血清載脂蛋白M與1-磷酸鞘氨醇在細(xì)菌性血流感染中的表達及相關(guān)性研究 *

張靈玲，熊大遷，葛一漫，任 然

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611137；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，成都 610072)

細(xì)菌性血流感染是指由細(xì)菌侵入血流所引起的感染，當(dāng)伴有全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)時即為膿毒血癥，因其發(fā)病機制尚未闡明，治療上沒有根本性的突破而導(dǎo)致較高的死亡率。血流感染的金標(biāo)準(zhǔn)是血培養(yǎng)，但國內(nèi)醫(yī)院的血培養(yǎng)陽性率約為17.8%～18.4%，4～7天的培養(yǎng)周期常滯后于病情的變化，導(dǎo)致臨床經(jīng)驗性用藥，加劇了細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生[1，19]。因此血流感染的早期診斷和治療一直是臨床和實驗室關(guān)注的焦點，本次研究旨在通過觀察血清載脂蛋白M(ApoM)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)在細(xì)菌性血流感染及不同感染程度中的表達，分析兩者的相關(guān)性，助力發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性血流感染新的診斷指標(biāo)和治療靶點。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機選取2018年9月～2019年2月于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院初次就診的細(xì)菌性血流感染患者90例(男性48例，女性42例)，平均年齡65.32±6.80歲，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、體溫 ≥38 ℃、有感染癥狀或無以上癥狀但血培養(yǎng)陽性，排除使用抗生素或免疫抑制劑、惡性腫瘤和病毒感染患者；同時選取同期體檢中心無感染、無發(fā)熱的30例健康個體為對照組(男性15例，女性15例)，平均年齡63.47±8.32歲，排除年齡小于18歲、使用抗生素超過24 h、病毒感染陽性和白血病患者；選取我院有病毒、真菌、支原體或衣原體感染患者為非細(xì)菌感染組。

1.2 儀器與試劑 使用LiCA 500電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，檢測試劑盒為上海科美生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 實驗分組及診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度和病程進展，參照2001年美國臨床藥學(xué)學(xué)會(American college of pharmacy，ACCP)關(guān)于嚴(yán)重系統(tǒng)性感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]和2008年新修訂的由歐美多國基于對膿毒血癥研究的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)而制定的膿毒血癥指南(SSC指南)[5]可以將其分為：敗血癥31例(男性17例，女性14例，年齡62.23±7.58歲)、膿毒血癥26例(男性14例，女性12例，年齡63.01±7.04歲)、嚴(yán)重膿毒血癥21例(男性11例，女性10例，年齡66.01±8.24歲)和膿毒血癥休克12例(男性6例，女性6例，年齡67.57±9.22歲)。

1.3.2 實驗檢測：抽取實驗組和對照組的肝素抗凝靜脈血用于檢測降鈣素原(PCT)，同時分離出血漿于EP管中，置于-80℃冰箱保存(依試劑廠家說明書要求)待測ApoM和S1P。

2 結(jié)果

2.1 血清ApoM和S1P在細(xì)菌性血流感染組和對照組中的表達和分析 血清ApoM和S1P在細(xì)菌性血流感染組(11.06±8.02 μg/L，119.31±43.7 ng/ml)中的表達水平明顯低于對照組(25.43±7.05 μg/L，192.97±41.74 ng/ml)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-4.716，5.045，均P<0.05)。

2.2 血清ApoM和S1P在細(xì)菌性血流感染中的相關(guān)性分析 對細(xì)菌性血流感染組的ApoM和S1P進行相關(guān)分析，Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.774，P=0.00，可認(rèn)為在血流細(xì)菌感染中ApoM和S1P呈直線相關(guān)。

2.3 血清ApoM和SIP在細(xì)菌性血流感染各亞組中的表達和分析 見表1。細(xì)菌性血流感染各亞組間比較，隨著感染程度的加深，血清ApoM和S1P的表達逐漸下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 ApoM，S1P在不同程度感染組中的表達

2.4 血清ApoM和S1P在細(xì)菌性血流感染各亞組中的相關(guān)性分析 分別對細(xì)菌性血流感染各亞組的ApoM和S1P進行相關(guān)分析：敗血癥組r=0.469，P=0.007；膿毒癥組r=0.725，P=0.001；嚴(yán)重膿毒癥組r=0.856，P=0.000；膿毒癥休克組r=0.873，P=0.049，各組中的相關(guān)具有顯著性，可以認(rèn)為ApoM和S1P具有直線相關(guān)關(guān)系。

3 討論

血流感染是由各種病原微生物和毒素侵入血流所引起的血液感染，是一種嚴(yán)重的全身感染性疾病，感染24 h內(nèi)，若不能及時診斷并配合合理的抗感染治療，將會大大降低患者存活率；當(dāng)細(xì)菌性血流感染伴有全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)時即為膿毒血癥，多引起急性肺損傷、急性腎損傷、休克、多臟器損傷綜合癥而導(dǎo)致30%～70%的高死亡率。但對于膿毒血癥的治療，現(xiàn)今仍沒有突破性的進展，其發(fā)病機制仍未能闡明，因此細(xì)菌感染疾病的早期診斷和治療一直是臨床和實驗室關(guān)注的焦點。血培養(yǎng)是診斷細(xì)菌感染性疾病的金標(biāo)準(zhǔn)，但目前國內(nèi)醫(yī)院的血培養(yǎng)陽性率約為17.8%～18.4%，且因為操作和采樣的原因常出現(xiàn)假陽性，4～7天的培養(yǎng)周期常滯后于病情的變化，導(dǎo)致臨床經(jīng)驗性的大量抗生素治療，從而加劇細(xì)菌耐藥性[1]。

