成人疑似病毒性腦炎、腦膜炎患者xTAG腦脊液病毒多重檢測結果分析*

伊 潔，關鴻志，倪安平，范思遠，徐英春

(1.中國醫學科學院 北京協和醫院檢驗科，侵襲性真菌病機制研究與精準診斷北京市重點實驗室，北京 100730；2.中國醫學科學院 北京協和醫院神經內科，北京 100730)

中樞神經系統(central nervous system，CNS)感染可引起腦炎或腦膜炎，其臨床癥狀表現為頭痛、發熱、嘔吐、頸強直、意識改變等，常見的原因有細菌、病毒、寄生蟲等，其中病毒感染是最常見的原因[1，2]。病毒性腦炎或腦膜炎的臨床癥狀不特異，因此病原學診斷顯得尤為重要。目前實驗室主要的診斷方法為腦脊液的病毒抗體檢測，其敏感性和時效性較低，因此亟需一種早期敏感準確的方法作為診斷依據。由于CNS感染病毒較為多樣，而分子生物學技術可以快速高通量地對病毒進行檢測[3-5]，因此利用分子生物學技術有利于病毒性腦炎或腦膜炎的病因診斷。xTAG腦脊液病毒多重檢測(xTAG CSFVP)技術是將多重逆轉錄PCR與微球雜交融合在一起的液相懸浮芯片檢測系統，與現有的臨床診斷方法如酶聯免疫吸附(ELISA)法比較，其具有特異度高、高通量、高敏感、重復性好、檢測標本用量少等優點[6-7]。本研究利用xTAG CSFVP技術對疑似病毒性腦炎或腦膜炎成人患者的腦脊液(cerebral spinal fluid，CSF)病原體進行檢測，報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2014年10月～2016年9月就診于北京協和醫院神經內科疑似病毒性腦炎或腦膜炎的115例患者的CSF標本115份，其中男性69例，女性46例，年齡18～79歲，平均年齡37.10±17.07歲。所有患者均行CSF常規、生化、細菌涂片、抗酸染色、墨汁染色等實驗室檢查，排除細菌、真菌和寄生蟲感染。所有患者均有急性神經系統的癥狀和體征，比如頭痛、發熱、意識改變等，并有CSF異常，如CSF白細胞數≥5×106/L，蛋白濃度>0.45 g/L的患者。檢測剩余CSF樣本凍存于-80℃，統一應用xTAG CSFVP技術進行檢測。

1.2 試劑與儀器 xTAG CSFVP技術：每份CSF樣本吸取200 μl轉移至1.5 ml無RNA酶Eppendorf管中，加入大腸埃希菌噬菌體MS2 20 μl作為內參照，按照RNA和DNA 提取試劑盒操作說明書進行總核酸提取。xTAG CSFVP(Luminex Molecular Diagnotics Inc，加拿大)按照試劑盒說明書進行操作，可檢出單純皰疹病毒1型(HSV-1)，單純皰疹病毒2型(HSV-2)，水痘-帶狀病毒(VZV)，巨細胞病毒(CMV)，EB病毒(EBV)和腸道病毒(EV)。

1.3 方法 使用xTAG CSFVP對115份CSF標本的人皰疹病毒和EV共6種病毒進行檢測，分析每種病毒的檢出率，并分析115例患者的單一感染率和混合感染率。比較xTAG CSFVP陽性和陰性患者的臨床特征和CSF生化指標。

1.4 統計學分析 采用SPSS 17.0 軟件進行統計學分析。結果中計數資料以例數或百分率表示，xTAG CSFVP陽性和陰性患者臨床特征的差異性檢驗選用配對設計資料的χ2檢驗進行分析，平均年齡和CSF生化指標的差異性檢驗選用獨立樣本t檢驗進行分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 xTAG CSFVP檢出結果 見表1。115份患者標本中，28份檢測出至少一種病毒，陽性率為24.3%，共檢出病毒30例。陽性率最高的為HSV1(7.8%)，其次為VZV和EBV(均為6.1%)。

表1 115份病毒性腦炎腦膜炎患者CSF病毒檢出情況

病毒種類n陽性率(%)構成比(%)HSV-1VZVHSV-2CMVEBVEV9721727.86.11.70.96.11.730.023.36.73.323.313.3

2.2 單一感染與混合感染結果 見表2。28例陽性患者中檢出單一病毒感染26例(92.86%)，混合病毒感染2例(7.14%)。其中HSV-1與VZV共感染1例，HSV-1與EBV共感染1例。

表2單一感染與混合感染的CSF病毒分布(例)

