陜西省延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因多態(tài)性和國內多地區(qū)相關報道比較分析*

曹 云，周 曉，張曉艷，李 帥，何進偉，龐寶華

(1.延安市人民醫(yī)院檢驗科，陜西延安 716000；2.延安大學醫(yī)學院，陜西延安 716000)

亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)由MTHFR基因編碼，是葉酸代謝通路的關鍵酶之一。目前已發(fā)現MTHFR基因多態(tài)性位點有近20種，其中C677T和A1298C是最具有臨床意義的兩個突變位點，會直接影響到體內血清和紅細胞葉酸水平、同型半胱氨酸的水平，因而對新生兒神經管畸形、21-三體綜合征，孕產婦復發(fā)性流產、妊娠期高血壓等疾病產生重大的影響[1～3]。本研究擬了解延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因遺傳突變情況，進而指導臨床為當地育齡女性選擇適宜的葉酸增補方案提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 見表1。選取2016年4月1日～2017年12月31日來延安第二醫(yī)療集團(網絡單位有延安市人民醫(yī)院、延安市人民醫(yī)院河莊坪分院、吳起縣人民醫(yī)院、安塞縣人民醫(yī)院、子長縣人民醫(yī)院、富縣人民醫(yī)院、延長石油職工醫(yī)院等)進行孕前與孕期葉酸代謝能力檢測的育齡女性，共1 508例，全部來自于陜西省延安市各個區(qū)縣，年齡15～49歲，平均年齡27.61±4.19歲。

表1 研究人群來源地分布情況

1.2 試劑和儀器 試劑：葉酸代謝能力測定熒光試劑盒(江西諾德醫(yī)療器械有限公司)。儀器：ViiA 7 Dx全自動PCR熒光定量分析儀(美國ABI公司)。

1.3 方法 采集研究對象EDTA抗凝全血，提取DNA，完全按照試劑盒及儀器標準操作流程進行操作。采用熒光定量PCR技術檢測MTHFR C677T，MTHFR A1298C的基因多態(tài)性，反應體系20 μl，反應條件：95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 40 s，40個循環(huán)；室溫冷卻1 min。反應完成后，在熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點熒光，應用分析軟件判讀樣本的基因分型并確定其結果。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數資料采用率(%)表示，對基因型頻率及等位基因頻率進行R×C多連列表卡方(χ2)檢驗，檢驗水準α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點Hardy-Weinberg遺傳平衡分析 見表2。MTHFR C677T位點基因型有CC(野生型)，CT(雜合型)和TT(突變型)三種。MTHFR A1298C位點基因型也是三種：AA(野生型)，AC(雜合型)和CC(突變型)。研究群體MTHFR C677T 和A1298C兩個位點的基因多態(tài)性分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，具有該區(qū)域群體代表性。

表2 研究群體MTHFR C677T和A1298C位點Hardy-Weinberg遺傳平衡分析

2.2 延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點表現型分布 見表3。延安地區(qū)1 508例育齡女性MTHFR基因代謝能力正常的還不到研究群體的1/4。

表3 延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點表現型分布(n=1 058)

基因型(MTHFR C677T/A1298C)表現型n構成比(%)CC/AA,CC/ACCC/CC,CT/AA,CT/ACCT/CC,TT/AA,TT/AC,TT/CC正常代謝型較弱代謝型弱代謝型33976540422.550.726.8

2.3 延安地區(qū)與國內其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點基因型和等位基因分布特征

2.3.1 延安地區(qū)與國內其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點基因型分布特征，見表4。延安地區(qū)女性MTHFR C677T位點以雜合突變型CT為主，而其A1298C位點以野生型AA為主。MTHFR C677T和A1298C位點基因型分布情況與湘潭、武漢、南寧等地區(qū)基因分布情況的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與烏魯木齊、遼源等地區(qū)基因分布情況的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。整體來看MTHFR C677T TT純合突變型呈現北高南低的趨勢。見圖1。

表4 不同地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點基因型分布特征[n(%)]

注：aP<0.05。

圖1 各地區(qū)人群中MTHFR基因C677T位點多態(tài)性(CC，CT，TT)分布

2.3.2 延安地區(qū)與國內其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點等位基因分布特征，見表5。延安地區(qū)女性MTHFR C677T位點等位基因C，T和A1298C位點等位基因A，C分布情況與廊坊、武漢、南寧等地區(qū)的等位基因分布情況的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與烏魯木齊、遼源等地區(qū)的等位基因分布情況的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。并且各個地區(qū)的等位基因T有隨著緯度下降而下降的趨勢。見圖2。

表5 不同地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點等位基因分布特征[n(%)]

注：bP<0.05。

圖2 MTHFR基因C667T位點等位基因(C，T)隨緯度變化趨勢

3 討論

MTHFR基因突變導致的體內低葉酸水平會增加多種疾病的患病風險，包括21-三體綜合癥、胎兒抗驚厥綜合癥、唇裂(伴或不伴腭裂)等，對于突變純合子和突變雜合子的影響風險不同。隨著醫(yī)療科技的發(fā)展與孕期葉酸補充等措施的實施，近年來新生兒出生缺陷發(fā)病率雖然有所降低，但每年新生兒出生缺陷仍高達90萬例[13]。本研究調查顯示，陜西省延安地區(qū)超過3/4的育齡女性存在葉酸能力代謝不足的風險，臨床常規(guī)的葉酸補充劑量(400 μg/d)可能滿足不了這部分人群胎兒發(fā)育的實際需求。因此，在為育齡女性制定孕前及孕期葉酸增補方案時需考慮區(qū)域遺傳特征，不能盲目進補。

該研究延安地區(qū)育齡女性以基因型(MTHFR C677T/A1298C)CT/AA型為主，并與國內多地區(qū)相比存在差異性。有文獻報道[14]，葉酸代謝基因MTHFR C677T位點的突變是死胎發(fā)生的危險因素，與MTHFR A1298C位點突變無關。另有研究指出[15]，葉酸代謝基因MTHFR C677T位點的突變可能是神經管缺損、先天性心臟病、21-三體綜合征發(fā)生的危險因素之一，而MTHFR A1298C在其中的作用相對較弱。因此，深度研究了MTHFR C677T位點突變的規(guī)律。就總體而言，北方地區(qū)(延安、烏魯木齊、遼源、廊坊、煙臺)人群中MTHFR C677T純合突變基因型TT所占比例比南方地區(qū)(湘潭、武漢、昆明、南寧、瓊海)高，呈現北高南低的趨勢；有趣的是其等位基因T的基因頻率也呈現隨緯度的遞減而降低的走向，這與我國神經管畸形發(fā)病率北高于南的趨勢相一致[16]，這種基因多態(tài)性分布可能受地形、地貌、經緯度、氣候、生活環(huán)境、飲食等影響，是經過漫長的自然選擇形成的。

目前陜西省延安地區(qū)還尚未有大樣本人群的關于MTHFR C677T，A1298C位點的基因多態(tài)性分析報道，這一研究填補了目前這一領域的相關數據的空白。基于該地區(qū)研究結果，一方面對一些有過出生缺陷史的育齡女性建議進一步進行MTHFR基因多態(tài)性精準檢測是非常有必要的，進而采取有效的靶向干預措施；另一方面可為一些基層無法開展葉酸代謝能力檢測的醫(yī)院提供經驗用藥指導。