水產(chǎn)品中特定腐敗菌分析技術(shù)的研究進(jìn)展

邢家溧，徐曉蓉，丁源，鄭睿行，*，張書(shū)芬，李湘江，沈堅(jiān)，李和生，*

（1.寧波市食品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，浙江寧波315000；2.寧波大學(xué)，浙江寧波315211）

近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，人們的飲食習(xí)慣呈現(xiàn)出多元化的趨勢(shì)，從之前的單一飲食品種逐漸改變?yōu)楝F(xiàn)在的飲食品種多樣化，水產(chǎn)品在我國(guó)國(guó)民的膳食占比中的比例正在不斷增加[1]。除此之外，由于我國(guó)在近幾年來(lái)已經(jīng)成為了世界水產(chǎn)品養(yǎng)殖和貿(mào)易出口大國(guó)，水產(chǎn)品的養(yǎng)殖產(chǎn)量占全世界的70%，其出口額已連續(xù)6年位居世界第一[2]，其產(chǎn)量已經(jīng)連續(xù)24年位居世界第一[3]。水產(chǎn)品不僅擁有豐富的營(yíng)養(yǎng)優(yōu)質(zhì)蛋白，同時(shí)還具有比較鮮美的味覺(jué)享受，因此其備受消費(fèi)者們的青睞[4]。由于目前我國(guó)居民的人均收入在不斷的提高，所以人們對(duì)健康的生活理念也越來(lái)越看重，更多的消費(fèi)者已經(jīng)越來(lái)越重視食品的質(zhì)量安全問(wèn)題[5]。但是新鮮的水產(chǎn)品中往往因?yàn)楹休^多的水分、可溶性蛋白質(zhì)和不飽和脂肪酸而容易氧化，再加上目前水產(chǎn)品保藏保鮮技術(shù)還不夠完善等問(wèn)題，使得水產(chǎn)品相比于其他一般的動(dòng)物肉制品更容易腐敗變質(zhì)[6]，從而會(huì)對(duì)經(jīng)濟(jì)造成較大的損失，引起不必要的浪費(fèi)[7-8]。除此以外，微生物也是大多數(shù)水產(chǎn)品腐敗的主要原因，從而縮短水產(chǎn)品的貨架期，如果能在水產(chǎn)品的貯藏過(guò)程中對(duì)其特定腐敗菌進(jìn)行控制即可有效延長(zhǎng)貨架期[9]。水產(chǎn)品中優(yōu)勢(shì)腐敗菌種類一般與水產(chǎn)品類別有關(guān)，不同類別之間存在較大差異，因此僅依靠傳統(tǒng)培養(yǎng)鑒定微生物的方法對(duì)于大批量研究水產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)菌并不合理。所以，對(duì)水產(chǎn)品特定腐敗菌的分析技術(shù)進(jìn)行研究顯得尤為必要。這不僅能為水產(chǎn)品中優(yōu)勢(shì)菌的研究提供技術(shù)支持，也能提高水產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)菌研究的效率，具有一定的經(jīng)濟(jì)效益。目前，國(guó)內(nèi)外研究水產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)菌的技術(shù)主要有基因組指紋（polymerase chain reaction-repetitive extra-genic palindromic，Rep-PCR）分析技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)變性梯度凝膠電泳（polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis，PCR-DGGE）分析技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)溫度梯度凝膠電泳（polymerase chain reaction-temperature gradient gel electrophoresis，PCR-TGGE） 分析技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCRRFLP）分析技術(shù)和高通量測(cè)序，本文就這幾種技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀及各自存在的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行綜述，以期為水產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)菌研究提供一定的參考作用。

