1976年中國唐山地震生存截癱患者淋巴細胞亞群水平檢測研究*

王菊惠，袁寶軍，李 超，裴 斐，李佳強，楊宏秀

(1.開灤總醫院a.檢驗科；b.神經外科，河北唐山 063000；2.唐山市截癱療養院檢驗科，河北唐山 063003)

1976年中國唐山地震幸存截癱患者，經受身體殘疾、心理疾患及反復發作的多種并發癥(如褥瘡、泌尿系感染、肺部并發癥、便秘、深靜脈血栓、神經痛等)折磨，機體的免疫功能勢必會受到不同程度的影響。以前的研究[1，2]多著重于體液免疫水平，分析免疫球蛋白和補體的變化，對截癱患者外周血淋巴細胞亞群水平的研究罕有報道。本次實驗主要檢測唐山地震截癱患者的細胞免疫水平，即淋巴細胞亞群水平，包括CD3+總T細胞，CD4+T細胞，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+自然殺傷細胞(natural killer cells，NK細胞)，為臨床提供唐山地震40多年后截癱患者的細胞免疫水平的數據，輔助臨床治療。

1 材料與方法

1.1 研究對象 截癱組：從2016年7月～2017年6月，陸續采集110例唐山市截癱療養院、康復村及散居截癱患者的清晨空腹靜脈血2 ml于EDTA-K2抗凝管中，6 h內完成處理分析。其中，男性38例，平均年齡64.7±7.7歲，女性72例，平均年齡66.1±7.8歲。對照組為健康體檢者，共130例，其中男性41例，女性89例，平均年齡68.7±8.9歲，無肝臟、腎臟及免疫功能疾病病史。

1.2 試劑和儀器 流式熒光標記抗體試劑CD3 FITC，CD4 PE，CD8 PE，CD19 PE和CD16+CD56+PE CD4均購自美國BD Biosciences公司。儀器為美國BD公司的FACSCalibur流式細胞儀。

1.3 方法 嚴格按照說明書操作。具體操作步驟見李超等[3，4]T淋巴細胞亞群，B淋巴細胞及NK細胞測定的操作方法。用cellquest軟件分析結果。

2 結果

2.1 截癱患者和對照組外周血中CD3+，CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞水平 見表1。截癱組與健康對照組比較，CD8+T細胞，CD4+/CD8+和CD16+CD56+NK細胞水平差異均有統計學意義(F=1.375，1.052，0.674，均P<0.05)，CD3+，CD4+T細胞，CD19+B細胞差異無統計學意義(F=0.800，1.490，0.223，均P>0.05)。

表1 截癱組與健康對照組CD3+，CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞水平

2.2 不同性別截癱患者外周血中CD3+，CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞比較 見表2。男女兩組外周血中CD19+B細胞差異具有統計學意義(F=0.038，P<0.05)，CD3+，CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+和CD16+CD56+NK細胞無明顯改變，差異無統計學意義(F=0.002～1.808，均P>0.05)。

表2 男女截癱患者外周血CD3+，CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞的比較

2.3 截癱患者外周血中CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞的相關性 見表3。CD4+與CD8+(r=-0.333，P=0.008)，CD4+與CD4+/CD8+(r=0.728，P=0.000)，CD4+與CD16+CD56+(r=-0.429，P=0.000)，CD8+與CD4+/CD8+(r=-0.783，P=0.000)，CD8+與CD16+CD56+(r=-0.424，P=0.000)，CD19+與CD16+CD56+(r=-0.346，P=0.001)差異均有統計學意義。

3 討論

劉滿合[5]調查與分析唐山地震25年截癱病人死亡原因顯示，威脅截癱患者生命安全的是不同程度的各種并發癥。由于反復發病和用藥，截癱患者的免疫功能可能會產生不同程度的變化。本研究主要研究截癱40年后患者的淋巴細胞亞群水平。

表3 截癱患者外周血CD4+，CD8+T細胞，CD4+/CD8+，CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞的相關性分析

注：**在0.01水平(雙側)上顯著相關。

T淋巴細胞在骨髓中形成，于胸腺中發育成熟，再定居淋巴結、脾及其他淋巴組織等周圍免疫器官。CD3+是所有T淋巴細胞表面的特征性抗原標志，T淋巴細胞分為輔助性T淋巴細胞(其表面標志是CD4+)、抑制性T淋巴細胞(表面標志是CD8+)、調劑/抑制T淋巴細胞和記憶T細胞等。各種T細胞作用不同，輔助性T淋巴細胞釋放細胞活性因子，抑制性T淋巴細胞釋放抑制因子，從而對B淋巴細胞及效應T淋巴細胞產生活化及抑制效應。淋巴細胞亞群CD4+/CD8+的比值是評價細胞免疫平衡的重要指標之一[6]，比值升高說明免疫功能增強，反之為免疫功能低下。本研究截癱組與正常對照相比，輔助性T淋巴細胞有降低趨勢，抑制性T淋巴細胞明顯升高，提示截癱患者免疫抑制增強，同時發現截癱患者CD4+/CD8+比值降低，說明截癱患者免疫功能低下。另有國外Sistigu等[7]研究CD8+T細胞的抗原性和免疫原性顯示大多數感染性疾病CD4+/CD8+比率降低或倒置，同時Remick[8]G研究膿毒血癥的病理生理顯示免疫抑制的出現使得患者易于并發感染，并使感染難于控制，導致病情惡化。本研究人群為40多年的截癱患者，長期受慢性疾病的影響，導致T淋巴細胞亞群結果異于正常人，免疫功能紊亂。此研究結果與江浪進等[9]的280例慢性乙型肝炎，顧盼瑾等[10]的36例腎癌患者的T淋巴細胞水平的分析結果相似。Dejong等[11]的慢性阻塞性肺病炎癥中淋巴細胞改變主要是CD8+T淋巴細胞增多，CD4+T淋巴細胞減少或不變，CD4+/CD8+比值下降，與我們的研究結果亦相似。截癱患者反復發作的感染及并發癥，可能是免疫紊亂引起的惡性循環，還有待進一步研究。

CD19是B淋巴細胞表面的激活性受體，在B淋巴細胞分化及成熟全過程均有表達。本研究顯示截癱患者與正常對照的B淋巴細胞功能無顯著性變化。但女性比男性有更高水平的CD19+B細胞，其意義尚不清楚。

CD16和CD56抗原是自然殺傷細胞主要的表面標記，不同NK細胞亞群的生物學功能各異[12]，并可通過釋放細胞因子調節特異性免疫反應。Brigl等[13]在CD1抗原呈遞和T淋巴細胞功能中闡述，雖然NK細胞在人體中的數量相對較少，但是調節機體自身免疫平衡，抵御感染，抵抗腫瘤的重要細胞。本研究的結果為截癱患者外周血中NK細胞百分比明顯低于正常對照，證明截癱患者自然殺傷細胞能力降低。

CD4+與CD8+，CD4+與CD4+/CD8+，CD8+與CD4+/CD8+，CD4+與CD16+CD56+，CD8+與CD16+CD56+，CD19+與CD16+CD56+存在顯著相關性，說明各種T細胞、B細胞與NK細胞，協同發揮生物學作用，從而維持機體內環境的穩定。

另外，本實驗沒有研究唐山地震截癱患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+的Treg細胞水平，可以借鑒高碩等[14]的研究，對截癱患者的細胞免疫水平做進一步探討。

總之，1976年唐山地震截癱患者四十多年來，機體淋巴細胞亞群水平嚴重紊亂，免疫功能降低，疾病恢復功能障礙，希望能對截癱患者的預后提供一些參考和啟發。