長鏈非編碼RNA Linc00152、H19、ROR在食管癌患者中的表達及臨床意義

楊 永

(鹽城市第二人民醫院，江蘇鹽城 224000)

食管癌是全球發病率較高且預后較差的腫瘤之一。我國是食管癌高發國家，部分地區的發病率高達29.81/10萬[1]。近年來隨著人們飲食習慣的改變，我國部分省市食管癌的發病率呈上升趨勢，對人類健康構成了巨大的威脅[2]。盡管食管癌的診斷和治療已有較大進展，但其預后仍不盡如人意，這很大程度上是由于缺少可靠易行的早期篩查手段[3]。近年研究發現，長鏈非編碼RNA(lncRNA)與食管癌的發生、發展及轉移密切相關[4]。lncRNA是一類長約200 nt的非編碼RNA，通過表觀遺傳調控參與各種生理病理過程，已被證實在胃癌、結直腸癌、肝癌等消化系統腫瘤中具有較大診斷價值[5-7]。本研究通過比較食管癌患者與健康人群的血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR水平，旨在探究三者對食管癌的診斷價值，并分析三者與食管癌分化程度、TNM分期的相關性，以期為食管癌的臨床診療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年10月至2017年12月在本院確診為食管癌的患者185例作為病例組，包括男128例，女57例，平均年齡(54±4)歲；均為首次住院且經內鏡組織學檢查確診為食管癌；根據病理學資料判斷食管癌的分化程度，食管癌分期根據臨床表現、影像學檢查及內鏡下表現等劃分。其中上段食管癌35例，中段食管癌98例，下段食管癌52例；早期食管癌患者36例，中晚期患者149例；鱗癌163例，腺癌15例，腺鱗癌7例；高分化癌57例，中分化癌105例，低分化癌23例。對照組為同期在本院行健康體檢的健康人群200例，包括男142例，女58例，平均年齡(52±3)歲。由專業研究人員對受試者性別、年齡、吸煙史、飲酒史等基本信息進行記錄。所有研究對象均排除其他系統惡性腫瘤、糖尿病、嚴重的心腦血管疾病及自身免疫性疾病。本研究的開展經醫院倫理委員會批準，所有納入對象均簽署項目知情同意書。

1.2方法 受試者在入院當天由專業醫護人員使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝采血管抽取靜脈血10 mL，采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR及內參基因GAPDH表達水平。引物序列如下：Linc00152上游引物5′-AGT GTG TCA TAG AGC TTC CTG TTT CAT CTC CCA GT-3′，下游引物5′-TGG AAC CAG GCC CCA GGG AAT CTT TCA GCT GCA TT-3′；H19上游引物5′-TAC AAC CAC TGC ACT ACC TG-3′，下游引物5′-TGG AAT GCT TGA AGG CTG CT-3′； ROR上游引物5′-CGA ACG AGA GGA CCG AAG-3′，下游引物5′-GCC AAG TTC TAG ATA AGC-3′；GAPDH上游引物5′-GGG AGC CAA AAG GGT CAT-3′，下游引物5′-GAG TCC TTC CAC GAT ACC AA-3′；采用2-ΔΔCt法計算lncRNA Linc00152、H19、ROR的相對表達量，ΔCt值=樣本Ct值-GAPDH Ct值。

2 結 果

2.1兩組基本資料及血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達水平比較 兩組在性別組成、年齡、吸煙史、飲酒史等方面比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。 與對照組比較，病例組血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達水平顯著升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組基本資料及血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達水平比較

2.2血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達水平與食管癌患者臨床特征的關系 血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達水平與食管癌患者的年齡、性別、吸煙史、飲酒史、腫瘤部位等因素均無顯著相關性(P>0.05)，而與食管癌的分期、分化程度及組織學類型顯著相關(P<0.05)。血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達水平在中晚期食管癌、食管腺鱗癌與低分化食管癌患者中的升高最為顯著。見表2。