1 特定腐敗菌

1.1 特定腐敗菌的概念及特征

20世紀(jì)末特定腐敗菌（specific spoilage organism，SSO）的概念被首次提出，國(guó)外研究人員[10-13]對(duì)造成水產(chǎn)品品質(zhì)下降的微生物進(jìn)行研究后，發(fā)現(xiàn)不同的水產(chǎn)品含有的菌相是有差異的，并且起腐敗作用的菌類也并非是水產(chǎn)品含有的所有微生物。研究表明，引起水產(chǎn)品腐敗的微生物只是所含有微生物中的某幾類在參與腐敗的過(guò)程，這就是該水產(chǎn)品的特定腐敗菌[14]。Dalgaard等[15]認(rèn)為食品的種類不同，其所受的環(huán)境影響因子也不同，這意味著只有適合該環(huán)境條件的特定腐敗菌才會(huì)比其他微生物更容易生長(zhǎng)，在水產(chǎn)品的腐敗過(guò)程中不僅能夠逐漸占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位，還具有較強(qiáng)腐敗活性，從而加快水產(chǎn)品的腐敗。特定的微生物針對(duì)特定食品的腐敗，即該食品特定的腐敗微生物[16]。水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的主要表現(xiàn)為其攜帶的特定致腐微生物在生長(zhǎng)和代謝過(guò)程中生成了一些不良物質(zhì)，從而使得水產(chǎn)品在感官上出現(xiàn)了不被消費(fèi)者所接受的氣味、觸感和色澤，這些物質(zhì)主要包括會(huì)產(chǎn)生異味的胺類、硫化物、有機(jī)酸等[17]。

1.2 水產(chǎn)品中的特定腐敗菌

新鮮水產(chǎn)品中的特定腐敗菌，其含有的細(xì)菌總數(shù)在貯藏前期所占的比例并不大，但是在貯藏過(guò)程中會(huì)由于SSO適應(yīng)了所處的環(huán)境，細(xì)菌數(shù)目會(huì)隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，直至細(xì)菌對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的出現(xiàn)，以至于在貯藏的中后期水產(chǎn)品中的菌落總數(shù)呈迅速增加狀態(tài)[18]。不同的水產(chǎn)品中含有不同的SSO，有試驗(yàn)結(jié)果表明，造成新鮮水產(chǎn)品腐敗的SSO主要是附于其表面的腐敗微生物，這類微生物多為水產(chǎn)品捕撈之前所處環(huán)境中存在的細(xì)菌，其中淡水環(huán)境中主要包括黃綠假單胞菌、桿菌、棒狀桿菌、黃桿菌、芽孢桿菌和沙雷氏菌等；海水產(chǎn)品含有的腐敗菌主要為假單胞菌、無(wú)色桿菌、黃桿菌、弧菌、腸桿菌等[19]，但是一般情況下，處于相同環(huán)境中的同種水產(chǎn)品含有的特定腐敗菌也許只存在一種。

水產(chǎn)品經(jīng)捕撈上岸后，為了保證其新鮮度通常都會(huì)被貯藏在溫度較低的環(huán)境中，通過(guò)早前的研究發(fā)現(xiàn)，低溫貯藏水產(chǎn)品的腐敗菌主要有：磷發(fā)光桿菌（Photobacterium phosphoreum）、腐敗希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）、假單胞菌屬（Pseudomonas spp.）等[20-21]。這幾種細(xì)菌都屬于革蘭氏陰性桿菌，其中腐敗希瓦氏菌和磷發(fā)光桿菌都具備將氧化三甲胺（trimetlylamine oxide，TMAO） 還原成三甲胺（trimetlylamine，TMA）的能力，導(dǎo)致水產(chǎn)品出現(xiàn)魚(yú)腥惡臭味[6]。一些水產(chǎn)品可能只含有其中的一種SSO，不同棲息水域的不同的水產(chǎn)品所含有的特定腐敗菌種類可能存在較大差異。

