IL-17、IL-6在狼瘡性腎炎中的表達(dá)及與疾病活動(dòng)度的關(guān)系

徐青青 蔡露茜

狼瘡性腎炎是臨床常見腎臟免疫性疾病，它是由系統(tǒng)性紅斑狼瘡引發(fā)的一種并發(fā)癥[1]。研究表明，約有60%的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者伴有狼瘡性腎炎[2]。狼瘡性腎炎不僅是導(dǎo)致終末期腎衰竭的危險(xiǎn)因素，也是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，因此早期發(fā)現(xiàn)、定期評估病情程度對此類患者預(yù)后尤為重要。目前，腎臟活組織檢查是臨床診斷狼瘡性腎炎的主要手段，但是腎臟活組織檢查對腎臟具有一定程度的損傷，不易用來反復(fù)檢查，因此存在很大的局限性[3]。因此探尋敏感的血清分子作為診治的輔助性標(biāo)志物對于狼瘡性腎炎的診斷和治療具有重要意義。近年研究表明，細(xì)胞介素-17(IL-17)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)在狼瘡性腎炎的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[4，5]，本研究選取筆者醫(yī)院38例狼瘡性腎炎患者和19例健康受試者作為研究對象，探究IL-17和IL-6在狼瘡性腎炎中的表達(dá)關(guān)系，及二者與狼瘡性腎炎疾病活動(dòng)度的相關(guān)性。

資料與方法

1. 一般資料：選取2016年3月～2017年6月在筆者醫(yī)院診治的38例狼瘡性腎炎患者，所有患者均符合1982年美國風(fēng)濕學(xué)會(huì)修訂的系統(tǒng)性紅斑狼瘡診治標(biāo)準(zhǔn)，且符合狼瘡性腎炎診斷標(biāo)準(zhǔn)(符合下述4條中至少1條并排除其他原因)，即24h尿蛋白>0.5g，尿中白細(xì)胞或紅細(xì)胞>5個(gè)/HP或顆粒管型，腎功能異常，經(jīng)腎臟病理證實(shí)[6]。根據(jù)腎活檢及系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)(systemic lupus erythematosus disease active index，SLEDAI)，將38例狼瘡性腎炎患者分為狼瘡性腎炎活動(dòng)期(SLEDAI>9)和狼瘡性腎炎靜止期(SLEDAI≤9)，其中狼瘡性腎炎活動(dòng)期有17例，狼瘡性腎炎靜止期有21例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①本研究病例均符合腎臟活檢穿刺指征，經(jīng)腎活檢穿刺檢驗(yàn)后，確診為狼瘡性腎炎；②未經(jīng)治療，或近1個(gè)月內(nèi)未使用免疫抑制劑。另選取同期來醫(yī)院體檢的19例健康受試者作為正常對照組。所有入選者均排除伴有呼吸道、消化道等其他感染，伴有腎臟其他病變，有腫瘤病史或有呼吸系統(tǒng)或血液系統(tǒng)等其他自身免疫性疾病者。

2.主要試劑及儀器：白細(xì)胞介素-17、白細(xì)胞介素-6、ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒購自上海賽默科技生物發(fā)展有限公司；LOGIQ400 B超儀購自美國GE 公司；16G自動(dòng)活檢槍購自美國BARD公司；HITACHI7100全自動(dòng)生化分析儀購自日本日立公司；3K15超低溫離心機(jī)購自德國Sigma公司。

