P53在浸潤性乳腺癌中的表達及意義

袁明明，任曉燕，陶玉梅，陳婷婷，蔡南南，金曉霞，衛(wèi)穎澤，何松△

乳腺癌是全球女性最常見的癌癥之一，占所有女性癌癥的25%，發(fā)達國家的乳腺癌發(fā)病率較高，且較不發(fā)達國家的相對死亡率較高［1］。2011年St.Gallen國際乳腺癌會議將乳腺癌分為五種分子分型：Luminal A型、人類表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER-2）陰 性Luminal B型、HER-2陽性Luminal B型、HER-2過表達型、三陰型，近年來此分型系統(tǒng)進一步完善，并根據(jù)不同分子類型推薦不同的治療方案［2］。P53作為迄今發(fā)現(xiàn)與人類癌癥最相關(guān)的抑癌基因之一，其基因突變存在于50%的人類癌癥中，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［3］。本研究通過回顧性分析709例浸潤性乳腺癌患者資料，分析P53的表達及其與分子分型、組織學類型、分級及雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、HER-2等生物學標志物之間的關(guān)系，以期對浸潤性乳腺癌的臨床結(jié)果預(yù)測及個體化治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 收集南通市腫瘤醫(yī)院病理科2015年1月—2017年12月存檔的浸潤性乳腺癌標本709例，所有病例術(shù)前均未行放療、化療等任何治療。本組病例均為女性，年齡22～89歲，中位年齡54歲。所用P53（DO-7/鼠單克隆抗體，稀釋度1∶600）、ER（EP1/兔單克隆抗體，稀釋度1∶400）及PR（EP2/兔單克隆抗體，稀釋度1∶1 200）一抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，HER-2（A0485/兔多克隆抗體，稀釋度1∶800）、Ki-67（MIB-1/鼠單克隆抗體，稀釋度 1∶600）及EnVision試劑盒購自DAKO公司。

1.2 免疫組織化學染色 標本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm 厚切片。P53、ER、PR、HER-2及 Ki-67均在DAKO Omnis全自動免疫組化染色儀上采用EnVision（二步法）完成，操作步驟按照操作手冊及試劑盒說明書進行。Ki-67使用檸檬酸鹽修復(fù)液修復(fù)抗原，其余指標均采用EDTA修復(fù)。所有標本均設(shè)陽性和陰性對照。ER、PR以正常子宮內(nèi)膜組織作陽性對照，P53、HER-2以乳腺癌已知陽性組織作對照，Ki-67以正常闌尾組織作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。子宮內(nèi)膜組織取自于子宮切除術(shù)患者標本，闌尾組織取自闌尾切除術(shù)患者標本，取材步驟參照《臨床技術(shù)操作規(guī)范病理學分冊》。

1.3 結(jié)果判定 所有標本在浸潤性乳腺癌區(qū)域出現(xiàn)定位明確的棕黃色或棕褐色顆粒判定為特異性陽性反應(yīng)。P53、ER、PR、Ki-67陽性定位在細胞核，HER-2陽性定位在細胞膜。P53參考Allred［4］判定標準，根據(jù)染色強度計分：無著色為0分，弱為1分，中等為2分，強為3分。根據(jù)陽性細胞百分比計分：＜1%為1分，1%～10%為2分，11%～35%為3分，36%～65%為4分，＞65%為5分。兩項分值相加的結(jié)果為最終評分：0～5分為低表達組，6～8分為高表達組。ER、PR、HER-2的免疫組化染色評分參照2013年美國臨床腫瘤學會（ASCO）/美國病理學家學會（CAP）推薦的ER、PR、HER-2評估的更新指南，ER、PR以1%作為陽性表達的臨界值，HER-2以＞10%浸潤癌細胞呈現(xiàn)強而完整的細胞膜染色定義為陽性（3+），0和1+定義為陰性反應(yīng)。HER-2免疫組化評分為2+的標本均再行熒光原位雜交（FISH）檢測有無HER-2基因擴增，分別納入HER-2陽性組和陰性組。

1.4 分型標準 組織學分型標準及組織學分級參照2012年乳腺腫瘤WHO分類，分子分型標準參照St.Gallen國際乳腺癌會議共識［2］，采用免疫組織化學替代分型，見表1。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。分類變量組間比較采用χ2檢驗，兩變量相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

Tab.1 The St.Gallen international expert consensus of classification subgroups of breast cancer表1 St.Gallen國際乳腺癌會議分子分型共識

2 結(jié)果

2.1 P53、ER、PR、HER-2及Ki-67在乳腺癌中的表達 709例浸潤性乳腺癌中P53高表達者占26.8%（190/709）（圖1A），低表達者占73.2%（519/709）（圖1B）。ER陽性率58.3%（413/709）（圖1C）。PR陽性率 52.5%（372/709）（圖1D）。HER-2陽性者占25.7%（182/709）（圖1E）。Ki-67增殖指數(shù)≤30%者占 70.5%（500/709），＞30% 者占 29.5%（209/709）（圖1F）。

Fig.1 Expressions of P53,ER,PR,HER-2 and Ki-67 in invasive breast cancer(×200)圖1 浸潤性乳腺癌中P53、ER、PR、HER-2和Ki-67的表達（×200）

