沙眼衣原體感染對男性精子頂體酶活性的影響

王洪華 江世文 林孟遠 顧 曄 張怡璇 熊 芳 陳道楨 楊亞萍

南京醫科大學大學附屬無錫婦幼保健院（江蘇無錫 214002）

根據相關流行病學調查顯示，育齡夫婦不孕不育發生率為10%～15%，其中一半為男性原因[1-3]，導致男性不育的因素較多，主要分為外部因素和內部因素，其中男性生殖系統炎癥可改變精子生成及成熟的微環境，是影響男性精液質量導致不育的重要因素之一[4]，在影響男性不育的諸多因素中生殖系統感染約占4%～10%[5]。現對在本院診斷為精子頂體酶活力低下并有沙眼衣原體感染的不育男性患者39例進行治療，將結果報道如下。

合肥市軌道交通1號線車站建筑方案設計的思路及探討………………………………………………………… 閆陽（10-44）

資料和方法

一、研究對象

納入標準：（1）年齡22～37歲；（2）不育時間3～9年，平均4.5年；（3）夫妻同居12個月以上，正常性生活，未采取任何避孕措施，未使女方受孕，且精液常規檢查結果參數正常者；（4）無藥物過敏史；（5）被診斷為精子頂體酶活力低下（＜36.0IU/106）并有沙眼衣原體感染。經抗炎治療后轉為陰性的男性不育患者。按上述標準，2016年9月至2017年11月在我院生殖醫學中心就診的39例男性不育患者被納入研究，作為治療組；同時選取1年內正常生育男性45例作為對照組。

精子頂體酶活力低下并有沙眼衣原體感染的患者的治療是口服羅紅霉素膠囊（浙江亞太藥業股份有限公司生產，國藥準字號：H10970189），0.15g，2次/d，連續2周，治療期間禁止同房。

二、研究方法

1. 計算機輔助精子分析 （CASA）：采用計算機輔助精子分析儀檢測精子濃度、前向運動（RP）精子百分率等。

段文瀚解釋說，第一個“綠色”之所以叫“綠色礦山”，是因為云天化采用最先進、效率最高的開采技術，極大提高了對磷礦石的利用率，做到了對資源的充分利用和循環利用。除此之外，云南的磷礦大都是膠磷礦，雜質含量較多，這就需要采用先進的浮選技術對膠磷礦進行加工，使其更干凈、有害因子更少。同時，礦產開采完之后，云天化還會對土壤進行回填，利用先進技術進行浮土植被的種植。浮土植被的種植聽起來簡單，實際上對技術有很高的要求，前期投入巨大。據段文瀚介紹，上個世紀80年代至今，云天化單是復墾植被，恢復綠色的投入就將近10億元，目的就是希望從源頭支撐整個綠色發展理念的運行。

2. 精子形態學分析 （Diff-Quik法）：檢測精子畸形率=畸形精子數/計數精子總數×100%。

3. 檢測精子頂體酶活性：采用改良Kennedy法（試劑盒由南京欣迪生物科技公司提供）測定，正常參考值為≥36.0IU/106。

美國專利鏈接制度實施幾十年以來，隨著第IV段專利挑戰數量的增加，因此而引發的訴訟數量也隨之增加。據統計，1992-2001年10年間，美國共有75件針對首個第IV段專利聲明提起的專利訴訟，每年平均僅有7.5件；? 同注釋?。而在2003年至2009年7年間就有238件此類訴訟，每年平均達34件，且每年的訴訟量逐年上升。? RBC Capital Markets Corp. Analyzing Litigation Success Rates，January 15, 2010.

5. 精液采集及頂體酶活性測定 對于上述患者進取精檢查（內容包括精液常規、精子形態及頂體酶測定），受檢者禁欲3～7 d，手淫法采集精液置入干凈的一次性取精杯內，立即在37℃恒溫水浴靜置，待其完全液化后進行檢測。對于不液化的標本，采用機械振蕩或吹打的方法使其液化，嚴格依據WHO第5版精液分析標準行精液參數檢查。

4. 檢測CT感染情況：嚴格按照CT-DNA 熒光定量PCR試劑盒（由中山達安基因公司提供）說明書操作，拷貝數大于103copy/mL判定為陽性。

?Helena Machado，“Biologising Paternity，Moralising Maternity:The Constitution of Parenthood in the Determination of Paternity Through the Courts in Portugal”，Feminist Legal Study，215(16)，2008，p．221．