3.方法：(1)血清IL-17、IL-6表達(dá)水平檢測，采集受試者空腹靜脈血3～5ml置于無菌的EDTA抗凝管中，將采集的靜脈血置于超低溫離心機(jī)離心，3000r/min，5min，收集上清液并置于 -80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫珽LISA法分別用IL-17、IL-6酶聯(lián)免疫試劑盒檢測血清中IL-17、IL-6的表達(dá)水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。顯色后用酶標(biāo)儀讀取450nm下的吸光度值。(2)疾病活動(dòng)度評估：①SLEDAI評分：參照Gladman等[7]制定的標(biāo)準(zhǔn)對3組受試者9個(gè)系統(tǒng)和24項(xiàng)臨床指標(biāo)進(jìn)行評估，其中0～4分為基本無活動(dòng)，5～9分為輕度活動(dòng)，10～14分為中度活動(dòng)，≥15分為重度活動(dòng)；②腎臟活檢穿刺及病理檢查[8]：在B超引導(dǎo)下實(shí)施腎活檢術(shù)，采用16G腎活檢穿刺針取兩條腎組織，置于4%的甲醛溶液中固定1h，將腎組織制作組織切片，經(jīng)蘇木素-伊紅染色后鏡檢。根據(jù)2003年ISN/RPS的分型標(biāo)準(zhǔn)及狼瘡病理活動(dòng)指數(shù)(activity index，AI)和慢性指數(shù)(chronic index，CI)進(jìn)行病理分型。

結(jié) 果

1.3組受試者臨床資料的比較:正常對照組、狼瘡性腎炎靜止期組和活動(dòng)期組受試者的年齡、性別、病程以及BMI指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。狼瘡性腎炎靜止期組和活動(dòng)期組受試者血尿酸、尿蛋白、血肌酐、發(fā)熱、SLEDAI評分以及血清中Hs-CRP、ESR、透明質(zhì)酸酶(HA)、C1q抗體、抗ds-DNA抗體顯著高于正常對照組(P<0.05)，狼瘡性腎炎活動(dòng)期組上述各項(xiàng)指標(biāo)顯著高于靜止期組(P<0.05)。狼瘡性腎炎靜止期組和活動(dòng)期組受試者血清中補(bǔ)體含量顯著低于正常對照組(P<0.05)，活動(dòng)期組也顯著低于靜止期組(P<0.05)，詳見表1。

2.3組受試者血清中IL-17、IL-6的表達(dá)水平:狼瘡性腎炎靜止期組、活動(dòng)期組IL-17、IL-6的表達(dá)水平顯著高于正常對照組(P<0.05)，狼瘡性腎炎活動(dòng)期組IL-17、IL-6的表達(dá)水平顯著高于靜止期組(P<0.05)，詳見表2。

3.狼瘡性腎炎患者AI和CI比較：狼瘡性腎炎活動(dòng)期組AI、CI顯著高于靜止期組(P<0.05)，詳見表3。

4.狼瘡性腎炎患者IL-17與IL-6表達(dá)水平的相關(guān)性:狼瘡性腎炎患者血清中IL-17與IL-6的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.647,P<0.05)，詳見圖1。

5.狼瘡性腎炎患者IL-17和IL-6與疾病活動(dòng)度指標(biāo)的相關(guān)性：狼瘡性腎炎患者血清中IL-17、IL-6與SLEDAI評分、AI、CI均呈正相關(guān)(P<0.05)，詳見表4。

討 論

狼瘡性腎炎是一種常見的由環(huán)境、遺傳、感染和免疫等多因素參與的自身免疫性疾病[9]。臨床上常以血尿、尿酸、24h尿蛋白、血肌酐以及血清中Hs-CRP、ESR、HA的含量作為狼瘡性腎炎腎臟的改變評判標(biāo)準(zhǔn)，但是由于狼瘡性腎炎的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，上述指標(biāo)在臨床應(yīng)用中仍有欠缺。近期有研究認(rèn)為，白細(xì)胞介素是一類細(xì)胞免疫因子，在生物體的免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著重要作用，其中，IL-17和IL-6在狼瘡性腎炎的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[10]。

