冠通顆粒中苦杏仁苷含量測定的方法研究

藍保強，陸霞，農云開，饒偉源,2

(1.廣西中醫藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西 南寧 530022)

冠通方來源于有多年臨床使用的民間驗方，立足“胸痹心痛”的中醫辨證理論而擬定，由桃仁、紅花、當歸、川芎等藥材組成，具有理氣化痰，溫通經絡，活血止痛之功效，用于痰瘀阻絡型胸痹心痛。

廣西中醫藥研究院和玉林市中醫醫院進行科技合作，對冠通方進行系統研究，將其開發成醫療機構制劑——冠通顆粒，為了有效地控制藥品質量，本文采用高效液相色譜法對冠通顆粒進行研究，選定方中君藥桃仁中的主要活性成分苦杏仁苷作為含量測定指標，建含量測定方法，為完善其質量標準提供了科學依據。

1 儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；SPD-20A型紫外檢測器；AUW220D 型十萬分之一電子天平(日本島津公司)；KQ-300DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。苦杏仁苷對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，供含量測定用，批號：110820-201607，含量以90.7%計)，冠通顆粒及缺桃仁的陰性樣品由玉林市中醫醫院制劑室。水為重蒸水，甲醇為色譜純試劑，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成濃度為50 μg·mL-1的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取冠通顆粒適量，研細，混勻，取細粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，置水浴上加熱回流60 min，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備 取缺桃仁的冠通顆粒陰性樣品適量，研細，混勻，取細粉約0.5 g，照“2.1.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱： Shimadzu VP-ODS色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：甲醇-水 (20∶80)；檢測波長：210 nm；柱溫：25 ℃，進樣量為10 μL。在此色譜條件下，苦杏仁苷峰分離度大于1.5，理論板數按苦杏仁苷峰計算不低于4 000。陰性樣品溶液、供試品溶液及對照品的色譜圖見圖1。

A.陰性樣品溶液；B.供試品溶液；C.對照品

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密稱取苦杏仁苷對照品8.27 mg(含量以90.7%計)，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(濃度為75.0 μg·mL-1)。按正文擬訂的色譜條件,分別進樣2、5、10、15、20 μL對照品溶液,以苦杏仁苷對照品進樣量(X，μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線并計算回歸方程和相關系數，得回歸方程為：Y=2.05×106X-1.87×104(r=0.999 9)。結果表明：當苦杏仁苷進樣量在0.15～1.50 μg范圍內時，線性關系良好。

2.3.2 專屬性試驗 取“2.1.3”項下陰性樣品溶液，照“2.2”項下的色譜條件，進樣10 μL測定，結果在苦杏仁苷出峰位置未出峰，說明陰性無干擾。陰性樣品溶液的色譜圖見圖1。

2.3.3 精密度試驗 取同一份供試品溶液，照“2.2”項下的色譜條件，連續進樣10 μL測定6次，記錄苦杏仁苷峰面積并計算RSD， 6次測定結果峰面積的RSD為1.40%(n=6)，說明儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗 取同一供份試品溶液，照“2.2”項下的色譜條件，于0、1、2、3、6、12、24 h分別進樣10 μL測定，結果穩定性試驗測定苦杏仁苷峰面積的RSD為1.53%(n=7)，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.5 重復性試驗 取同一批樣品(批號：180801)，研細，混勻，取細粉約0.5 g，共6份，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，平行測定，結果6份樣品測定苦杏仁苷含量的平均值為:3.618 mg·g-1，RSD=1.67%(n=6)。結果表明，本法的重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取苦杏仁苷對照品9.76 mg(含量以90.7%計)，置250 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用(濃度為35.41 μg·mL-1)。稱取冠通顆粒(批號：180801，苦杏仁苷含量為3.618 mg·g-1)約0.25 g，平行取6份樣，分別精密加入上述濃度為35.41 μg·mL-1的對照品溶液25 mL，按 “2.1.2”項下方法制備加樣回收供試品溶液，測定，計算回收率，結果平均回收率為97.18%，RSD=1.95%(n=6)。

表1 加樣回收率試驗結果(mg，n=6)

2.4 樣品測定 按本文建立的含量測定方法，測定了本品7批小試樣品和3批中試樣品中的苦杏仁苷含量，結果10批樣品含量在2.69～3.77 mg·g-1之間，平均含量3.28 mg·g-1。

3 討論

3.1 測定指標的選擇 桃仁為冠通顆粒方中君藥，為薔薇科植物桃[Prunuspersica(L.) Batsch]或山桃[P.davidiana(Carr.) Franch.]的干燥成熟種子[1]，具有活血祛瘀、止咳、平喘潤腸通便等功效[2-5]，苦杏仁苷(amygdalin)是桃仁的主要有效成分之一，其不僅有祛痰止咳的功效，研究顯示苦杏仁苷和其降解物還有抗動脈粥樣硬化、免疫調節、抗腫瘤、抗炎等作用[6-7]，此外，苦杏仁苷本身雖然無毒，但通過酶解有可能產生有毒的氰化物[8]，所以測定苦杏仁苷的含量對控制冠通顆粒的安全有效具有重要意義。

3.2 供試品溶液的制備提取方法的比較 研究中對比了樣品分別精密加入甲醇25 mL，分別按超聲處理(功率240 W，頻率40 kHz)30 min、超聲處理(功率240 W，頻率40 kHz)60 min和加熱回流60 min處理，制得供試品溶液后，分別進樣測定。

表2 提取方法考察結果

從表2的結果可以看出本品加熱回流效率遠大于超聲提取，這明顯有別于多數中藥指標性成分超聲提取效率和加熱回流提取效率較接近的情況[9-10]，本文選擇提取較完全的加熱回流作為提取方法。

3.3 為了避免對醫院原冠通方的提取工藝發生質的改變，在開發成醫院制劑時，保留其傳統的煎煮工藝，用采用L9(34)正交設計，進行正交試驗優選工藝參數，10批試制樣品中苦杏仁苷轉移率35.2%～46.4%，保持比較穩定的水平。