血漿MMP-9、HBP及IL-27聯合檢測在膿毒癥早期診斷中的應用價值

黎彧利，王伊林，姚 欣△

(1.重慶巴南區人民醫院檢驗科，重慶 401320；2.廣州醫科大學附屬第二醫院檢驗科，廣東廣州 510260)

雖然目前對膿毒癥的發病機制及治療方法進行了較深入研究及探索，但其仍是急診或重癥監護病房患者的主要死亡原因之一[1-2]。據調查，至今全球每年患膿毒癥患者達2 000千萬～3 000千萬，死亡率高達25%。已有研究發現，早期診斷膿毒癥不僅可降低患者的醫療成本，而且對改善預后起著至關重要的作用[3]。

基質金屬蛋白酶9(MMP-9)底物為彈性蛋白、粘連蛋白等物質，由中性粒細胞、內皮細胞等多種細胞分泌，幾乎能降解細胞外基質所有的成分[4]。黃增相等[5]研究發現，膿毒癥患者血漿中MMP-9水平明顯升高，且經治療好轉后，血漿中MMP-9水平隨之降低，說明血漿MMP-9與膿毒癥的發展關系密切。肝素結合蛋白(HBP)由中性粒細胞分泌，國內學者通過對多種膿毒癥感染相關指標進行對比，發現HBP在診斷膿毒癥的靈敏度和特異度均高于降鈣素原(PCT)及超敏C反應蛋白(hs-CRP)[6]。李凡旺等[7]證實，白細胞介素27(IL-27)可作為區分膿毒癥與非細菌性全身炎癥反應綜合征的血漿標記物，并且對革蘭陰性菌(G-菌)的診斷價值更高。本研究通過檢測不同程度膿毒癥患者血漿中MMP-9、HBP及IL-27的表達水平，探討三者聯合檢驗對膿毒癥早期診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月至2017年10月重慶巴南區人民醫院收治的膿毒癥患者55例，年齡(39.64±8.77)歲，其中男32例，女23例。按病情程度分為膿毒癥組(24例)，年齡(38.24±7.93)歲，男14例，女10例；嚴重膿毒癥組(17例)，年齡(39.84±9.61)歲，其中男10例，女7例；膿毒性休克組(14例)，年齡(40.28±10.21)歲，男8例，女6例。另選取局部感染非膿毒癥患者21例為對照組，年齡(39.57±7.62)歲，男13例，女8例。各組年齡、性別等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：(1)年齡18～80歲；(2)符合2012年《嚴重膿毒癥與膿毒性休克國際治療指南》臨床診斷標準患者[8]；(3)簽署知情同意書。排除標準：(1)年齡<18歲或>80歲；(2)淋巴、血液系統疾病患者；(3)嚴重冠心病、糖尿病患者；免疫系統疾病患者；(4)各類腫瘤疾病患者；(5)精神障礙疾病患者；(6)產婦或孕婦。膿毒癥診斷標準：(1)發熱>38.3 ℃，心率>90 次/分，呼吸增快30次/分，明顯水腫持續24 h，高血糖癥而無糖尿病史；(2)白細胞增多或白細胞正常但不成熟細胞>10%，血漿C反應蛋白>正常值2個標準差，PCT>正常值2個標準差，有明確感染病史，但未合并其他臟器衰竭。嚴重膿毒癥診斷標準：(1)膿毒癥所致低血壓；(2)乳酸水平超過實驗室檢測正常水平上限；(3)給予足夠體液復蘇，尿量仍<0.5 mL/(kg·h)；(4)非肺炎所致的急性肺損傷且氧合指數<250 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)；(5)肺炎所致急性肺損傷且氧合指數<200 mm Hg；(6)血肌酐水平>176.8 μmol/L(2.0 mg/dL)；(7)膽紅素>34.2 μmol/L(2.0 mg/dL)；(8)血小板計數<100×109/L；(9)凝血障礙(國際標準化比值>1.5)。膿毒癥休克診斷標準：出現膿毒癥所致低血壓，經治療后仍無法逆轉。本研究通過重慶巴南區人民醫院倫理委員會審議。

1.2病史采集 記錄入組患者的一般資料，詢問病史，記錄患者入院時血漿MMP-9、HBP、IL-27、hs-CRP、PCT、外周血白細胞計數等，由2位主治醫師評價入組患者急性生理學與慢性健康狀況評分系統Ⅱ(APACHE-Ⅱ)評分。

1.3外周血漿MMP-9、HBP、IL-27水平檢測 所有入組患者入院后立即抽取靜脈血5 mL，置于抗凝管中，以3 000 r/min，低溫離心10 min分離血漿，取上清液，凍存于-80 ℃冰箱。血清PCT、hs-CRP采用北京松上A750生化分析儀進行檢測；血漿MMP-9、HBP、IL-27檢測采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測，試劑盒購自南京建成生物科技有限公司(批號分別為140103.96t、140122.96t、140325.96t)。