三、統計學處理

應用SPSS 19.0 軟件，對以上數據進行分析，結果數據采用（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

結 果

由表1可見，治療組治療前后在PR精子百分率、精子濃度及精子正常形態率方面與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。精子頂體酶活性治療組治療后明顯高于治療前，差異有統計學意義（P＜0.05），治療后與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。沙眼衣原體感染率治療后獲得明顯改善，與治療前比較差異有統計學意義（P＜0.05），治療后與對照組比較差異無統計學意義（P＜0.05）。

表1 兩組精液指標以及沙眼衣原體感染率精子頂體酶活性結果比較

討 論

不孕不育是困擾許多育齡夫婦的一個世界性問題。帶給社會和家庭的負擔是難以想象的，不僅加重經濟負擔，還給患者帶來很大的心理壓力。據相關流行病學調查顯示，在不孕不育夫婦中，男性因素占25%～40%，男性不育的患者數量不斷增加，受到了社會多方面的廣泛重視。導致不育有多種因素，備受關注的是男性生殖道感染，其中沙眼衣原體感染對正常生育力影響的機制部分已得到明確。沙眼衣原體是一種在宿主細胞內生長的革蘭氏陰性病原微生物，全球每年大約有1億新增感染病例，在許多國家每年感染例數還在不斷增加[6,7]，有報道生殖道衣原體感染可導致競爭凋亡增加，引起頂體消失，從而造成精子穿透力減弱[8]。

精子頂體酶是一種胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，以酶原的形式合成并儲存在頂體中與頂體膜相連，當發生頂體反應時，就會釋放頂體酶原被激活成有活性的頂體酶并被釋放出來，水解卵透明帶上的糖蛋白，精子劇烈運動及楔樣作用，順利穿過卵丘再穿過透明帶，讓精子能夠進入到卵子的胞漿內完成受精過程。另外，頂體酶還具有增加生殖道激肽釋放、增強精子活性和促進精子運動的作用。因此可見，頂體酶是受精過程中不可缺少的一種中性蛋白水解酶，其活性的高低很大程度決定了受精過程是否能順利進行。其活性程度對生育有著直接的影響[9,10]。有研究表明鋅在高濃度時，會使所有結合形式的酶失活，而低濃度時則可誘導頂體酶的激活，這種對頂體酶的可逆性調控作用使精子活動免受男、女生殖道對其潛在的損傷，直到與卵子結合。近年來有許多研究認為精子頂體酶是判斷精子生育能力很有價值的指標[11]在活化的蛋白激酶A作用下磷酸化，磷酸化后可激發頂體外膜的電壓依賴性鈣通道開放，Ca2+釋放至胞質；Ca2+使磷脂酶C 活化并水解磷脂酰肌醇二磷酸后激活蛋白激酶C，從而導致質膜上電壓依賴性鈣通道開放，大幅升高胞質Ca2+濃度，引起精子獲能、質膜溶解及頂體反應發生。有學者研究發現低濃度NO 則具有保護精子活力的作用，而高濃度NO 則抑制精子活動力，降低頂體反應率[12]。已有研究發現生殖道慢性炎癥可明顯影響精子頂體酶活性、精子總活力、精子活動率及前向運動精子百分率、正常形態率及精子低滲腫脹，但對精液pH、精液量及精子密度等參數無明顯影響。由于這些患者前列腺液中含有大量激活的炎癥細胞，促發炎癥反應，一方面可能通過與精子直接接觸方式損傷精子，另一方面可能通過粒細胞產生可溶性物質來升高精漿中的活性氧（ROS）水平而至精子功能受到損害[13]并可引起精子頂體酶受損破裂，導致頂體酶流失或使其活性改變，致頂體反應性降低，從而影響精子活動率、精子運動參數和精卵結合而導致不孕不育。 近年來頂體酶活性的相關性研究逐漸成為男性不育領域的熱點，這都為廣大致力于男性不育癥診療的科技和臨床工作者提供了廣闊的領域。值得注意的是在精液參數正常的情況下，精子頂體酶活性的檢測是從另一個角度提供判斷精子生育能力的方式，這是常規精液檢測無法比擬的。