不同產(chǎn)地氣候及地理環(huán)境對(duì)合歡花質(zhì)量的影響分析

，

(廣東省新興中藥學(xué)校,廣東 新興 527400)

合歡花別名夜合花、烏絨、馬纓花，來(lái)源于豆科植物合歡(AlbiziajuLibrissinDurazz.)的干燥花序或花蕾[1]，首載于《本草衍義》，具有舒郁、理氣、安神、活絡(luò)等功效，常用于治療郁結(jié)胸悶、失眠健忘、癰腫等證?；瘜W(xué)成分研究表明，合歡花含槲皮苷、槲皮素、異槲皮苷、蘆丁、山柰酚等黃酮類化合物[2-5]，2015年版《中國(guó)藥典》一部以槲皮苷含量為指標(biāo)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制。 合歡花廣泛分布于華南、西南、華東、東北及華北等地，主產(chǎn)浙江、河北、江蘇、四川、廣東、新疆、廣西等省，各地區(qū)氣候、環(huán)境差異較大，氣候、生長(zhǎng)環(huán)境等因素對(duì)藥材內(nèi)部化學(xué)成分的累積有一定的影響[6]，導(dǎo)致合歡花的質(zhì)量存在差異。本研究測(cè)定5批不同產(chǎn)地的合歡花藥材的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物及槲皮苷含量，為合歡花藥材的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

LC200高效液相色譜儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；LC200紫外檢測(cè)器(HW-2000色譜工作站)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；FA2004B/JY-001電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；ULtimate XB-C18(250mm×4.6mm)色譜柱(月旭材料科技【上?！坑邢薰?；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；TDL80-2B型臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；DHG-9140A/JY-010電熱恒溫干燥箱(上海鴻都電子科技有限公司)；SX2-4-10箱式電阻爐(沈陽(yáng)市節(jié)能爐廠)；KQ3200VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器限公司)。

槲皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111538-200504)；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為色譜純。分別從廣東、廣西、新疆、浙江、河北等地購(gòu)回合歡花藥材5個(gè)樣品，編號(hào)1～5，均經(jīng)廣東省新興中藥學(xué)校彭瑞松副主任中藥師鑒定為豆科植物合歡(AlbiziajuLibrissinDurazz.)的干燥花序或花蕾。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測(cè)定

參照《中國(guó)藥典》2015年版(一部)通則0832第2法，對(duì)5批合歡花藥材樣品進(jìn)行水分檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 總灰分、酸不溶性灰分的測(cè)定

參照《中國(guó)藥典》2015年版(一部)通則2302法，對(duì)5批合歡花藥材樣品進(jìn)行總灰分、酸不溶性灰分檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 浸出物的測(cè)定

參照《中國(guó)藥典》2015年版(一部)通則2201法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用稀乙醇作溶劑，對(duì)5批合歡花藥材樣品進(jìn)行浸出物檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物測(cè)定結(jié)果 (%)

2.4 槲皮苷含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 ULtimate XB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(25∶75)；檢測(cè)波長(zhǎng):256 nm；流速:1.0 mL/min；柱溫:25 ℃；進(jìn)樣量:10 μL。

2.4.2 供試品溶液的制備 取合歡花粉末(過(guò)3號(hào)篩)約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取槲皮苷對(duì)照品0.06 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。精密量取母液1 mL置10 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。

2.4.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀記錄15 min色譜圖，理論板數(shù)按槲皮苷峰計(jì)為 3 000，與其他色譜峰的分離度大于1.5，分離良好。見(jiàn)圖1。

2.4.5 線性關(guān)系 精密稱取槲皮苷對(duì)照品60.9 mg，按按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、8.0 mL分別置10 mL容量瓶中加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取上述的對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=26102X+13181(R2=0.9995),表明槲皮苷進(jìn)樣量在3.045～48.72 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)圖2。

2.4.6 精密度試驗(yàn) 精密量取合適濃度的同一對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件，依法測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，其RSD=0.07%，結(jié)果表明測(cè)定方法的精密度良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品5號(hào)粉末6份，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取供試液1mL加入10 mL容量瓶，加入稀乙醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取上述的供試品溶液10 μL，進(jìn)樣測(cè)定含量，結(jié)果樣品中槲皮苷平均含量為1.18%，RSD為0.13%，表明重復(fù)性良好。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品5號(hào)供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h和72 h測(cè)定，測(cè)得槲皮苷的峰面積RSD為0.52%，表明供試品溶液72 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含量的合歡花樣品5號(hào)粉末約0.125 g，精密稱定，分別精密加入2 mL的槲皮苷對(duì)照品溶液(0.609 mg/mL)，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取供試液1 mL加入10 mL容量瓶，加入稀乙醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取上述供試品溶液10 μL，按“2.4.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為100.3%，RSD=0.75% 。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 槲皮苷對(duì)照品(A)、合歡花藥材(B)的高效液相色譜

圖2 槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱樣量(g) 樣品量(mg) 加入量(mg) 測(cè)得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)0.1251 1.251 1.218 2.460 99.3 100.3 0.750.1249 1.249 1.218 2.246 100.10.1246 1.246 1.218 2.452 101.30.1253 1.253 1.218 2.439 100.20.1261 1.261 1.218 2.446 100.8

2.3.10 樣品含量測(cè)定 分別取合歡花樣品1～5粉末約0.25g，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，按干燥品計(jì)算槲皮苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地5批合歡花藥材的水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物含量進(jìn)行檢查，結(jié)果顯示符合《中國(guó)藥典》2015年版(一部)的質(zhì)量要求[7，8]。

對(duì)5批合歡花藥材中槲皮苷含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示不同產(chǎn)地藥材中槲皮苷含量有差異，其中廣西合歡花藥材中槲皮苷含量最高，為1.2%；新疆的含量最低，為0.8%。這可能與該地區(qū)氣候、生長(zhǎng)環(huán)境、光照等因素的影響有關(guān)。廣西、廣東地處亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，年降雨量較大，氣溫暖和，適宜作物生長(zhǎng)。新疆地處西北寒冷，降雨偏少，氣溫偏低都會(huì)影響合歡花的生長(zhǎng)，其具體原因尚待進(jìn)一步研究。

表3 不同產(chǎn)地合歡花中橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果

在中藥材的栽培過(guò)程中，藥材中的化學(xué)成分會(huì)隨著種植環(huán)境、氣候、土壤環(huán)境等的不同而發(fā)生變化，影響藥材的質(zhì)量。因此，建議種植中藥材要嚴(yán)格按照《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》進(jìn)行操作[9，10]。