2 水產(chǎn)品特定腐敗菌分析技術(shù)的研究

微生物群落多樣性由物種多樣性、遺傳多樣性和功能多樣性組成[22]。其中遺傳多樣性是研究微生物類別的重要關(guān)鍵點(diǎn)。由于細(xì)菌的16S核糖體脫氧核糖核酸（16S ribosome deoxyribonucleic acid，16SrDNA）的保守區(qū)具備共通性，因此可用于設(shè)計(jì)通用引物。此外，其可變區(qū)的特異性可用來(lái)鑒別菌種種類。換言之，16SrDNA是樣品總細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分析的分子基礎(chǔ)。所以采用16SrDNA作為目的序列對(duì)各樣品中的微生物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析、鑒定和比對(duì)是較為快速與簡(jiǎn)便的方法[23]。16S核糖體核糖核酸（16S ribosome ribonucleic acid，16SrRNA）基因存在于所有的細(xì)菌中，功能同源并且分子大小適宜操作，序列變化與進(jìn)化距離相等，在系統(tǒng)進(jìn)化中既高度保守又有可變性，這些特點(diǎn)使其在細(xì)菌鑒定、分類和菌落多樣性的研究中被廣泛應(yīng)用[24]。由于16SrRNA和16SrDNA的保守性和特異性，隨著聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）的發(fā)展，兩者相互促進(jìn)成為在微生物多樣性的研究中常用來(lái)作為物種鑒定的重要手段[9]。

2.1 Rep-PCR指紋分析技術(shù)

近年來(lái)利用細(xì)菌基因組指紋分析方法，即細(xì)菌基因組重復(fù)序列PCR技術(shù)（repetitive extra-genic palindromic，Rep-PCR）擴(kuò)增細(xì)菌基因組中廣泛分布的短重復(fù)序列，通過(guò)瓊脂糖電泳條帶比較分析，揭示基因組間的差別[9]。Rep-PCR可以采用多種引物進(jìn)行擴(kuò)增[25-27]，與擴(kuò)增序列進(jìn)行比對(duì)，聚類分析其指紋數(shù)據(jù)，用來(lái)擴(kuò)充菌株指紋圖譜。如大腸埃希氏菌[9]（E.coli）[28]、嗜糞紅球菌（Rhodococcus coprophilus）和脆弱擬桿菌HSP40噬菌體（Bacteroides fragilis HSP40 phages）[29]，雙歧桿菌屬[30]（Bifidobacterium spp）、產(chǎn)氣莢膜梭菌[31-33]（Clostridium perfringens），F(xiàn)+RNA 糞便大腸桿菌噬菌體（faecali+RNA coliphages，F(xiàn)+RNA coliphages）[34]并結(jié)合微生物源示蹤技術(shù)（microbial source tracking，MST）[35-36]，已演變?yōu)闄z測(cè)細(xì)菌的一種重要分子技術(shù)。Lin C W等[37]利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳（pulse-field gel electrophoresis，PFGE）和3種簡(jiǎn)單的Rep-PCR方法[即腸細(xì)菌重復(fù)基因間共有序列 PCR（enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR，ERIC-PCR），以BOX插入因子（細(xì)菌基因組重復(fù)序列）為基礎(chǔ)的PCR技術(shù)BOX-PCR和重復(fù)基因外回文PCR（Rep-PCR）對(duì)評(píng)估20株嗜麥芽窄食單胞菌分離株遺傳相關(guān)性進(jìn)行了比較。在該研究中發(fā)現(xiàn)，與PFGE相比，ERIC-PCR表現(xiàn)出較低的區(qū)分能力，但是BOX-PCR與Rep-PCR對(duì)近親遺傳相關(guān)的分離物具有比較明顯的區(qū)分程度。這表明BOX-PCR與Rep-PCR是評(píng)估嗜麥芽窄食單胞菌分離菌株遺傳相關(guān)性較為簡(jiǎn)單便捷的方法，該研究為探索嗜麥芽窄食單胞菌的流行病學(xué)提供了更為簡(jiǎn)便的分析技術(shù)。Mohammadjavad Paydar[38]等利用Rep-PCR分析技術(shù)對(duì)采購(gòu)于馬來(lái)西亞不同地點(diǎn)的150份海鮮樣本的副溶血性弧菌分離株進(jìn)行了分析，這些海鮮樣品包括魚(yú)、小蝦、明蝦、蜊、牡蠣、蛤和烏賊。試驗(yàn)結(jié)果表明，使用Rep-PCR技術(shù)來(lái)表征副溶血性弧菌分離株可以觀察到41個(gè)Rep譜，并且所有分離株在80%的相似性下被分類為11個(gè)不同的簇，該研究中副溶血性弧菌的DNA指紋圖譜顯示了分離株間的高度遺傳多樣性，并且Rep-PCR能夠區(qū)分具有不同病毒型的分離株。這表明Rep-PCR技術(shù)不僅可以用來(lái)區(qū)分不同分離株的細(xì)菌，還可以用來(lái)區(qū)分不同病毒型的分離株，并且操作方法相對(duì)來(lái)說(shuō)較為簡(jiǎn)便，可以為水產(chǎn)品特定腐敗菌分離菌株的研究提供一定的參考價(jià)值。

