類風濕關節炎患者血清IL-27水平及外周血PLR檢測與疾病活動度的相關性研究*

趙 芬，張愛萍，趙楠楠，欒希英

(1.濱州醫學院免疫學教研室，山東煙臺 264003；2.煙臺市福山區人民醫院檢驗科，山東煙臺 265500)

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因不明、以關節滑膜炎癥為主的自身免疫性疾病，以自身抗體觸發的慢性炎癥為主要臨床特征[1]，會引起機體多種免疫功能的紊亂，若不及時診斷治療，可破壞關節及其周圍組織，導致關節畸形和功能減退[2]，最終可致殘。準確及時地評估病情能夠最大限度地使患者的病程得到緩解和控制[3]。而目前用于RA病情活動性評估的實驗室指標類風濕因子(rheumatoid factors，RF)、抗環瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide，CCP)抗體、C反應蛋白(C-Reactive Protein，CRP)和紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)等對RA病情活動性評估的靈敏度和特異度都比較低，因此尋找更合適、更多與病情活動度相關的炎性指標尤為重要。本研究通過檢測不同活動期RA患者血清IL-27水平及外周血PLR值，分析其與疾病活動度的相關性，繼而探討血清IL-27水平與PLR聯合在RA病情活動度評估中的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 活動期RA患者96例，為煙臺市福山區人民醫院2017年10月～2018年10月門診和住院患者，均符合2010年ACR/EULAR制定的RA分類標準[4]，排除其他風濕病、感染、腫瘤、心腦血管疾病等，其中男性36例，女性60例，年齡26～73歲，平均年齡49.9±11.2歲，依據28個關節疾病活動性評分[5](DAS28評分)將RA組分為高度活動組(DAS28>5.1)32例、中度活動組(3.2

1.2 試劑和儀器 人IL-27 ELISA試劑盒購自美國Abcam公司；RT-6000 酶標儀購自雷杜公司；XN1000五分類血細胞分析儀及原裝配套試劑(稀釋液、白細胞分類溶血素、鞘液、清洗液)購自日本希森美康公司；魏氏紅細胞沉降率架及管購自東西儀(北京)科技有限公司；Abbott C16000全自動生化分析儀、Abbott i2000全自動免疫分析儀及RF，抗CCP抗體、hs-CRP原裝試劑購自美國雅培公司。

1.3 方法

1.3.1 標本采集：采集所有受試者靜脈血，2 ml置于EDTA-K2抗凝管用于檢測血細胞檢測；2 ml置于枸櫞酸鈉抗凝管用于檢測ESR；4 ml置于常規生化管，3 000 r/min離心15 min，收集血清后-80℃冷凍保存備用。

1.3.2 檢測方法：采用ELISA試劑盒檢測血清IL-27水平，嚴格按照說明書操作；Sysmex XN1000血細胞分析儀進行血細胞檢測，計算PLR；魏氏法檢測ESR；透射免疫比濁法檢測hs-CRP和RF；化學發光法檢測抗CCP抗體。

2 結果

2.1 活動期RA患者與對照組血清IL-27水平、PLR值比較 活動期RA患者血清IL-27水平、PLR值(17.74±8.58 pg/ml，165.50±39.26)明顯高于對照組(5.70±1.43 pg/ml，101.49±18.80)，差異有統計學意義(t=10.665，9.802，均P=0.000)。

2.2 活動期RA患者活動度越高，血清IL-27水平、PLR值越高 見圖1。

A：不同活動組IL-27水平；B：不同活動組PLR水平。

分析發現，高度活動組血清IL-27水平、PLR值明顯高于中度活動組及輕度活動組(P<0.05)，中度活動組IL-27水平、PLR值明顯高于輕度活動組(P<0.05)。

2.3 活動期RA患者血清IL-27水平和PLR值的相關性分析 采用Pearson相關性分析發現，活動期RA患者血清IL-27水平與PLR值呈顯著正相關(r2=0.208 8，P=0.000 1)。

2.4 活動期RA患者血清IL-27水平、PLR值與ESR，hs-CRP，RF，CCP相關性分析 見表1。采用Spearman相關性分析發現，活動期RA患者血清IL-27水平、PLR值均與ESR，hs-CRP顯著正相關，與RF，CCP無明顯相關性。

