抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體診斷自身免疫性溶血性貧血的分析

杜漢芳，許海軍，趙 穎

(十堰市太和醫院：1.檢驗科；2.心內科，湖北十堰 442000)

自身免疫性溶血性貧血(AIHA)是一類由于B淋巴細胞功能亢進而使體內產生抗自身紅細胞(RBC)抗體，并通過該抗體激活補體或直接與RBC表明抗原結合導致靶RBC破裂的獲得性溶血性疾病[1]。AIHA主要見于青年人群，危險性大，嚴重者可發生高熱、急性心功能衰竭、腎衰竭等并發癥[2]。目前，對AIHA的診斷多為排他性診斷，主要檢測項目有網織紅細胞計數、血紅蛋白(Hb)、RBC形態學鏡檢、乳酸脫氫酶(LDH)和總膽紅素(TBIL)等。但因其發病機制尚未明確，且患者臨床癥狀不典型，為疾病的早期診斷及救治帶來一定困難。近年來，有研究表明，包括抗髓過氧化物酶(MPO)、抗腎小球基膜(GBM)、抗蛋白酶3(PR3)、抗Ku抗體等多種自身抗體在多種自身免疫性疾病中可被檢測到，成為疾病診斷的潛在生物學標志物[3-5]。同時，因多個自身抗體與多種疾病間的網狀關聯關系，使單獨應用某一個標志物作為診斷指標對自身免疫性疾病的早期診斷的難度加大，聯合多個指標將顯著提高對疾病的診斷效能。本研究收集本院AIHA患者、其他自身免疫性疾病患者和健康體檢者血液樣本，探討了血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體診斷AIHA的臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年2月至2017年8月本院收治的AIHA患者133例，所有AIHA患者的診斷均符合《血液病診斷及療效標準》，其中男51例，女82例；原發性AIHA患者94例(原發性AIHA組)，繼發性患者39例(繼發性AIHA組，其中繼發于系統性紅斑狼瘡16例、類風濕性關節炎17例、甲狀腺疾病6例)。選擇同期患有其他自身免疫性疾病患者55例(其他自身免疫性疾病組，其中系統性紅斑狼瘡22例、類風濕性關節炎13例、甲狀腺自身免疫病10例、硬皮病4例和其他疾病6例)和健康體檢者106例(體檢組)。所有研究對象均排除惡性腫瘤、急性與慢性感染、正在接受免疫治療和妊娠期婦女等。本研究的開展經醫院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2血液標本收集與處理 使用乙二胺四乙酸抗凝采血管采集研究對象靜脈血2 mL用于血常規檢測；使用含有促凝劑的一次性真空采血管收集研究對象靜脈血5 mL，待血清析出后，于3 500 r/min離心15 min后收集血清標本于-20 ℃冰箱儲存備用。

1.3實驗室指標檢測 相關血常規指標檢測采用DxH800血細胞分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)完成，相關生化指標檢測采用全自動生化分析儀AU5800(美國貝克曼庫爾特公司)完成。血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體檢測均采用免疫印跡法，檢測試劑均購自歐蒙醫學診斷(中國)有限公司。檢測過程嚴格按試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1研究對象的臨床特征 各組研究對象年齡、性別、吸煙史和飲酒史比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，Hb、RBC、LDH和TBIL比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。與體檢組比較，原發性AIHA組患者Hb、RBC和繼發性AIHA組患者Hb、RBC水平均顯著降低，差異均有統計學意義(t=-5.104、-3.231，-4.643、-2.311；P<0.05)，原發性AIHA組患者LDH、TBIL和繼發性AIHA組的LDH、TBIL水平均顯著升高，差異均有統計學意義(t=8.809、3.133，7.991、2.959；P<0.05)。與其他自身免疫性疾病組比較，原發性AIHA組患者Hb、RBC和繼發性AIHA組患者Hb、RBC水平均顯著降低，差異均有統計學意義(t=-4.786、-3.354，-4.576、-2.326；P<0.05)，原發性AIHA組患者LDH、TBIL和繼發性AIHA組患者LDH、TBIL水平均顯著升高，差異均有統計學意義(t=8.532、3.176，7.881、2.805；P<0.05)。而原發性AIHA組患者Hb、RBC、LDH、TBIL與繼發性AIHA組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2各組研究對象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體檢測陽性數比較 各組研究對象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體檢測結果比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。與體檢組比較，原發性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體和繼發性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數均顯著升高，差異均有統計學意義(χ2=6.214、4.431、7.001，5.168、9.219、6.111；P<0.05)。與其他自身免疫性疾病組比較，原發性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體和繼發性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數量均顯著升高，差異均有統計學意義(χ2=5.677、4.398、6.719，5.104、9.287、6.912；P<0.05)。單獨應用抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體診斷AIHA的靈敏度分別為74.4%、45.1%和82.0%，特異度分別為93.3%、95.3%和92.5%。與原發性AIHA比較，繼發性AIHA組患者抗GBM抗體陽性數顯著升高，差異均有統計學意義(χ2=2.091，P<0.05)。而各組患者抗Ku抗體檢測結果比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體與AIHA臨床特征的關系 不同性別、年齡，有無吸煙、飲酒史，不同Hb、RBC、LDH、TBIL水平AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