2.2PCR-DGGE和PCR-TGGE分析技術(shù)

基因指紋技術(shù)還包括變性梯度凝膠電泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）和溫度梯度凝膠電泳[39]（temperature gradient gel electrophoresis，TGGE），其原理是利用DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特異性和穩(wěn)定性結(jié)合變性聚丙烯酞胺凝膠電泳方法來(lái)分析細(xì)菌16SrDNA片斷擴(kuò)增產(chǎn)物，分析微生物區(qū)系多樣性與優(yōu)勢(shì)性[40]。DGGE技術(shù)雖然從發(fā)明[41]到首次應(yīng)用之間經(jīng)歷了短短幾十年[42]，但其在微生物群落的多樣性和種群差異性的檢測(cè)方面都有著十分顯著的優(yōu)勢(shì)。單獨(dú)采用聚丙烯酞胺凝膠電泳只能依據(jù)雙鏈DNA分子的正負(fù)性分離出差別較明顯的條帶，但片段長(zhǎng)短相同，堿基排列順序不同的DNA分子卻無(wú)法被辨別，這就為鑒別微生物群落多樣性造成諸多不便。但考慮到DGGE/TGGE技術(shù)因?yàn)榧尤肓艘欢康淖冃栽噭纾耗蛩睾腿ルx子甲酞胺或者是設(shè)置一系列的溫度梯度，以此就能達(dá)到把相同大小片段但堿基組成不同的DNA片段區(qū)分開(kāi)的目的。這是由于不同細(xì)菌的DNA片段有其特定的DNA解鏈區(qū)域及解鏈規(guī)律[43-44]。DGGE的方法己經(jīng)成功應(yīng)用于對(duì)養(yǎng)殖雜色鮑腸道微生物菌群的分析中[45]。如比較健康鮑腸道和病鮑腸道微生物組成和差異的研究中比較分析4個(gè)成長(zhǎng)階段中雜色鮑腸道微生物組成和差異[46]。張新林等[47]利用PCR-DGGE技術(shù)對(duì)三文魚(yú)在冷鏈貯運(yùn)4℃條件下的腐敗機(jī)制，通過(guò)DGGE指紋圖譜顯示，三文魚(yú)在貯藏期間微生物多樣性逐漸降低，通過(guò)分析得知假單胞菌屬和希瓦氏菌在貯藏過(guò)程中漸漸成為優(yōu)勢(shì)腐敗菌。該試驗(yàn)結(jié)果表明通過(guò)PCRDGGE技術(shù)可以確定4℃三文魚(yú)的特定優(yōu)勢(shì)腐敗菌。王慧敏等[48]利用PCR-DGGE分析技術(shù)和傳統(tǒng)菌落計(jì)數(shù)方法對(duì)處于微凍和冷藏環(huán)境中的鱸魚(yú)的優(yōu)勢(shì)腐敗菌進(jìn)行了分析對(duì)比。從DGGE圖譜和菌落計(jì)數(shù)中都表明，鱸魚(yú)在上述兩種環(huán)境中產(chǎn)H2S菌和假單胞菌都呈現(xiàn)出最快的增長(zhǎng)速率，并且發(fā)現(xiàn)鱸魚(yú)的SSO為腐敗希瓦氏菌和假單胞菌。由此可見(jiàn)，PCR-DGGE技術(shù)在水產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)腐敗菌分析方面已經(jīng)具備了較為成熟的應(yīng)用實(shí)例，這表明PCR-DGGE的應(yīng)用能夠?yàn)榻⑽⑸锷L(zhǎng)貨架期模型提供理論基礎(chǔ)。但是目前利用PCRTGGE技術(shù)來(lái)分析水產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)菌群的研究還比較欠缺，但是對(duì)其他食品的研究還是存在應(yīng)用實(shí)例的，例如顧彩東[49]應(yīng)用PCR-TGGE技術(shù)比較了不同熱處理對(duì)牛乳殺菌效果；葉姜瑜等[50]利用PCR-TGGE技術(shù)對(duì)處理聚甲醛廢水的污水反應(yīng)器中的微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，并且取得較理想的試驗(yàn)結(jié)果，這些例子表明利用PCR-TGGE分析技術(shù)對(duì)水產(chǎn)品中的優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行分析也具有較大的應(yīng)用前景，可以為水產(chǎn)品菌群的分析提供進(jìn)一步的技術(shù)支持。