表2 血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR水平與食管癌患者臨床特征的關系

2.3ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR在區分食管癌與對照組的AUC分別為：0.892(95%CI：0.767～0.931，P<0.001)、0.943(95%CI：0.870～0.982，P<0.001)、0.911(95%CI：0.899～0.955，P<0.001)，靈敏度/特異度分別為76.2%/98.9%、85.2%/93.4%、79.1%/87.4%,見圖1A。當血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR聯合檢測時，區分食管癌與對照組的AUC為0.977(95%CI：0.902～0.998，P<0.001)，靈敏度為90.6%，特異度為83.3%，見圖1B。

2.4風險評估 多元logistic回歸分析結果中，單因素分析顯示，血漿高lncRNA H19、ROR水平是食管癌發病的危險因素(P<0.05)；多因素分析顯示，在校正年齡、性別、腫瘤部位、吸煙史、飲酒史等因素影響后，血漿高lncRNA H19、ROR水平仍是食管癌發病的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR對食管癌的預測價值

注：A為lncRNA Linc00152、H19、ROR單項診斷食管癌的ROC曲線；B為lncRNA Linc00152、H19、ROR聯合檢測診斷食管癌ROC曲線

圖1 ROC曲線分析

3 討 論

食管癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，對人類健康構成了巨大的威脅[8]。雖然近年來食管癌的治療技術有所提高，但其5年生存率仍維持在較低水平[9]。早期食管癌癥狀不典型甚至無癥狀，患者不易察覺，當出現進行性吞咽困難等典型癥狀時，病情多已進展到中晚期[10-11]。目前，食管癌的主要篩查手段是食管脫落細胞學檢查(食管拉網)，但由于其技術含量相對較高，且靈敏度和特異度均較低，無法在人群中推廣使用[12]。因而，篩選出更多可靠的生物學標志物已成為當下食管癌的研究熱點，對食管癌的早期干預具有重要意義。

近年來研究發現，多種lncRNA在腫瘤的發生、發展過程中扮演著重要角色，且在腫瘤發生早期其表達量即發生改變，這些lncRNA包括Linc00152、H19、ROR、XLOC005009、MEG3、HOTAIR等。周建平[13]的研究發現，lncRNA Linc00152可能通過表皮生長因子受體依耐性信號通路促進胃癌細胞生長以及侵襲-轉移級聯反應，且在胃癌組織中的表達顯著高于正常組織。譚德立[14]的研究表明，lncRNA H19可通過介導上皮細胞-間充質轉化的發生，從而促進食管癌侵襲和轉移，提示lncRNA H19的高表達與腫瘤的不良預后相關。EADES等[15]的研究結果顯示，lncRNA ROR在乳腺癌組織中的表達顯著升高，且可通過抑制ADP核糖基化因子6促進癌細胞的侵襲和轉移。以上研究結果表明，lncRNA可通過多種途徑參與腫瘤的發生、發展過程，具有成為早期腫瘤診斷標志物的潛力。

關于lncRNA與食管癌的關系國內外已有多項研究報道。CHEN等[16]發現，lncRNA SBF2-AS1在食管鱗狀癌細胞中的表達顯著上調，且在SBF2-AS1被沉默抑制后食管鱗狀癌細胞的增殖和侵襲能力明顯降低，而SBF2-AS1因此被認為是一種新的食管鱗狀癌生物標志物，有望成為食管鱗癌的潛在治療靶點。HUANG等[17]通過對28例食管鱗狀癌患者癌和癌旁組織中lncRNA MEG3表達水平的檢測發現，MEG3基因的表達在癌組織中顯著降低，進一步的機制研究發現MEG3能夠誘導癌細胞的凋亡。上述研究提示，lncRNA的差異表達參與了食管癌的發生發展過程。本研究結果發現，血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR對食管癌的診斷具有重要價值，且血漿高lncRNA H19、lncRNA ROR水平是食管癌發病的獨立危險因素，該部分結果與前期研究基本相符[13-15]。此外，本研究還發現，血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR水平在中晚期食管癌、食管腺鱗癌與低分化食管癌患者中的升高較為顯著，提示三者與食管癌的不良預后密切相關。

4 結 論

本次研究結果發現血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR對食管癌的潛在診斷價值，并證實血漿lncRNA H19、ROR對食管癌發病風險的評估具有重要意義，這些發現有望為食管癌的早期診斷提供新的途徑。