老年COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平變化及其臨床意義

賈博 張少華 劉建軍

(1北京市垂楊柳醫院心內科，北京 100022；2河北省老年病醫院內科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)主要表現為氣流受限，發病機制以炎癥反應為病理基礎〔1，2〕。白細胞介素(IL)-18、IL-6和高敏C反應蛋白(hs-CRP)參與COPD的炎癥過程，肺表面活性蛋白(SP-D)可直接反映氣道及肺的損傷程度〔3〕。IL-6是聯系T淋巴細胞與炎癥因子的橋梁〔4〕。CD83可反映肺組織免疫調節狀態，進而推斷肺部的穩態平衡程度，組蛋白乙酰化酶(HAT)/去乙酰化酶(HDAC)2失衡是COPD炎癥反應的重要因素〔5〕。本文擬進一步探究COPD的抗炎機制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年3月至2017年4月在北京市垂楊柳醫院接受治療的老年COPD患者90例，男50例，女40例，年齡65～82〔平均(73.52±3.41)〕歲，病程5～10〔平均(7.32±1.01)〕年。納入標準：(1)符合COPD的相關診斷標準；(2)無其他呼吸系統疾病。排除標準：(1)臨床資料不全者；(2)合并免疫功能障礙者。對照組90人為體檢正常的健康老年人，男45人，女45人，年齡65～85〔平均(73.55±3.63)〕歲。兩組年齡、性別差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會評審通過，且研究對象均知情同意。

1.2方法 外周單個核細胞(PBMC)分離得外周血沉淀物加入等量生理鹽水混勻，滴加適量淋巴細胞分離液3 000 r/min離心15 min，離心后分3層，用毛細管吸取上中層交界處的白色云霧層即單核細胞層，置于離心管中，加入5倍生理鹽水，10 000 r/min離心1 min洗滌2次。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定PBMC中HDAC2的含量，所需儀器購自Abnova公司，批號為KA2744，操作步驟嚴格按照說明書進行。采用Jaegar公司生產的呼氣冷凝液收集器，患者用口平靜呼氣15 min呼出氣體，遇冷凝結成液體收集，保存于-80℃采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定CRP、IL-17、IL-6、IL-18、SP-D、CD83肺功能測定，采用Maste Screen PFT型肺功能儀購自德國Jaeger公司測定肺功能相關指標：1 s用力呼氣容積(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC、呼氣峰流速值(PEF)、最大呼氣中期流量(MMEF)。

1.3評價指標 觀察兩組CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平及細胞因子和肺功能的差異，分析老年COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平與肺功能和細胞因子的相關性。

1.4統計學處理 采用SPSS11.5軟件進行t檢驗及Pearson相關分析。

2 結 果

2.1兩組CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平比較 COPD組CD83和HDAC2 mRNA水平明顯低于對照組，IL-17和SP-D水平明顯高于對照組(均P<0.001)，見表1。