2.3 PCR-RFLP分析技術(shù)

限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）技術(shù)是在1980年由人類遺傳學(xué)家Bostein提出[9]。RFLP是進(jìn)行基因組研究的基礎(chǔ)，目前主要被廣泛應(yīng)用于基因定位、生物進(jìn)化、基因組遺傳圖譜構(gòu)建等的研究[9]。限制性內(nèi)切酶的特異性對(duì)微生物基因組DNA片段的有效切割產(chǎn)生了阻礙作用。但是將PCR技術(shù)與RFLP分析有機(jī)地結(jié)合在一起則可以得到簡(jiǎn)單有效的分子圖譜，該技術(shù)稱為PCRRFLP。用于這一目的的特定基因主要為核糖體RNA基因，其中又以16SrDNA PCR-RFLP的方法最為簡(jiǎn)便且成熟，因此被廣泛應(yīng)用。其中對(duì)根瘤基因、固氮基因、冷藏豬肉的菌相[51]和江口菌相[52]研究都取得了較好的成效。除此之外，Juvonen等[53]利用特異組PCR-RFLP和實(shí)時(shí)PCR的方法來(lái)檢測(cè)和鑒別啤酒中含有厭氧腐敗菌梭狀芽胞桿菌。該試驗(yàn)主要通過(guò)設(shè)計(jì)16SrRNA基因324-bp可變區(qū)的一對(duì)特異性引物，并用凝膠電泳和SYBR Green I染料進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR來(lái)評(píng)估終點(diǎn)PCR，試驗(yàn)的目的是為了開(kāi)發(fā)和評(píng)估用于檢測(cè)和區(qū)分啤酒中腐敗菌的群體特異性PCR方法，該試驗(yàn)結(jié)果表明，利用PCR方法測(cè)得的試驗(yàn)結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果相比很大程度上一致，但是PCR方法更為敏感，該開(kāi)發(fā)的PCR方法可以在單個(gè)反應(yīng)中檢測(cè)到9種所有啤酒腐敗菌，并且能夠在組群水平之下進(jìn)行分化，減少了分析時(shí)間，如果把這一方法加以改進(jìn)后應(yīng)用于水產(chǎn)品的腐敗菌種鑒別和分析將會(huì)提高水產(chǎn)品中腐敗菌分析的效率。潘子強(qiáng)等[54]利用16SrDNA克隆文庫(kù)結(jié)合RFLP技術(shù)探討了導(dǎo)致冷藏真空包裝脆肉鯇魚(yú)的SSO。試驗(yàn)結(jié)果表明，冷藏腐敗的真空包裝脆肉鯇魚(yú)中含有12種不同分型的細(xì)菌類別，該條件下的SSO主要為分型1和2，占克隆子數(shù)的58.92%；通過(guò)序列比對(duì)以及構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析顯示，大部分克隆子的序列與氣單胞菌（Aeromonas sp.）的16SrDNA序列有著最大的相似性，這表明真空包裝脆肉鯇魚(yú)冷藏的SSO是氣單胞菌（Aeromonas sp.）。這說(shuō)明利用16SrDNA結(jié)合RFLP技術(shù)可以簡(jiǎn)單快速的確定水產(chǎn)品中的SSO。

