益腎化濁方對SAMP8小鼠海馬β淀粉樣蛋白和磷酸化tau蛋白表達及肝腎功能的影響

孫偉明 崔遠武 王凱 程汝珍 張玉蓮

(1天津中醫藥大學，天津 301617；2天津中醫藥大學第二附屬醫院)

阿爾茨海默病(AD)病理上主要表現為以β淀粉樣蛋白(Aβ)為核心的神經炎性斑(NPs)和tau蛋白過度磷酸化(p-tau)形成的神經纖維纏結(NFTs)〔1〕。Aβ和p-tau可相互影響造成神經元丟失、破壞突觸結構，導致AD患者認知能力下降〔2～4〕。前期研究發現，益腎化濁方(YSHZ)可改善輕度AD患者的臨床癥狀，提高認知和日常生活能力〔5〕，提高快速老化小鼠(SAMP8)的空間記憶能力〔6〕，保護神經的超微結構〔7〕。在此基礎上，本研究觀察YSHZ對SAMP8海馬區Aβ和p-tau的表達及肝腎功能的影響，以探討YSHZ治療AD的機制及其安全性。

1 材料與方法

1.1實驗動物 7月齡雄性健康SPF級SAMP8 20只，體重25～30 g；7月齡雄性SPF級抗快速老化小鼠(SAMR1)10只，體重25～30 g，由天津中醫藥大學第一附屬醫院提供，許可證號〔SCXK(津) 2015-0003〕。

1.2藥物與主要儀器試劑 YSHZ組成：淫羊藿10 g、女貞子10 g、制首烏6 g、肉蓯蓉10 g、石菖蒲6 g、川芎6 g。上述藥物由天津中醫藥大學第二附屬醫院制劑室制備：水煎3次，每次0.5 h，混合后濃縮至0.624 g/ml，4℃保存備用。病理切片機(上海徠卡儀器有限公司，RM2016)、正置光學顯微鏡(日本尼康，NIKON ECLIPSE CI)、成像系統(日本尼康，NIKON DS-U3)。Aβ單克隆抗體(abcam公司，ab201061)，p-tau單克隆抗體(Thermo Scientific公司，AT8 MN1020B)，組化試劑盒(Servicebio公司，GDP1001)，天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)試劑盒(武漢優爾生商貿有限公司，SEB214Mu、SEA207Mu)，尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)測試盒(南京建成生物工程研究所，C013-1、C011-2)。

1.3給藥與分組 20只SAMP8隨機分成SAMP8組和YSHZ組；YSHZ組給藥劑量6.24 g/kg。SAMR1和SAMP8組給予等體積的蒸餾水。各組每日灌胃1次，持續4 w。

1.4免疫組化 采用5%水合氯醛，按照400 mg/kg劑量，腹腔注射麻醉小鼠，仰臥位固定于手術臺上，開放胸腔，剪開右心耳，將灌注針由心尖處刺入達主動脈，先后灌注0.9%生理鹽水和4%多聚甲醛；……