表1 3組受試者一般臨床資料的比較

與正常對照組比較，*P<0.05；與狼瘡性腎炎靜止期組比較，#P<0.05

表2 3組受試者血清中IL-17、IL-6的表達(dá)情況

與正常對照組比較，*P<0.05；與狼瘡性腎炎靜止期組比較，#P<0.05

表3 狼瘡性腎炎患者AI和CI比較

與狼瘡性腎炎靜止期組比較，*P<0. 05

圖1 狼瘡性腎炎患者血清中IL-17與IL-6相關(guān)性

表4 狼瘡性腎炎患者血清中IL-17和IL-6與疾病活動(dòng)度指標(biāo)的相關(guān)性分析

IL-17是導(dǎo)致自身免疫性疾病發(fā)病的主要原因，其不僅能促進(jìn)炎性反應(yīng)，誘導(dǎo)趨化因子、基質(zhì)金屬蛋白酶和炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，其還可通過誘導(dǎo)上皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞分泌CCL20、CXCL1等趨化因子，最終引起炎性細(xì)胞的浸潤和組織破壞。本研究結(jié)果表明，IL-17在狼瘡性腎炎患者血清中表達(dá)水平顯著高于正常對照組，同時(shí)活動(dòng)期組IL-17表達(dá)水平也明顯高于靜止期組，另外狼瘡性腎炎患者血清中IL-17與SLEDAI評分、AI、CI呈顯著正相關(guān)，與何援軍等[11]的研究結(jié)果相符，根據(jù)以上結(jié)果推測可能由于IL-17可導(dǎo)致上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞分泌細(xì)胞因子或其他免疫介質(zhì)，從而導(dǎo)致炎性細(xì)胞到腎臟等靶器官，因此認(rèn)為IL-17與狼瘡性腎炎免疫功能紊亂有密切關(guān)系，可作為急性炎癥啟動(dòng)因素參與狼瘡性腎炎患者的免疫發(fā)病過程。

Il-6屬于具有多種生物學(xué)活性的多效細(xì)胞因子，在自身免疫性疾病的炎性反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)中起著重要的作用，同時(shí)也具有促進(jìn)免疫球蛋白合成等特點(diǎn)。目前多數(shù)學(xué)者研究證實(shí)，SLE的發(fā)病及疾病活動(dòng)程度與IL-6分泌異常有密切關(guān)系，IL-6作為細(xì)胞生長因子之一，其不僅能夠誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞增生，加重膜性增生性腎小球腎炎，同時(shí)也伴有腎小球系膜MHCⅡ類抗原和腎小球細(xì)胞黏附分子表達(dá)地顯著升高[12～14]。

本研究結(jié)果表明，狼瘡性腎炎患者IL-6表達(dá)水平顯著高于健康對照組，同時(shí)狼瘡性腎炎活動(dòng)期組水平顯著高于靜止期，狼瘡性腎炎患者血清中IL-6與SLEDAI評分、AI、CI呈顯著正相關(guān)，推測IL-6可能通過刺激腎小球系膜細(xì)胞增生、激活多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)從而導(dǎo)致狼瘡性腎炎的發(fā)生，提示IL-6細(xì)胞可能參與狼瘡性腎炎的發(fā)病及病情的進(jìn)展與活動(dòng)，可作為狼瘡性腎炎診斷指標(biāo)之一。本研究結(jié)果顯示，IL-17與IL-6在狼瘡性腎炎患者血清中表達(dá)水平呈正相關(guān)，二者均是狼瘡性腎炎發(fā)生、發(fā)展的重要因素，且與疾病活動(dòng)密切相關(guān)，推測IL-17與IL-6具有相互作用關(guān)系，本研究結(jié)果與Rastin等[15]一致。

綜上所述，狼瘡性腎炎患者血清中IL-17和IL-6的表達(dá)水平均高于正常對照組，且血清中IL-17和IL-6與疾病活動(dòng)度指標(biāo)SLEDAI評分、AI、CI呈正相關(guān)，認(rèn)為IL-17和IL-6可作為評價(jià)狼瘡性腎炎疾病活動(dòng)度的輔助性指標(biāo)。但是由于本研究僅對狼瘡性腎炎患者血清IL-17、IL-6與疾病活動(dòng)指標(biāo)和病情程度進(jìn)行相關(guān)性分析，未深入分析二者與狼瘡性腎炎的關(guān)系，同時(shí)由于收集臨床資料有限，因此在今后的研究中還有待于進(jìn)一步完善相關(guān)資料。