2.2 P53表達與臨床病理特征的關(guān)系 依據(jù)免疫組化結(jié)果對709例浸潤性乳腺癌病例進行分子分型：Luminal A 型者占 27.8%（197/709），HER-2陰性Luminal B型者占 26.7%（189/709），HER-2陽性Luminal B型者占9.0%（64/709）；HER-2過表達型者占16.4%（116/709）；三陰型者占20.2%（143/709）。組織學分類中，非特殊型浸潤性癌占86.3%（612/709），浸潤性小葉癌占3.4%（24/709），伴髓樣特征的癌占3.4%（24/709），黏液性癌占1.8%（13/709），其他特殊亞型浸潤性癌占5.1%（36/709）。對612例非特殊型浸潤性癌進行組織學分級，其中Ⅰ級者占7.0%（43/612），Ⅱ級者占 56.5%（346/612），Ⅲ級者占36.4%（223/612）。P53高表達者在Luminal A型乳腺癌中占6.1%（12/197），在HER-2陰性Luminal B型乳腺癌中占18.0%（34/189），在HER-2陽性Luminal B型乳腺癌中占39.1%（25/64），在HER-2過表達型乳腺癌中占50.0%（58/116），在三陰型乳腺癌中占42.7%（61/143），P53在不同分子分型乳腺癌中的表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。P53在伴有髓樣特征的乳腺癌中表達率高于其他組織學類型（P＜0.05）。組織學分級越高，P53表達率越高（P＜0.05）。P53在不同年齡分組乳腺癌中表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。具體結(jié)果見表2。

Tab.2 Correlation of the expression of P53 with the clinicopathologic parameters of breast cancer表2 P53表達與臨床病理特征的關(guān)系 例（%）

2.3 P53表達與ER、PR、HER-2及Ki-67表達的相關(guān)性分析 P53在ER陰性組、PR陰性組、HER-2陽性組及Ki-67高表達組中表達率較高（均P＜0.05）。相關(guān)性分析顯示，P53與ER、PR、HER-2及Ki-67在乳腺癌中的表達存在關(guān)聯(lián)（均P＜0.05），見表3。

Tab.3 Correlation of the expression of P53 with ER,PR,HER-2 and Ki-67 of breast cancer表3 P53與ER、PR、HER-2及Ki-67表達的相關(guān)性例（%）

3 討論

P53基因位于人類染色體17p13.1，被喻為“基因組的守護者”，是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在DNA損傷或致癌信號傳導(dǎo)后穩(wěn)定于細胞核內(nèi)，參與調(diào)節(jié)細胞周期停滯、細胞凋亡、DNA修復(fù)等，防止癌癥的發(fā)生發(fā)展［5］。P53基因分為野生型和突變型兩種，當P53發(fā)生突變后，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄下游靶基因，導(dǎo)致其功能改變或喪失，產(chǎn)生致癌基因的功能，從而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展［6］。采用免疫組化法檢測的P53蛋白為突變型P53。

3.1 浸潤性乳腺癌中P53表達與臨床病理特征的相關(guān)性 已有研究表明，P53基因突變與浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及不良預(yù)后有關(guān)［7］；表達P53蛋白的浸潤性乳腺癌具有較強的增殖活性，患者易發(fā)生復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移［8］。我們對709例浸潤性乳腺癌進行了P53蛋白表達分析，P53高表達者占26.8%。在Luminal A型、HER-2陰性Luminal B型、HER-2陽性Luminal B型、HER-2過表達型及三陰型浸潤性乳腺癌中的高表達率分別為6.1%、18.0%、39.1%、50.0%、42.7%，P53蛋白的高表達多見于增殖活性高、侵襲性強的HER-2過表達型及三陰型乳腺癌中，P53的表達與浸潤性乳腺癌分子分型密切相關(guān)。P53的表達還與乳腺癌的組織學類型與組織學分級有關(guān)，即伴有髓樣特征的癌P53表達率較高，黏液性癌表達率最低；分級高（Ⅲ級）的非特殊類型浸潤性癌P53表達率高，而分級低（Ⅰ級）者表達率低，這些結(jié)果與國內(nèi)外相關(guān)報道一致［9］，說明P53蛋白表達在浸潤性乳腺癌發(fā)展、侵襲過程中扮演了重要角色，是浸潤性乳腺癌預(yù)后不良的參考指標［10］。本研究還發(fā)現(xiàn)，P53的表達與ER、PR、HER-2及Ki-67表達有相關(guān)，提示P53基因在浸潤性乳腺癌的發(fā)生機制方面可能發(fā)揮了重要作用，值得進一步研究。

3.2 P53與乳腺癌治療新進展 近年來，有關(guān)P53基因在浸潤性乳腺癌臨床用藥方面的研究也取得了可喜的進展。有研究發(fā)現(xiàn)，浸潤性乳腺癌常用的化療藥物蒽環(huán)類藥物的敏感性及耐藥性與P53基因突變有關(guān)。對P53信號通路的干擾可能是蒽環(huán)類藥物化療耐藥的關(guān)鍵因素［11］。P53基因突變與蒽環(huán)類藥物新輔助化療治療方案的療效密切相關(guān)［12］。P53作為靶點的靶向藥物，例如小分子復(fù)合物YK-3-237［13］、P53 活化劑 NSC146109［14］、新 型 抗 HDM2（human double minute 2）靶向劑Nutlin-3a［15］等，均已取得了階段性研究成果，部分已進入臨床試驗階段，或許將來能對三陰型乳腺癌的治療帶來新的希望［16］。

綜上所述，P53蛋白高表達多見于高增殖活性及高侵襲性的浸潤性乳腺癌中，并與乳腺癌的組織學分型及分級密切相關(guān)。P53表達參與了浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，并可作為臨床判斷預(yù)后和選擇化療藥物的參考指標。靶向P53有望成為浸潤性乳腺癌治療的新途徑。