金銀花提取物對4 種病原菌的體外抑菌效果研究

許欽坤，趙翠燕

（1.韶關學院 英東生命科學學院，廣東 韶關512005；2.韶關學院 英東農業科學與工程學院，廣東 韶關512005）

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和沙門氏菌是導致人畜腹瀉的主要病原菌.目前，防治這類細菌性疾病主要使用抗生素，而抗生素的濫用加劇了細菌的抗藥性，嚴重威脅到人類健康.由于中草藥具有來源廣泛、不易產生耐藥性且毒副作用較小的特點，因此目前備受關注.金銀花是忍冬科多年生常綠纏繞灌木忍冬的干燥花蕾［1］，主要含有揮發油類、黃酮類、酚酸類、三萜類等成分, 其中酚酸類成份具有較好的抑菌效果［2-4］.金銀花性味甘寒, 氣味芳香，入肺經、心經和胃經；甘寒清熱而不傷胃， 芳香透達又可祛邪；既能疏散風熱, 亦能清解血毒，用于身熱、發斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等熱性病的治療, 且效果顯著［5-6］，因此金銀花在臨床上和動物養殖中被廣泛應用.本實驗以金銀花作為研究對象，分別對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和沙門氏菌進行體外抑菌實驗，以期為這些細菌性疾病的臨床防治提供參考.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

金銀花購自韶關市某藥房.大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和沙門氏菌菌為實驗室保存.主要儀器包括恒溫培養箱、牛津杯、冰箱、高壓蒸汽滅菌鍋和無菌操作臺等.

1.2 實驗方法

1.2.1 菌懸液制備

無菌條件下，分別將4 種病原菌接種至斜面培養基，37 ℃，倒置培養過夜；挑選單個菌落，接種于肉湯培養基中，37 ℃，120 r/min，搖床培養過夜；調節菌種濃度到1×105CFU/mL，4 ℃冰箱保存備用.

1.2.2 金銀花提取物的制備［7］

取50 g 金銀花，加蒸餾水500 mL.室溫浸泡1 h 后煮沸，煮沸后文火煎煮1 h，8 層紗布過濾；濾渣加水250 mL，煮沸30 min，合并2 次濾液，水浴濃縮至50 mL，即藥液濃度為l g／mL ，裝于三角瓶中，高壓蒸汽滅菌，4 ℃冰箱中保存，備用.

1.2.3 牛津杯法體外抑菌實驗［8］

在無菌條件下，將滅菌過的培養基制成平板，待其冷卻凝固后，分別加入0.1 mL 供試菌，用無菌玻璃涂棒涂布均勻.待干燥后，用鑷子將牛津杯放入培養平板中，輕輕加壓，使其與培養基接觸沒有空隙，每個平板水平擺放4 個牛津杯.牛津杯中加入藥液，做3 組對照.將平板倒置于37 ℃恒溫箱培養12 h，游標卡尺測量抑菌圈直徑，判斷藥液的抑菌作用.

1.2.4 最小抑菌濃度(MIC)的測定

采用試管2 倍稀釋法，取10 支滅菌試管，放置試管架，編號.每個試管加2 mL 無菌液體培養基，取金銀花提取藥液2 mL 加入1 號試管，混和均勻；取出2 mL 放2 號試管，依次類推，稀釋至9 號試管，第9號試管取2 mL 棄掉.藥物稀釋度依次為1∶2、1∶4、1:8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512.取保存的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和沙門氏菌菌液0.1 mL，分別加到上述試管中，混合均勻， 37 ℃恒溫培養箱靜置24 h，觀察結果并記錄各試管內細菌生長情況.如果試管中完全清亮，無細菌生長，則說明此藥物的濃度為最小抑菌濃度(MIC).同時設陽性對照管和陰性對照管各1 支.

2 實驗結果

2.1 金銀花提取物的抑菌效果

抑菌效果判定：抑菌圈直徑15 mm 以上為高度敏感，10~15 mm 為中度敏感，小于10 mm 為低度敏感.金銀花提取物對4 種病原菌的抑菌結果，如表1 所示.

表1 金銀花提取物對4 種病原菌抑菌結果

由表1 可知，沙門氏菌對金銀花提取物有較強敏感性，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對金銀花提取物中度敏感，銅綠假單胞菌對金銀花提取物低度敏感.

2.2 金銀花提取物的最小抑菌濃度(MIC)測定結果

由表2 可以看出，金銀花提取物對4 種病原菌有較好抑菌作用，其中對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌效果最強，MIC 值為31.20 mg／mL，對沙門氏菌的抑菌活性次之，MIC 值為125.00 mg／mL，對銅綠假單胞菌的抑菌活性最弱，MIC 值為250.00 mg／mL.

表2 金銀花提取物對4 種病原菌最小抑菌濃度(MIC)

3 討論

本實驗結果證明，金銀花提取物對4 種病原菌均有較好的抑菌作用，沙門氏菌對金銀花提取物有較強敏感性，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對金銀花提取物中度敏感，銅綠假單胞菌對金銀花提取物低度敏感.其中大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度（MIC）均為31.25 mg/mL.沙門氏菌最小抑菌濃度（MIC）為125.00 mg/mL，銅綠假單胞菌最小抑菌濃度（MIC）為250.00 mg/mL.這與姜源明［9］和任敏［10］的研究結果基本符合，但抑菌強度有所差別，這可能和藥物提取方式，濃度以及菌體濃度有關.

我國中草藥資源十分豐富，種類多，數量大.已有研究證明，很多中草藥的提取物中含有殺菌，抗病毒成分.金銀花是常用中草藥之一，在臨床上對常見致病菌有抑菌和殺菌作用［11-12］，林小靜等［13］研究發現金銀花主要成分對銅綠假單胞菌多耐藥菌株較強的抑菌作用. 在動物養殖中, 金銀花提取物可作為抗生素替代品，具有治愈率高、低殘留、不易產生耐藥等特點，有著極其廣闊發展應用前景.