病毒種類單一感染混合感染總 計HSV-1VZVHSV-2CMVEBVEV852164120010972174

2.3 xTAG CSFVP檢測陰性與陽性患者臨床特征和CSF生化指標比較 xTAG CSFVP檢測陽性和陰性患者在性別及臨床癥狀，如頭痛、發熱、惡性嘔吐、腦膜刺激征、意識改變和抽搐方面進行比較，差異均無統計學意義(χ2=0.081～2.823，均P>0.05)。兩類患者在年齡、平均白細胞數和平均蛋白方面差異均無統計學意義(t=-1.463～0.345，均P>0.05)。

3 討論

病毒性腦炎、腦膜炎是CNS最常見的感染，多發于兒童以及青少年，成人相對少見。表3中xTAG CSFVP陽性和陰性的患者臨床癥狀和體征以及生化指標均無顯著性差異，因此難以靠臨床癥狀和CSF常規生化指標進行診斷。人皰疹病毒和EV是CNS病毒感染常見的兩類病毒[8-9]，在本研究中，我們首次利用xTAG CSFVP試劑盒對北京協和醫院疑似病毒性腦炎、腦膜炎患者感染的這兩類病毒分布進行了分析，發現有24.3%的病例中至少存在一種病毒，此外有2例混合感染，而混合感染在腦炎或腦膜炎中并不多見，這得益于xTAG CSFVP技術的使用。

HSV是腦炎中最常見的病毒，已有的研究報道在免疫功能正常的青少年和成人中將近90%的腦炎是由HSV-1導致的，而免疫缺陷患者的腦炎與HSV-2感染相關[10]。本研究發現，28例CSF病毒陽性患者中9例為HSV-1陽性，其中8例是單一感染，1例是與VZV混合感染。HSV-2在2例免疫缺陷患者中檢出，1例為淋巴癌，最終死亡，另1例為慢性腦膜炎。所有患者均診斷為腦炎，這與已有的研究報道認為HSV是成人病毒性腦炎最常見病原體結果一致[10-11]。

表3 xTAG CSFVP陽性和陰性患者臨床特征情況

VZV在病毒性中樞神經系統感染也較為常見，可導致腦炎或腦膜炎[12]。本研究中VZV陽性7例患者中5例臨床診斷為腦膜炎，其余2例癲癇患者診斷為腦炎。所有患者均未有皮膚異常，而且免疫功能均正常，提示VZV感染在不出疹的情況下亦可導致中樞神經系疾病或者其他神經系統異常[13]。混合感染在中樞神經系統感染不常見，但是本研究中有2例VZV混合感染。1例是與HSV-1混合感染，另1例是與EBV混合感染。VZV與HSV-1混合感染機制不清，可能是VZV或HSV-1在首次感染后在感覺神經節潛伏下來，另一種病毒感染后兩種病毒可大量增殖并同時感染人的神經元[14]，并且嗅覺和三叉神經束可為兩種病毒到達CNS提供神經通道[15-16]。

EBV相關的CNS感染可以分為兩類，一類是EBV原發感染或重新激活，另一類是長期慢性EBV感染[17]。已有的研究報道過單獨EBV感染導致CNS感染[18-19]，但是本研究中，EBV在7例患者中檢出為陽性，其中1例與VZV混合感染。EBV DNA陽性的檢出較多可能是EBV在首次感染后在B細胞中潛伏下來，因此可以在沒有臨床癥狀時也可以檢出DNA[20]。也有研究報道EBV常常與CNS感染的其他病原體相關[21]，提示EBV能在另一種病毒存在的情況下進行復制，因此VZV有可能與EBV共感染。

CMV感染常常為機會性感染，可在免疫缺陷患者中引起急性或慢性CNS感染[22]。本研究中，1例系統性紅斑狼瘡患者由于腦水腫在接受減顱壓手術后CSF中CMV陽性，而CMV引起的CNS感染常常在免疫缺陷病人中被忽視。

EV感染是在CNS中較為常見并且類似于細菌性腦膜炎感染。本研究中，2例EV感染患者臨床診斷為腦炎，1例為腦膜腦炎，1例為腦膜炎。有研究報道EV是兒童急性病毒性腦炎和腦膜炎最常見的病原體[23]，而本研究中EV的檢出率并非最高，提示成人與兒童病毒性腦炎和腦膜炎患者的病原譜有所不同。

已有的研究多集中在兒童病毒性腦炎、腦膜炎病原譜，很少有對成人患者病原譜進行研究。本研究將疑似病毒性腦炎和腦膜炎的成人患者納入，盡可能排除細菌性、真菌性和寄生蟲性，利用可以同時檢測6種病毒的xTAG CSFVP試劑敏感度和特異度高的優勢，從病毒的種類及感染情況，以及將臨床診斷與實驗室診斷相結合進行綜合分析，因此我們的研究結果可給臨床提供有效的病原學資料，為成人病毒性腦炎和腦膜炎的預防和診治提供合理依據。