2.4風險評估 血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體與AIHA的發生有關(單因素分析)，在校正了年齡、性別、吸煙、飲酒等因素后血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體仍與AIHA的發生相關(多因素分析)。見表4。

表1 研究對象的臨床基本信息

注：與體檢組比較，*P<0.05；與其他自身免疫性疾病組比較，#P<0.05

表2 各組研究對象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體檢測陽性數比較[n(%)]

注：與體檢組比較，*P<0.05；與原發性AIHA組比較，△P<0.05；與其他自身免疫性疾病組比較，#P<0.05

表3 AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數與臨床特征的關系(n=133)

續表3 AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數與臨床特征的關系(n=133)

表4 血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體對AIHA的預測價值

3 討 論

發生AIHA時機體自身產生抗RBC抗體導致RBC溶解破裂，使循環中攜帶氧的RBC數量不足而產生一系列癥狀，如乏力、黃疸等[6]。國外相關數據顯示，AIHA患者占溶血性疾病的30.0%，國內AIHA的發生率占獲得性溶血性貧血的第2位，僅次于陣發性睡眠性血紅蛋白尿病[7]。

AIHA的發生可由多個不同類別的抗體參與，并以免疫球蛋白G(IgG)和IgM類抗體為主。同時，根據所涉及的自身抗體不同，疾病的病理學表現又會有所不同。目前，對AIHA的診斷多為排他性診斷，大多數患者確診時體內溶血過程已發生并造成了相應的病理學和功能學改變，有的甚至造成了嚴重的并發癥，如急性腎衰竭、重度貧血，甚至休克等[8-9]。如何早期診斷AIHA并及時采取有效預防措施是臨床醫生關注的重點之一。

抗MPO、抗PR3抗體均屬抗中性粒細胞質抗體，起初研究發現，主要是針對自身中性粒細胞的細胞質成分。抗GBM抗體是由多種組分形成的細胞外基質混合體，主要成分為膠原Ⅳ，最初在肺出血-腎炎綜合征患者中被發現。近年來，有研究表明，在原發性和過敏性肉芽腫性血管炎、抗腎小球基底膜疾病、干燥綜合征、系統性紅斑狼瘡、韋格納肉芽腫等多種自身免疫性疾病中檢測到患者血清抗MPO、抗PR3、抗GBM抗體陽性[10-12]。提示抗MPO、抗PR3、抗GBM抗體在多種自身免疫疾病的發生中均具有重要作用。由于多個自身抗體與多種疾病間的網狀關聯關系，使單獨應用某一個標志物作為診斷指標對自身免疫性疾病的早期診斷的難度加大，聯合多個指標將顯著提高對疾病的診斷效能。

本研究通過收集本院AIHA患者、其他自身免疫性疾病患者和健康體檢者血液樣本，探討了血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體診斷AIHA的臨床價值，結果顯示，與體檢組和其他自身免疫性疾病組比較，原發性和繼發性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數均顯著增加；與原發性AIHA組比較，繼發性AIHA組患者抗GBM抗體陽性數顯著增加。單獨應用抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體診斷AIHA的靈敏度分別為74.4%、45.1%和82.0%，特異度分別為93.3%、95.3%和92.5%。在校正了年齡、性別、吸煙、飲酒等因素后血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體仍與AIHA的發生相關。提示血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體在AIHA的早期發現中具有潛在價值。

4 結 論

AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽性數與健康者和其他自身免疫性疾病患者比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，具有潛在的臨床應用價值，有望為臨床AIHA患者早期診斷提供新的途徑與思路。