2.4 高通量測(cè)序技術(shù)

高通量測(cè)序技術(shù)主要包括羅氏454公司的GS FLX測(cè)序平臺(tái)、Illumina公司的Solexa Genome Analyzer測(cè)序平臺(tái)和ABI公司的Solid測(cè)序平臺(tái)[55]。高通量測(cè)序技術(shù)具有產(chǎn)出量高、耗費(fèi)少、測(cè)序精確且自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)[24]。454測(cè)序技術(shù)以焦磷酸測(cè)序?yàn)樵恚煌谄渌咄繙y(cè)序平臺(tái)的顯著特點(diǎn)是讀長(zhǎng)較長(zhǎng)。目前GS FLX測(cè)序系統(tǒng)的序列讀長(zhǎng)已不低于400 bp，對(duì)于從頭測(cè)序等需要長(zhǎng)reads的操作，它是較為理想的選擇。Solid是借助于連接反應(yīng)進(jìn)行的測(cè)序平臺(tái)，其基本原理是通過(guò)把四色熒光標(biāo)記的寡核苷酸進(jìn)行多次連接合成，進(jìn)而代替?zhèn)鹘y(tǒng)的聚合酶連接反應(yīng)。超高通量是Solid系統(tǒng)最顯著的特征。Solexa Genome Analyzer測(cè)序平臺(tái)是采用測(cè)序、合成同時(shí)進(jìn)行的原理，實(shí)現(xiàn)樣本制備的機(jī)械化和大規(guī)模的平行測(cè)序，是一種較低運(yùn)行成本，較高性價(jià)比的高通量測(cè)序技術(shù)。

高通量測(cè)序技術(shù)目前己經(jīng)被廣泛的運(yùn)用于微生物的研究中。如張芹等[56]利用高通量測(cè)序技術(shù)研究高糖飲食對(duì)小鼠腸道菌群的影響。江艷華等[57]通過(guò)高通量測(cè)序?qū)A藏于4、15、25℃的蝦夷扇貝柱菌群結(jié)構(gòu)及優(yōu)勢(shì)腐敗菌進(jìn)行了分析，試驗(yàn)結(jié)果表明，4℃的SSO為發(fā)光桿菌屬（Photobacterium）、別弧菌屬（Aliivibrio）和假交替單胞菌屬（Pseudoalteromonas），分別占46.91%、36.82%、11.01%；15℃的SSO為發(fā)光桿菌屬（Photobacterium，46.97%）和別弧菌屬（Aliivibrio，43.33%），25℃的SSO為發(fā)光桿菌屬（Photobacterium，41.94%）、別弧菌屬（Aliivibrio，23.10%）、梭桿菌屬（Fusobacterium，10.60%）和乳酸菌屬（Lactobacillus，18.61%）。曹榮等[58]基于高通量測(cè)序?qū)洳?、4、8 d牡蠣的菌群進(jìn)行了分析，試驗(yàn)結(jié)果表明，牡蠣冷藏初期的SSO主要以弧菌屬（Vibrio）、希瓦氏菌屬（Shewanella）和交替假單胞菌屬（Pseudoalteromonas），分別占28.3%，10.3%和7.2%；而在冷藏后期，Vibrio的比例迅速下降，而Shewanella和Pseudoalteromonas在冷藏后期仍然為SSO。這說(shuō)明利用高通量測(cè)序可以對(duì)水產(chǎn)品在不同貯藏環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)菌群進(jìn)行分析，并且準(zhǔn)確性高，在后續(xù)研究中可以結(jié)合微生物動(dòng)力學(xué)規(guī)律用以構(gòu)建進(jìn)行貨架期預(yù)測(cè)的數(shù)學(xué)模型。

