牛羊布氏桿菌病臨床樣品采集與送檢技術要點

布氏桿菌病是布氏桿菌引起牛、羊等動物和人感染的一種傳染性病。一旦動物感染本病，妊娠動物和雄性動物主要出現流產和睪丸炎的臨床癥狀。布氏桿菌病不僅對畜牧業生產造成極大的危害，同時也嚴重威脅人類健康和公共衛生安全。對于臨床采樣和送檢過程的嚴格規范，是避免布氏桿菌病流行的基礎，采集樣品主要來自流產母牛的血清以及胎衣或胎兒，采集時應取發病典型的動物樣品送檢到實驗室，運用血清學和細菌學等實驗室檢查法進行檢測。

一、樣品采集

1.采集血液樣品。布氏桿菌會感染人，所以在采集臨床樣本的時候一定要保護好自身安全。在采血前必須穿戴質量較好的專用工作服、手套、口罩、帽子、護眼鏡及鞋靴等，做好一切采樣前的工作準備。應使用一次性塑料注射器采血管進行采血，根據采血量的需求選擇針管的大小型號，針對牛羊的采血應選擇中型或者大型的針頭。采血前要準備記號筆、毛剪、消毒水、消毒棉、試管、自封袋等等。采血時對采血部位進行剪毛消毒，先用碘伏由里至外螺旋式擦拭，后用酒精由外至里的螺旋式擦拭消毒。動物采血最佳時間是在早晨空腹時進行，采集臨床的樣品要選用典型的病例。牛、羊等大動物采血一般可選取靜脈最顯著的部位。垂直下針，一邊進針一邊緩慢回抽直到見到回血，然后放開按壓的左手，一般需要抽取血液5mL作為樣本。采血完畢后，用潔凈的酒精棉球按壓至不再流血，注意要避免形成瘀血塊和感染。采血后對樣品進行編號，每個樣品標記唯一的編號。按相關要求嚴格填寫采樣表格，清楚記錄每一個樣品對應的來源。針管要傾斜45°放置，凈置到血液凝固之后再進行挪動。

2.采集病理組織學樣品。病理學檢查也是檢測布氏桿菌病重要的實驗室方法，用于病理組織學檢驗的樣品主要是流產的胎兒胎衣、患病奶牛群的乳汁、淋巴、脾臟、肝臟、臍帶和公牛公羊的生殖器官，用于病理組織學檢驗的組織樣品首先要保證取材新鮮。在采樣時選病變最明顯的組織器官的部位，也要連同部分健康的組織一起采集。將采集的組織切成小的組織塊，然后立即完全浸泡入95%酒精內進行固定。如果不能在2d內進行檢驗，在經24h固定后再更換一次固定液，然后密封貼上標簽送到檢驗中心進行檢測。對于奶牛乳汁要進行冷藏保存。

二、樣品采集的注意事項

1.采集適時適量和典型部位的樣品。要根據具體的情況確定采集樣品的時間，牛羊布氏桿菌病要在疾病發生最明顯的時候采集樣品。樣品還要根據實驗室檢測方法的不同來確定采集量，采集病例的樣品數量要足夠，如果開始采集量少，再次重新采集的難度將大大增加，不僅浪費時間而且還會錯過最佳采集樣品的時機，影響實驗檢測的結果。

確定采集樣品的品種、生理狀態、年齡和臨床癥狀。對牛羊布氏桿菌病進行血清學檢測，應采集患病牛羊血液樣品，主要進行血清凝集試驗和補體結合試驗，奶牛還應該對乳汁性質進行檢測。對于組織病理學檢查，牛應該采集淋巴、肝臟、脾臟、流產的胎兒胎衣等，羊的組織學檢查與牛大致一樣。最好采集還未用藥物治療并且癥狀最明顯的病例樣品，炎癥癥狀明顯的病例要采集發病部位的膿汁進行細菌學檢測。

2.采集樣品注意事項。采集牛羊組織和血液需要無菌操作，采集樣品所用到的器具和容器要滅菌處理。要避免人為污染樣品，還要盡量避免其他細菌和病毒的污染，影響實驗室檢測的結果。送檢樣品的資料表格要盡可能的詳細。實驗室檢驗人員對送檢樣品檢測的重要依據主要是送檢表格，這是分析樣品檢測結果的重要參考資料，因此送檢表格一定要對應做好。

三、送檢要點

在炎熱的夏季，血樣大概放置1h就會析出血清。在冬季血清不容易析出，需要將采血管傾斜放在37℃恒溫箱中靜置2h左右。血清析出前不能放入冰箱中進行儲藏，不然血清非常難析出，沒有分離血清的全血放置時間不宜超過12h，不然很容易發生溶血。要注意只有待血清析出之后，才可以進行離心操作分離血清。

送檢的樣品編號要一一對應，送檢的時候應該將采集的樣品放到冷藏裝置中與采樣表格一起送到檢測中心。送檢的血液樣品要注意避免出現溶血現象，若出現溶血現象，可能是放置時間太久、全血凝血不良、離心時過度的震蕩等原因所致。