2.2兩組細胞因子水平比較 COPD組IL-18、IL-6和hs-CRP水平均明顯高于對照組(均P<0.001)。見表2。

2.3兩組肺功能水平比較 COPD組FVC、FEV1/FVC、MMEF和PEF水平均明顯低于對照組(均P<0.001)。見表3。

表1 兩組CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平比較

表2 兩組細胞因子水平比較

表3 兩組肺功能水平比較

2.4COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA與肺功能和細胞因子的相關性 COPD組CD83 和HDAC2 mRNA水平與IL-18(r=-0.613、-0.618，P=0.041、0.005)、IL-6(r=-0.605、-0.603，P=0.035、0.023)、hs-CRP(r=-0.598、-0.615，P=0.021、0.029)水平呈負相關，與FVC(r=0.621、0.624，P=0.017、0.032)、FEV1/FVC(r=0.615、0.633，P=0.011，0.041)、MMEF(r=0.603、0.608，P=0.008、0.001)和PEF(r=0.587、0.599，P=0.002、0.014)呈正相關；COPD患者IL-17和SP-D水平與IL-18(r=0.632、0.615，P=0.003、0.011)、IL-6(r=0.615、0.623，P=0.015、0.008)、hs-CRP(r=0.627、0.617，P=0.027、0.042)水平呈正相關，與FVC(r=-0.608、-0.624，P=0.033、0.037)、FEV1/FVC(r=-0.617、-0.631，P=0.002、0.022)、MMEF(r=-0.624、-0.622，P=0.012、0.016)和PEF(r=-0.595、-0.608，P=0.027、0.001)呈負相關。

3 討 論

COPD發病機制多種，長期吸煙、其他有害顆粒吸入致肺部慢性炎癥反應是其主要原因。多種炎癥細胞、細胞因子介質參與的炎癥反應，不僅破壞肺實質、肺血管，造成氣管重塑，還對肺損傷修復防御機制造成一定程度破損〔6，7〕。肺部蛋白酶-抗蛋白酶失衡，凋亡、抗凋亡及氧化、抗氧化系統的失衡仍是重要原因。

本研究結果顯示，COPD患者血漿中IL-17、IL-18濃度升高。其原因可能是中性粒是COPD炎癥反應過程中的主要炎癥細胞，其數量決定病情的嚴重程度。IL-17、IL-18可調控中性粒在呼吸道中的募集、激活能力，是聯系T淋巴細胞和中性粒細胞的重要介質，通過募集中性粒細胞實現炎癥反應的持續性進行〔8〕。

COPD誘發因素如長期吸煙、有害顆粒、細菌病毒的反復侵入等，可刺激上述細胞分泌IL-6。增多的IL-6不僅能提高募集、激活中性粒細胞的能力，還可抑制中性粒細胞凋亡，延長其壽命。局部蓄積造成持續效應-放大炎癥反應。IL-6與中性粒細胞結合，可以使細胞變形，通過脫顆粒、呼吸爆發反應，釋放大量超氧化物，促進炎癥反應的進行，誘導中性粒細胞釋放彈性蛋白酶是蛋白酶-抗蛋白酶失衡的主要原因。肺組織、肺泡壁損傷誘發肺氣腫。袁玉亮〔9〕發現IL-16水平與FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平下降程度呈負相關，與本研究結果一致，說明IL-16降低小氣道功能，且能反映其下降程度。

hs-CRP是一種急性時相反應蛋白，可由感染、炎癥狀態下產生的IL-6等細胞因子刺激肝臟細胞合成，以調節控制炎癥反應〔10〕。作為炎癥狀態組織損傷標準，本研究結果顯示COPD患者中血清hs-CRP濃度升高。SP-D由肺泡Ⅱ型上皮細胞合成并分泌，可降低吸氣阻力，維持肺泡容積相對穩定，COPD患者肺損傷，肺血管壁通透性增加，SP-D與連接不緊密的肺表面磷脂分離，通過肺氣-血屏障進入血液，使血液中SP-D水平升高〔11〕。

HDAC2 mRNA轉錄表達HDAC2為糖皮質激素介導的具有抗炎作用的組蛋白去乙酰化酶〔12〕。COPD誘發因素香煙煙霧通過激活肺部氧化應激，釋放過氧化物可使HDAC2活性降低，甚至是失去活性〔13〕。本研究結果顯示，COPD患者通過下調HDAC2 mRNA抑制HDAC2的釋放及其活性的發揮。尚東等〔14〕實驗證明，長期使用香煙提取物使CD83表達水平下降。姚倫凱等〔5〕報道老年COPD組CD83和HDAC2 mRNA水平與IL-18、IL-6、hs-CRP水平呈負相關，與FVC、FEV1/FVC、MMEF和PEF呈正相關，與本研究結果一致。綜上，老年COPD患者CD83、HDAC2 mRNA水平較低，IL-17、SP-D較高，可作為臨床監測的重要指標。