT點少8 s，全血的CV%為1.15%，表明本研究所用的P-QCM凝血儀能實現(xiàn)對全血APTT的穩(wěn)定性檢測。曲線導(dǎo)數(shù)圖擬合表明，該儀器全血APTT比血漿APTT多8 s，與前面所測定的數(shù)據(jù)點差值相符，表明本研究所用的P-QCM凝血儀能適用于全血檢測。

P-QCM凝血儀采用壓電傳感器檢測具有較好的重復(fù)性、穩(wěn)定性及擬合性，能替代目前醫(yī)院所用全自動凝血分析儀檢測結(jié)果，但由于方法原理的差異，APTT 檢測需通過確定其醫(yī)學(xué)決定水平和參考范圍才可用于臨床，進(jìn)而實現(xiàn)POCT的凝血檢測。這不僅能為家庭凝血檢測提供方便性，也能為臨床醫(yī)生快速、準(zhǔn)確地提供監(jiān)測報告。但同時看到，本研究所用的樣本量相對較少，也未進(jìn)行相應(yīng)的Bland-Altman分析[15]，后續(xù)將針對這方面的不足繼續(xù)進(jìn)行研究，以期完善P-QCM凝血儀在實際POCT應(yīng)用中的數(shù)據(jù)支持。

4 結(jié) 論

P-QCM凝血儀的實驗結(jié)果重復(fù)性良好，具備臨床檢測能力，能適應(yīng)于全血檢測，可用于床旁檢測。