黃河三角洲地區男性不育患者Y染色體AZF基因微缺失的研究

田明明，高洪蓮，孫大康，孟瑋

濱州醫學院附屬醫院臨床醫學實驗室，山東濱州 250063

隨著生活節奏加快、生活壓力增大及環境污染危害，目前不孕不育癥患者有逐年增多的趨勢，全球育齡夫婦中約有15%不育，其中男性因素約占50%[1]。引起男性不育的病因有很多，包括感染、免疫功能異常、精索靜脈曲張、染色體異常等[2]。男性不育常伴隨著精子數量減少，國內外學者已對其進行了大量相關研究。由遺傳缺陷引起的精子發生障礙約占男性不育因素的30%。Y染色體長臂無精子癥因子（azoospermia factor,AZF）微缺失是導致男性生精障礙主要的遺傳學因素之一[3-4]。2015年8月—2017年12月間該研究對黃河三角洲地區男性不育患者Y染色體AZF微缺失情況進行分析，以了解AZF微缺失與男性不育的關系，為臨床的診斷和治療提供依據，報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

該研究收集因男性無精子癥、少精子癥不育就診于該院的328例患者及80例精液無異常患者，進行外周血Y染色體AZF微缺失檢查，年齡22～55歲。無精及嚴重少精癥納入標準：染色體核型正常，病因診斷為Y染色體微缺失，且參照WHO標準，無精癥患者為連續3次精液常規檢查，均未發現精子，少精癥為精子密度＜20×109/L,嚴重少精癥為精子密度＜5×109/L。在患者填寫知情同意書后，采集EDTA抗凝血5 mL。

1.2 方法

Y染色體微缺失檢查：采用北京愛普益生物科技有限公司AZF區微缺失核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）。應用PCR及熒光標記探針技術，快速檢測Y染色體 AZF區的 8個 STS位點：AZFa為 sY84、sY86；AZFb 為 sY127、sY134；AZFc 為 sY254、sY255；AZFd為sY145、sY152。對每個待檢樣品進行4個（分別為 A、B、C、D）三重 PCR 反應，正常男性、女性為對照組。通過擴增曲線直接觀察結果。

1.3 統計方法

數據采用SPSS 18.0統計學軟件分析，計數資料采用百分比（%）表示，進行 χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在328例男性不育患者中，檢出Y染色體AZF微缺失26例，缺失率為7.93%（26/328）；無精癥患者缺失率為14.75%（18/122）；嚴重少精癥患者缺失率為3.88%（8/206）；兩組Y染色體AZF微缺失率，差異無統計學意義 (P＞0.05)。最常見缺失類型為僅AZFc缺失，占38.46%（10/26）。正常對照組均未發現Y染色體微缺失。

所檢出的26例Y染色體微缺失分為以下8類：AZFa、AZFb、AZFc、AZFa+c、AZFa+d、AZFb+c、AZFb+d、AZFb+c+d缺失。其中AZFa缺失2例（7.69%）；AZFb缺失 4例（15.38%）；AZFc缺失 10例（38.46%）；AZFa+c缺失 1例（3.85%）；AZFa+d缺失 2例（7.69%）；AZFb+c缺失 4例 （15.38%）；AZFb+d缺失 1例（3.85%）；AZFb+c+d 缺失 2 例（7.69%）；sY254、sY255為缺失率最高的位點（65.38%，17/26），其次是sY134（42.31%，11/26）、sY127（30.77%，8/26）。

3 討論

因研究方法、研究人群、患者納入標準及STS位點選擇等的不同，各地區報道的男性不育患者Y染色體 AZF微缺失發生率從0.7%～55%不等[5-7]。該文檢測的328例男性不育患者中，Y染色體微缺失發生率為7.93%，其中122例無精癥和206例嚴重少精癥患者AZF缺失發生率分別為14.75%、3.88%。這與Zhang等[8]發現的無精癥患者AZF缺失率10%～15%一致，嚴重少精癥患者缺失率與Lin等[9]報道的低于5%一致。該研究最常見缺失類型為僅AZFc缺失，最常見缺失模式為sY254+sY255，這與其他研究者的報道基本一致。

AZF各區域缺失臨床表現差異較大，檢測結果可指導后續治療，對于有AZFa區域位點缺失（如該研究中缺失模型為AZFa、AZFa+c、AZFa+d）的患者，缺失后果最嚴重，通常表現為唯支持細胞綜合征，即SCO綜合征，同時伴有睪丸體積縮小，臨床表現無精子癥，目前對SCO綜合征沒有有效的治療方案，不建議行睪丸穿刺。對于有AZFb區域位點缺失（如該研究中 AZFb、AZFb+c、AZFb+d、AZFb+c+d） 的患者，睪丸組織學特征常表現為SCO綜合征或是生精阻滯（減數分裂后生精上皮細胞缺失，生精過程被阻滯在精母細胞階段，無精子生成），此類患者也不宜行睪丸穿刺。AZFc缺失的表型多樣，通常此類患者殘存精子生成能力，可表現出無精癥，也可表現出精子數目正常，但形態異常，無精癥患者可通過睪丸穿刺獲得精子，并行卵胞漿內單精子注射技術，但是，此類患者的男性子代將成為AZFc區域位點缺失的攜帶者，而且，AZFc缺失的少精癥患者，精子數目有進行性下降趨勢，最終發展為無精癥。因此，精子的遺傳學異常所帶來的遺傳風險也是需要引起關注的，很有必要對無精癥及嚴重少精癥患者夫婦進行遺傳學檢查，進而防止基因缺陷的遺傳。對于AZFd缺失的患者，臨床表現為輕度少精癥，或精子數目正常，形態異常。

Y染色體微缺失的檢測為男性不育的診斷提供重要依據。該研究在一定程度上明確了黃河三角洲地區無精及嚴重少精癥患者Y染色體微缺失的特點。從而使得臨床上一些原因不明的無精及嚴重少弱精癥患者明確病因，為臨床診療方案提供依據。同時，為防止基因缺陷的遺傳，可通過胚胎植入前遺傳診斷技術選擇女性胚胎以防止不育患兒的出生。