炎癥標(biāo)志物是近年研究的一個方向，對細(xì)菌性血流感染的早診斷和早治療有著重要意義。2013年，KURANO等[2-3]提出了一條新的信號軸ApoM-S1P，該信號軸由ApoM，S1P和S1PR信號通路三部分構(gòu)成，參與并調(diào)控1-磷酸鞘氨醇受體(S1PR)信號通路以及下游的一系列生物學(xué)功能，在冠心病、糖尿病、肝硬化、乙型肝炎、重癥下肢缺血等炎癥相關(guān)性疾病中，其血清表達水平均有所改變[4-5]。究其原因，ApoM可能作為S1P的生理性載體，載運S1P和相應(yīng)受體結(jié)合，進而調(diào)控S1P相關(guān)的信號通路，從而在這些相關(guān)炎癥疾病中發(fā)揮作用[6-8]。但是，關(guān)于ApoM是否通過運載S1P與其相應(yīng)的受體結(jié)合，進而在細(xì)菌性血流感染中發(fā)揮作用的相關(guān)性研究較少。

本次研究旨在通過觀察血清ApoM和S1P在細(xì)菌性血流感染及不同感染程度中的表達，分析兩者的相關(guān)性，助力發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性血流感染新的診斷指標(biāo)和治療靶點，與PCT協(xié)同，更好地為臨床早期診斷及治療提供依據(jù)，避免細(xì)菌耐藥的大量出現(xiàn)，減輕病患的精神和物質(zhì)負(fù)擔(dān)，提高整體醫(yī)療水平。在本研究中，與對照組相比，細(xì)菌性血流感染組ApoM的含量明顯降低，原因可能為細(xì)菌感染時，炎癥反應(yīng)器官受到細(xì)菌內(nèi)毒素如脂多糖(LPS)的刺激后，誘發(fā)單核-巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞產(chǎn)生大量炎癥因子(TNF-α，IL-6和IL-1等)，抑制肝、腎等組織的ApoM mRNA和蛋白質(zhì)的表達，導(dǎo)致ApoM含量的下降[9-10]。通過對實驗亞組的分析發(fā)現(xiàn)：ApoM的表達與感染的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)[11]，即隨著感染病程的加重，ApoM的表達水平隨之降低，可能因為在不同程度的炎癥反應(yīng)中，TNF-α和IL-1等細(xì)胞因子會不同程度地抑制肝、腎組織ApoM mRNA和蛋白質(zhì)的表達，致其血漿含量不同程度下降；也有研究認(rèn)為，在急性期反應(yīng)中，AP-1家族中的抗炎轉(zhuǎn)錄因子c-Jun和JunB與HNF-1α可以競爭結(jié)合ApoM的啟動子調(diào)節(jié)區(qū)，從而抑制其基因轉(zhuǎn)錄并擾亂蛋白質(zhì)的合成[12]。另也有研究發(fā)現(xiàn)，LPS可以下調(diào)肝細(xì)胞核因子1α(hepatocyte nuclear factor，HNF-1α)的基因轉(zhuǎn)錄與表達，造成HNF-1α含量的降低，作為ApoM合成的重要調(diào)節(jié)因子，直接影響ApoM的合成與表達[13]。結(jié)果提示：ApoM對于細(xì)菌性血流感染的早期輔助診斷具有一定的價值，可以作為膿毒血癥潛在的生物標(biāo)志物，影響疾病的發(fā)展過程[14-15]。細(xì)菌性血流感染患者S1P血清水平下降，并與感染程度密切相關(guān)，與ApoM呈線性相關(guān)關(guān)系，原因可能為ApoM與S1P相伴結(jié)合，形成ApoM-S1P信號軸，S1P被轉(zhuǎn)運至上皮細(xì)胞受體從而發(fā)揮內(nèi)皮保護作用，維持血管完整性[16]；另有研究顯示[14]，血清S1P缺乏，可表現(xiàn)為血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)下的內(nèi)皮細(xì)胞間隙增加，從而增加血管滲透性。綜合分析可得：細(xì)菌性血流感染患者血清S1P水平的下降是由于ApoM含量降低而致，血清S1P含量降低，使內(nèi)皮保護功能減弱，進而血管完整性遭到破壞，血管滲漏加劇，最終導(dǎo)致膿毒血癥的發(fā)生，病情加劇直至引起休克甚至死亡[17-18]。

綜上所述：血清ApoM水平的檢測，對于細(xì)菌性血流感染的早期輔助診斷具有較高的診斷價值；ApoM可能起著潛在的抗炎作用，可鑒別敗血癥和膿毒血癥。ApoM作為S1P的分子伴侶，極大可能是通過與S1P的相互作用來調(diào)控細(xì)菌性血流感染的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)歸，因此，ApoM-S1P信號軸可能成為細(xì)菌性血流感染診斷、治療和預(yù)后的潛在靶點，但其詳細(xì)參與機制還有待進一步發(fā)現(xiàn)。