不同來源的北蒼術中蒼術素含量測定

馮金秋 陳惠琴 張宏蓮 孫輯凱

齊齊哈爾醫學院藥學院 黑龍江 齊齊哈爾 161006

蒼術是一種應用十分廣泛的傳統中藥,2015年版《中國藥典》規定其來源于茅蒼術(Atractylodeslancea(Thunb.)DC)和北蒼術(Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.)[1],具有多項藥理作用[2～6]。前者主要生產于江蘇省、湖北省、河南省,其中,江蘇茅山所產的蒼術為道地藥材,被稱為茅蒼術；北蒼術主要產自內蒙古、山西省以及東北等地區。蒼術的來源主要為野生采集,但由于近年來的挖掘現象毫無秩序,導致產量有所下降,資源十分匱乏,且不同產區的藥材質量良莠不齊,以致消費者在使用過程中難以辨別,且蒼術實際藥效參差不齊。

本實驗依據2015版《中國藥典》一部正文蒼術“含量測定”項下規定,以化學指標成分為評價標準,對不同來源的北蒼術中蒼術素進行含量測定,以初步掌握不同來源的北蒼術品質的優劣,為合理開發中草藥資源,合理控制中草藥市場提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 蒼術飲片**堂(批號：70100294,產自內蒙古)、廣東**濟(批號：70100294,產自內蒙古)、內蒙古莫力達瓦旗、內蒙古扎蘭屯。分別標記為“1～4號”。

1.2 試劑蒼術素標準品(中國食品藥品檢定研究所,批號：???)、甲醇(天津市凱通化學試劑有限公司)、90%乙醇(天津福晨化學試劑廠)、石油醚(60～90℃)(天津福晨化學試劑廠)、丙酮(天津福晨化學試劑廠)、純化水(實驗室自制)。以上試劑均為分析純。

1.3 儀器高速多功能粉碎機(永康市敏業工貿有限公司)、CPX3800H－C超聲波清洗機(BRANSONIC公司)、調節式手動式中藥切片機(溫嶺市林大機械有限公司)、GR－240熱空氣消毒箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)、LC－1000型液相色譜儀(山東魯南瑞虹化工儀器有限公司)、PALL水純化系統(Pall Corporation公司)、AE－240型電子天平(梅特勒－－托利多上海有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件Diamonsil C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μl)；流動相甲醇：水＝(79：21)等度洗脫；流量1.0 ml/min；檢測波長340nm；進樣量20μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取蒼術素對照品適量,甲醇溶解,超聲處理10 min,制得20μg/ml的溶液,經0.45μm的微孔濾膜濾過,取續濾液,備用。

2.2.2 供試品溶液分別取“1.1”中飲片,用粉碎機粉碎,分別過三號篩,精密稱取0.2g,置具塞錐形瓶中,精密量取甲醇50ml加入錐形瓶,用封口膜密封后,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz)1 h,取出錐形瓶冷卻至室溫后,稱定重量,用甲醇補足缺失的重量,搖勻后,用0.45μm過濾膜過濾,取續濾液,備用。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察精密稱取蒼術素對照品6mg,甲醇定容至10ml,標記為1號,按照稀釋倍數為2計,制備濃度范圍為300～18.75μg/ml的系列標準溶液。依照“2.1”項下色譜條件,以峰面積為縱坐標(Y),對照品質量濃度為橫坐標(X),得到蒼術素回歸方程為Y＝2715.1X－9.6694(r＝0.9998),線性關系良好。

2.3.2 精密度試驗精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液20μl,依照“2.1”項下色譜條件,連續進樣6次,測定峰面積,計算RSD值為0.49%,表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性試驗按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液,在“2.1”項下色譜條件下進樣20μl測定,測得蒼術素峰面積RSD為1.79%,表明該方法重復性良好。

2.3.4 穩定性試驗精密吸取“2.3.3”項下供試品溶液20μl,在“2.1”項下色譜條件下,分別在0h、2h、4h、6h、8h、10h進樣。測定蒼術素峰面積RSD為1.7%,表明溶液在10h內穩定性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗精密稱取4號粉末0.1000g,共6份。每份樣品中加入蒼術素標準品0.5mg,置于50ml錐形瓶中,用甲醇定容。超聲處理1h后過0.45μm微孔濾膜,取續濾液。按照“2.1”項下色譜條件采集圖譜,計算回收率1.5%。

2.4 樣品含有量測定分別1～4號蒼術樣品,分別制備三份平行樣,依“2.2.2”項下制備供試品溶液,按照“2.1”項下色譜條件采集圖譜,計算含量,結果見表1。

表1 不同來源蒼術中蒼術素含量測定結果(n＝3)

3 討論

北蒼術中所含有的化學物質種類雜多,其中蒼術素是蒼術藥材中的活性成分之一,由于蒼術素的化學結構較為穩定,2015版《中國藥典》中含量測定項把蒼術素的含量作為蒼術藥材的質量指標。

通過HPLC法測定蒼術素含量可發現,購于**堂的北蒼術中蒼術素含量最高,為1.167%,購于內蒙古莫力達瓦旗的北蒼術中蒼術素含量次之,為0.837%,品質良好；購于內蒙古扎蘭屯對的北蒼術質量較好,其中蒼術素含量為0.7611%；購于廣東**濟的北蒼術在四個樣品中蒼術素含量最低,為0.7326%。本實驗結果表明,不同來源的北蒼術中蒼術素的含量不盡相同,存在明顯的地域差別。

長久以來,人們通過觀察北蒼術的外觀、斷面顏色、油室的數量、藥材的氣味等方式來判定北蒼術的品質優劣,在本實驗中,我們采用了HPLC法,相對客觀地對北蒼術中有效成分的含量進行檢測,以直觀的了解所測樣品的品質優劣,在以后的研究中,我們將繼續致力于蒼術質量評價的工作,為建立更加完善的質量評價體系貢獻一份力量。