調控靶向Xklp2表達對肺鱗癌細胞放射線照射后γ-H2AX蛋白表達的影響

楊潔 祝淑釵 王玉祥 管金磊 王濤 于凡 甄嬋軍 王肖肖

(河北醫科大學第四醫院 1放療科，河北 石家莊 050011；2胸外科；3病理科)

放射治療是肺鱗狀細胞癌主要治療方法之一。靶向Xklp2靶蛋白(TPX2)是Xklp2的靶蛋白，參與有絲分裂期紡錘體的組裝，維持紡錘體的完整性，其表達受細胞周期的嚴格調控〔1〕。TPX2在多種惡性腫瘤細胞中高表達〔2〕，并且與腫瘤的預后有關〔3〕，TPX2高表達者預后較差。最近研究提示〔4〕，TPX2參與調控照射后DNA損傷修復，能夠抑制DNA損傷應答中關鍵分子H2AX的磷酸化，TPX2高表達的宮頸癌細胞放射敏感性較低。前期研究通過RNA干擾技術下調TPX2表達增加肺鱗癌細胞的放射敏感性〔5〕，在此基礎上，本研究擬探討調控TPX2表達對肺鱗癌細胞照射后γ-H2AX蛋白表達及細胞核內γ-H2AX和細胞周期監測點激酶DNA損傷監測點介質(MDC)1斑點形成的影響。

1 材料與方法

1.1細胞株 人肺鱗癌細胞株SK-MES-1和NCI-H226，分別購自中國科學院(上海)細胞庫和上海中喬新舟生物公司。

1.2主要試劑及儀器 RPMI1640培養基、MEM培養基和胰蛋白酶細胞消化液，購自美國Gibco公司；新生小牛血清，購自美國Hyclone Laboratories公司；TPX2抗體(單抗)，購自中國Proteintech公司，11741-1-AP；γ-H2AX抗體(單抗)，購自英國Abcam公司，ab2893；MDC1抗體(單抗)，購自中國生工公司，D161023；RIPA蛋白裂解液、二喹啉甲酸(BCA)蛋白濃度測定試劑盒、羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶(HRP)和電化學發光(ECL)試劑購自上海碧云天生物技術有限公司；多聚甲醛，購自生工生物工程(上海)有限公司。CO2細胞培養箱，購自美國SHEL-LAB公司；H-2050R超速冷凍離心機，購自湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；BX53熒光顯微鏡，購自日本PLYMPUS公司。……