食品中脫氫乙酸測(cè)定方法的優(yōu)化

張周莉

【摘 要】本文研究建立了一種采用水蒸氣蒸餾法提取食品當(dāng)中脫氫乙酸的方法，通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。本研究針對(duì)是水蒸氣蒸餾提取方式、檢測(cè)波長(zhǎng)、柱溫等條件進(jìn)行優(yōu)化，最終確定通過(guò)15%的酒石酸溶液提取樣品，采用C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇+0.02mol/L乙酸銨，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)306nm時(shí)能夠獲得良好的線性關(guān)系。本方法操作步驟簡(jiǎn)便，用無(wú)機(jī)溶劑消耗方法的回收率，靈敏度，準(zhǔn)確度精密度都能夠達(dá)到較好的狀態(tài)的，所以使用這種方法來(lái)進(jìn)行樣品的處理時(shí)，特別適用于一些高脂高油樣品，這樣不僅能夠滿足樣品的分析需求，還能夠有效的檢測(cè)出食品當(dāng)中的脫氫乙酸。

【關(guān)鍵詞】水蒸氣蒸餾法;脫氫乙酸;高效液相色譜法

脫氫乙酸是一種無(wú)色無(wú)味物品，屬于一種廣譜防腐劑，在酸和堿的條件下都具有較強(qiáng)的抗菌作用，特別是對(duì)于酵母菌以及霉菌都有非常強(qiáng)烈的抗菌能力，甚至是常用的苯甲酸鈉的2倍到10倍之間。如果在食物生產(chǎn)的過(guò)程當(dāng)中，添加一定量的脫氫乙酸能起到抑菌防腐的目的，從而延長(zhǎng)食品保質(zhì)期，因此它目前被廣泛的應(yīng)用在果汁、醬菜、人造奶油、果醬、糕點(diǎn)等多種食物的保鮮當(dāng)中。雖然它能夠起到一定的抑菌作用，但是隨著近幾年食品添加劑濫用產(chǎn)生的安全事件，也使得消費(fèi)者擔(dān)心脫氫乙酸通過(guò)食品進(jìn)入到人體之后會(huì)對(duì)身體造成不安全的問(wèn)題。目前國(guó)際上已經(jīng)明確禁止使用，但是我國(guó)在一定范圍內(nèi)仍然可以允許使用，最大的使用劑量為1g/kg。在使用脫氫乙酸進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)之后有關(guān)部門要對(duì)各種食品的脫氫乙酸的含量進(jìn)行檢測(cè)，目前市場(chǎng)上很多食品的脫氫乙酸都是使用水蒸氣蒸餾法來(lái)進(jìn)行提取。結(jié)合高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行定性定量的測(cè)定操作，這種方法具有較多的優(yōu)勢(shì)，操作步驟簡(jiǎn)單，回收率高，靈敏度準(zhǔn)確度高等，特別是用一些高脂高油的樣品。

1.材料與方法

1.1儀器與試劑

高效液相色譜儀，超聲波清洗器，粉碎機(jī)，離心機(jī)，水蒸氣蒸餾裝置等。

甲醇、乙酸銨、酒石酸、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液，實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確的稱取品0.1000g的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用10mL的20g/L氫氧化鈉溶液進(jìn)行溶解，定容配置成脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別吸取脫氫乙酸儲(chǔ)備液0.1、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10、20mL放置于100mL的容量瓶當(dāng)中，然后用水進(jìn)行定容，將其制備成一系列濃度梯度的工作液。

1.3樣品處理

準(zhǔn)確的稱取10～20mg的混合樣品，然后將它們放置到50mL的圓底燒瓶當(dāng)中，向燒瓶加入100mL的水以及相應(yīng)的溶液進(jìn)行水蒸氣蒸餾，將蒸餾液導(dǎo)入到50mL的容量瓶里面，最后收集起來(lái)用水進(jìn)行定容。

2.結(jié)果與討論

2.1水蒸氣蒸餾提取方式的優(yōu)化

在針對(duì)水蒸氣蒸餾提取優(yōu)化過(guò)程中，對(duì)溶液進(jìn)行測(cè)定，pH值必須要保持2～3的范圍之內(nèi)，在開(kāi)展實(shí)驗(yàn)的過(guò)程當(dāng)中，加入10mL左右的濃度為15%的酒石酸溶液使整個(gè)溶液環(huán)境保持酸性環(huán)境。在使用不同的蒸餾體積進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之后，最終的回收平均率之間存在較大的差距，其中當(dāng)蒸餾定容體積達(dá)到500mL時(shí)，能夠獲得較高的回收率。

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

在開(kāi)展實(shí)驗(yàn)的過(guò)程當(dāng)中，根據(jù)紫外分光光度掃描的結(jié)果來(lái)進(jìn)行分析，可以發(fā)現(xiàn)脫氫乙酸的最大吸收波長(zhǎng)是在230～306nm之間，但是230的吸收比較強(qiáng)，基本干擾比較多，306nm的機(jī)體之外吸收相對(duì)較少，干擾相對(duì)較低，所以在開(kāi)展檢測(cè)時(shí)，可以使用306nm作為檢測(cè)的波長(zhǎng)。

2.3柱溫的優(yōu)化

分別在30℃、35℃、40℃的柱溫條件下觀察脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液的峰形及峰面積，發(fā)現(xiàn)在30℃時(shí)，溶液峰出現(xiàn)拖尾的情況，出峰時(shí)間后移;35℃時(shí)，峰形正常，對(duì)稱因子高，出峰時(shí)間穩(wěn)定;40℃時(shí)，出峰時(shí)間雖相對(duì)其他兩個(gè)條件有所提前，可節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間，但是峰性前移，并有少量超載情況出現(xiàn)。綜上所述，當(dāng)柱溫為35℃時(shí)峰形最佳。

2.4方法的線性實(shí)驗(yàn)

在開(kāi)展實(shí)驗(yàn)的過(guò)程當(dāng)中，將濃度為1.00、5.0、10.0、20.0、50.0、100L、200μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入到相關(guān)的儀器當(dāng)中，然后測(cè)量脫氫乙酸的峰面積，并且以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度作為橫坐標(biāo)，以峰面積作為縱坐標(biāo)制定出標(biāo)準(zhǔn)曲線，最后可以發(fā)現(xiàn)當(dāng)線性范圍在1.0～200ug/mL，能夠具有較好的線性關(guān)系。

3.結(jié)論

本次研究所分析的方法來(lái)進(jìn)行食品中脫氫乙酸的檢測(cè)，能夠具有較好的使用價(jià)值，因?yàn)樗捎昧怂魵庹麴s法來(lái)對(duì)樣品進(jìn)行提取處理操作，在開(kāi)展各項(xiàng)操作的過(guò)程當(dāng)中，它具有步驟簡(jiǎn)單方法回收率高，精確度高，精密度高的特點(diǎn)，特別是在一些高脂高油的食品進(jìn)行處理時(shí)，能夠滿足相關(guān)食品的樣品分析要求，具有較高的使用價(jià)值。

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