2 結 果

2.1各組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27、PCT及APACHE-Ⅱ評分 與對照組相比，膿毒癥組、嚴重膿毒癥組、膿毒性休克組患者血清MMP-9、HBP、IL-27、PCT水平及APACHE-Ⅱ評分均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)，且病情程度越嚴重，上述指標表達水平越高，見表1。

表1 入組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27、PCT及APACHE-Ⅱ評分比較±s)

2.2各組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27與PCT、APACHE-Ⅱ評分的相關性分析 經Pearson相關性分析，各組患者血漿中MMP-9、HBP、IL-27與PCT、APACHE-Ⅱ呈正相關(P<0.05)，見表2。

表2 各組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27與PCT、APACHE-Ⅱ評分相關性分析結果

2.3膿毒癥發生的危險因素分析 多因素logistic回歸分析發現，PCT、hs-CRP、MMP-9、HBP及IL-27均為膿毒癥發生的危險因素(P<0.05)，見表3。

表3 多因素logistic回歸分析膿毒癥發生危險因素

表4 MMP-9、HBP及IL-27對膿毒癥診斷的ROC曲線分析

2.4MMP-9、HBP及IL-27對膿毒癥的診斷性能分析 ROC曲線分析結果顯示，MMP-9、HBP、IL-27聯合檢測的曲線下面積(AUC)、靈敏度、特異度均優于單一檢測MMP-9、HBP、IL-27，差異均有統計學意義(P<0.05)，見圖1、表4。

注：a為聯合檢測；b為MMP-9；c為HBP；d為IL-27

圖1 MMP-9、HBP及IL-27對膿毒癥診斷的ROC曲線

3 討 論

國外學者SINGER等[9]提出膿毒癥最新定義，即針對感染宿主反應失調引起的致命性器官功能障礙。膿毒癥患者一旦引起多器官功能衰竭，其28 d病死率高達32%[10]。目前研究發現，膿毒癥早期即可出現血管內皮炎性反應，引起組織缺血、缺氧、乳酸中毒等不良反應[11]。因此，檢測血管內皮細胞炎性反應早期釋放相關因子的表達，可能對膿毒癥進行早期診斷，從而及時治療，節約醫療成本，抑制病情發展，降低病死率。本研究通過檢測MMP-9、HBP及IL-27在膿毒癥患者血清中的水平，并評估MMP-9、HBP、IL-27聯合檢測對膿毒癥早期診斷的應用價值。

MMP-9在遺傳過程中高度保守，屬于鋅離子依賴型水解酶，在正常情況下，人體內MMP-9表達相當少，當機體遭遇嚴重感染時，炎癥細胞大量的炎癥介質，激活MMP-9的表達，并釋放入血[12]。楊曉軍等[13]通過對104例膿毒癥及全身炎癥反應綜合征患者血清中MMP-9進行檢測，證實早期MMP-9水平對膿毒癥的發生、識別、病情判斷具有一定參考價值。HBP是一種新型的感染相關標記物，當炎性反應發生時，激活的中性粒細胞與血管內皮細胞黏附，使HBP以旁分泌形式入血[14]。錢定良等[15]研究發現，HBP在膿毒癥的診斷中具有較高的臨床參考價值，其靈敏度甚至優于PCT，但特異度較PCT略低。IL-27屬于IL-12家族，由p28和EBI3組成[16]，并且已經證實與腸炎、鼻炎、肺結核等感染性疾病有關[17-19]。本研究結果顯示，與局部炎癥患者比較，不同感染程度的膿毒癥患者血漿中MMP-9、HBP及IL-27水平均升高，說明在膿毒癥未合并其他組織器官并發癥時，以上3種指標即出現明顯變化。PCT是目前臨床診斷膿毒癥的重要參考指標，APACHE-Ⅱ評分則是臨床評價膿毒癥患者病情嚴重程度的重要依據[20]。本研究通過Pearson相關性分析證實，血漿MMP-9、HBP及IL-27的表達與膿毒癥患者PCT表達、APACHE-Ⅱ評分均呈中度正相關，說明3種檢測指標的表達與感染程度及臨床癥狀具有相關性。

由于膿毒癥的病因多樣而復雜，臨床上尚未發現一種理想的外周血指標能夠完全準確的診斷、評估膿毒癥的發生，但檢測多個指標并通過統計學整合，可明顯提高其評估效應。本研究采用多因素logistic回歸分析證實，MMP-9、HBP及IL-27均為膿毒癥發生的危險因素；ROC曲線分析發現，MMP-9、HBP、IL-27聯合檢測診斷膿毒癥的AUC、靈敏度、特異度均優于MMP-9、HBP及IL-27單獨檢測。

4 結 論

MMP-9、HBP、IL-27三者聯合檢測優于MMP-9、HBP及IL-27單獨檢測，在早期診斷膿毒癥方面具有較高的臨床參考價值，有可能成為早期診斷膿毒癥理想的外周血標記物。本研究也存在一些不足，如樣本量較少，且并沒有對膿毒癥患者病因進行分析，筆者將在下一步的研究中補充完善。