表1 活動期RA患者血清IL-27水平、PLR值與ESR，hs-CRP，RF，CCP相關性分析

3 討論

RA作為一種慢性、破壞性、累及多關節滑膜炎癥的自身免疫性疾病，其主要表現為關節的病變，以及血管翳的形成、皮下結節、神經性病變和肢體腫脹僵硬等[6]。RA多見于女性，男女比例約為1∶3，30～50歲為發病高峰，我國RA患病率為0.33%左右[7]，是發病率最高的風濕免疫性疾病，若不及時治療，最終將導致關節功能障礙甚至殘疾，因此對RA的早期診斷和病情評估尤為重要。目前，常用于RA診斷的檢驗指標中唯一對RA靈敏度高的RF特異度卻不高，特異度高的抗CCP抗體對病情檢測的靈敏度又偏低，為更好反映病情，2010年美國風濕病協會(American College of Rheumatology，ACR)和歐洲抗風濕聯盟(European League Against Rheumatism，EULAR)制定的RA新診斷標準中引入了CRP和ESR兩種非特異性炎性指標來評估RA病情活動性，但這兩種炎性指標不但能在RA患者中檢測出來，也能在其他自身免疫性疾病患者中檢測出來，并不能準確地反映RA患者的病情，因此，尋找更合適的評估指標尤為重要。

IL-27是Pflanz在2002年發現的細胞因子，屬于IL-12 家族[8]，由p28，EBI3(EB病毒誘導基因3)組成的二聚體，最初主要由抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)：樹突狀細胞、巨噬細胞、單核細胞等分泌，與眾多自身免疫病的發生發展有關。近年來IL-27與RA的研究陸續增多，包括動物實驗和臨床試驗，但關于IL-27在RA中表達的報道結果不盡統一。在RA的膠原誘導性動物模型關節炎(CIA)中，局部IL-27的表達既能降低滑膜厚度又可延緩軟骨的破壞[9]。而臨床實驗表明IL-27可通過介導未成熟的T細胞向Th1細胞分化，產生Th1型反應并促進IFN-γ的產生從而加重RA炎癥反應。賴曉霏等[10]的實驗提示 IL-27可能與RA病情變化有關。但不同活動期RA患者IL-27水平與疾病活動度的關系尚未見報道。

PLR是一種簡單易得、又同時把炎癥、免疫及凝血途徑涵蓋在內的綜合指標。近年來PLR被認為是一種全新的反映全身炎癥的生物標志物。目前已有研究報道PLR可能與RA慢性炎癥狀態相關[11]。Wang等[12，13]證實，PLR作為一種簡單、全面的炎癥指標，可在腫瘤治療前有效預測腫瘤化療療效，且能夠反映腫瘤患者或慢性炎癥患者體內的炎癥狀態。Salman等[14]研究表明，PLR與中性粒細胞/淋巴細胞比率聯合可判斷潰瘍性結腸炎病情活動度。

本研究檢測了不同活動期RA患者血清IL-27水平、PLR值，發現和對照組相比，活動期RA患者血清IL-27水平、PLR值均顯著升高，表明IL-27，PLR可能與RA活動度相關。分析不同活動期RA患者IL-27水平、PLR值發現，活動度越高，血清IL-27水平、PLR值越高，提示IL-27，PLR可能在RA病情加重過程中起作用。該研究進一步分析發現活動期RA患者血清IL-27水平與PLR呈顯著正相關，且血清IL-27水平、PLR均與疾病活動度指標ESR，hs-CRP呈顯著正相關，這可提示二者聯合對RA病情活動性評估具有潛在價值。

舒銘等[15]報道抗CCP抗體與RA的病情嚴重程度具有明顯相關性，但本研究中RA血清IL-27水平、PLR與抗CCP抗體均無明顯相關性，考慮可能與本研究納入的患者例數較少，研究的樣本量偏少，造成了誤差，需要加大標本量進一步證實。

綜上所述，本研究分析了活動期RA患者血清IL-27水平、PLR與類風濕關節炎疾病活動度指標的關系，證明有顯著相關性，初步提示二者檢測聯合可能會成為評估RA病情活動度的更合適指標。但由于本研究標本量偏少，存在一些局限性，故有待更多的臨床試驗進一步探究。