3 結(jié)論

水產(chǎn)食品從捕撈上岸到食用這一過(guò)程中會(huì)由于很多因素影響其貨架期，其中起關(guān)鍵作用的主要是微生物的生長(zhǎng)和代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一些化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致水產(chǎn)品發(fā)生腐敗變質(zhì)，但是并非所有的微生物都會(huì)對(duì)水產(chǎn)食品的腐敗作出貢獻(xiàn)，只有其中的一小部分細(xì)菌即SSO才是引起水產(chǎn)品變質(zhì)的根本原因。因此，水產(chǎn)品在貯藏過(guò)程中為了延長(zhǎng)貨架期，對(duì)其含有的特定腐敗菌進(jìn)行鑒定并控制是非常有必要的，這表明對(duì)水產(chǎn)品中特定腐敗菌的分析技術(shù)進(jìn)行研究、創(chuàng)新也是一個(gè)不可或缺的重要過(guò)程。

通過(guò)對(duì)水產(chǎn)品中特定腐敗菌的分析技術(shù)進(jìn)行研究，可以更好地預(yù)測(cè)并延長(zhǎng)水產(chǎn)食品的貨架期，對(duì)提高水產(chǎn)品品質(zhì)具有重要的意義。但是對(duì)特定腐敗菌進(jìn)行研究分析的方法仍存在一些不足之處，例如DGGE方法在應(yīng)用過(guò)程中由于樣品處理方法過(guò)于繁瑣，對(duì)微生物的檢測(cè)靈敏度和測(cè)序通量都較低等因素不足以簡(jiǎn)便而全面地檢測(cè)水產(chǎn)品中的微生物多樣性，除此之外，單一的技術(shù)方法在分析水產(chǎn)品特定腐敗菌時(shí)存在研究結(jié)果不理想、分析不全面的缺點(diǎn)。因此在研究過(guò)程中如何選擇省時(shí)、省力、性價(jià)比高的分析方法是一個(gè)值得探討的問(wèn)題，未來(lái)可以考慮將兩種或兩種以上的分析技術(shù)相結(jié)合或者開(kāi)發(fā)出更為合理、更有應(yīng)用前景的水產(chǎn)品SSO的分析技術(shù)方法。

4 展望

通過(guò)水產(chǎn)品SSO隨時(shí)間變化的趨勢(shì)與描述微生物動(dòng)力學(xué)生長(zhǎng)的數(shù)學(xué)方程如：Logistic方程、Gompertz方程等相結(jié)合可以制作水產(chǎn)品剩余貨架期的預(yù)測(cè)模型，由預(yù)測(cè)模型編制出相應(yīng)的軟件，用于提醒消費(fèi)者該水產(chǎn)品的食用期限，避免浪費(fèi)，并且提高了通過(guò)感官來(lái)辨別水產(chǎn)品新鮮度的準(zhǔn)確性和有效性。雖然在研究過(guò)程中面臨著種種挑戰(zhàn)，但是非常有應(yīng)用前景。