天母降壓片在小鼠模型中的鎮痛、鎮靜作用研究

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高血壓是一種病程長、病情復雜、伴隨癥狀多的慢性疾病[1-2]。不僅僅是高血壓本身，高血壓所伴隨的并發癥狀，在疾病過程中，亦給病人帶來了不可忽視的負擔[3]，伴疼痛[4]、煩躁[5]、焦慮[6]等情緒，常常是高血壓伴隨的主要癥狀，而這些癥狀的改善，在現有的治療中往往被忽略，但它都極大程度地影響著病人的生活質量。

根據中醫治療高血壓的經驗，高血壓臨床辨證最多的是陰虛陽亢型，常伴有身體多部位疼痛和精神焦慮的癥狀[7-9]。天母降壓片由天麻、珍珠母、鉤藤、菊花、桑葚5 味中藥組成，其中君藥天麻具有平肝潛陽、息風止痙的功效[10-11]，臨床上常用于肝陽上亢之頭痛、眩暈等癥，現代藥理研究證實天麻能擴張血管，緩解神經肌肉的緊張；臣藥珍珠母亦具有平肝潛陽之功，與天麻相配合，能增強降壓功效，提高對高血壓病相關癥狀的治療效果[12]；方中鉤藤、菊花等其他成分的有關臨床和基礎研究報道中亦發現有鎮痛、鎮靜的作用[13-14]。然而，關于天母降壓片全方鎮痛、鎮靜作用的有關研究報道較少。本研究擬通過醋酸扭體實驗、熱板法實驗、熱刺痛實驗來評價天母降壓片的鎮痛作用；通過懸尾實驗評價天母降壓片的鎮靜作用。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 天母降壓片粉末[華潤三九(棗莊)藥業有限公司，產品批號：201606]；阿司匹林腸溶片(德國，拜耳醫藥保健有限公司，產品批號：BJ19030)；地西泮片(山東信誼制藥有限公司，產品批號：160601)；醋酸(國藥集團化學試劑有限公司)。

1.2 儀器 智能熱板儀：RB-200，成都泰盟軟件有限公司；熱刺痛儀：PL-200，成都泰盟軟件有限公司；懸尾儀，TST-100，成都泰盟軟件有限公司。

1.3 動物 ICR雄性小鼠，SPF級，體重18～22 g，共170只，合格證號11400700232729，許可證號SCXK(京)2016-0011。

1.4 醋酸扭體實驗 動物分5組：模型組(M組， 生理鹽水，8只)；阿司匹林腸溶片組[A組，45 mg/(kg·d)，8只]；天母降壓片低劑量組[TL組，0.27 g/(kg·d)，8只]；天母降壓片中劑量組[TM組，0.54 g/(kg·d)，8只]；天母降壓片高劑量組[TH組，1.08 g/(kg·d)，8只]。生理鹽水、阿司匹林腸溶片和天母降壓片均灌胃給藥。小鼠連續給藥3 d后，于第3 天給藥30 min后，腹腔注射1%醋酸，注射后5 min，觀察小鼠15 min內的扭體次數，并計算扭體反應的抑制率，評價鎮痛效果。

1.5 輻射熱刺激實驗 實驗前，將小鼠置于熱刺痛儀的反應容器中，待小鼠平靜之后，將紅外燈對準小鼠的尾部或者后掌部，小鼠產生應激反應后，記錄從照射開始到甩尾反應的潛伏期(tail flick latency， TFL)作為痛閾基礎值(基礎TFL)，同時剔除反應時間小于2 s或者大于10 s的小鼠。24 h后給藥，小鼠給藥后30 min，將小鼠置于熱刺痛儀的反應容器中，待小鼠平靜之后，將紅外燈對準小鼠的尾部或者后掌部，小鼠產生應激反應后，記錄從照射開始到甩尾反應的潛伏期作為給藥后TFL，并計算小鼠給藥后的痛閾提高率，閾值提高率按照按如下公式計算，評價藥物鎮痛強度。

痛閾提高率(%)=[(給藥后TFL —基礎TFL)/基礎TFL]×100%

1.6 熱板實驗 實驗前，提前將熱板儀的溫度設定為53 ℃，待溫度恒定后，將小鼠置于熱板儀中，記錄小鼠第一次舔后足時間及之后60 s內的舔足次數，同時剔除反應潛伏期大于60 s的小鼠。24 h后給藥，小鼠給藥后30 min，將小鼠置于恒溫53 ℃的熱板儀中，記錄第一次舔后足時間和60 s內的舔足次數，并進行統計。

1.7 懸尾實驗 實驗前，固定小鼠尾部使其頭向下懸掛，利用圖像跟蹤系統記錄5 min內小鼠的不動時間，作為基礎檢測值。24 h后給藥，并連續給藥3 d，于第3天給藥后30 min測定小鼠的不動時間，固定小鼠尾部使其頭向下懸掛，利用系統記錄5 min內小鼠的活動時間和不動時間，并對小鼠的不動時間進行統計。

2 結 果

2.1 對ICR小鼠扭體次數的影響 小鼠在腹腔注射醋酸后，模型組扭體次數顯著升高。與模型組相比，阿司匹林腸溶片組對模型小鼠扭體次數和扭體次數的抑制率均有顯著改善(P<0.01)；天母降壓片各劑量組均能顯著降低扭體次數(P<0.01)，同時，也能顯著提高醋酸扭體次數的抑制率(P<0.01)。詳見圖1、圖2。

與M組相比，*P<0.01

與M組相比，*P<0.01

2.2 對ICR小鼠甩尾反應潛伏期的影響 與模型組相比，陽性藥阿司匹林能顯著提升ICR小鼠甩尾反應的潛伏期(P<0.01)，提升小鼠的痛閾值(P<0.01)；天母降壓片各劑量組均能顯著提高小鼠的甩尾反應潛伏期(P<0.01)，提升小鼠的痛閾值(P<0.01)。詳見圖3、圖4。

與M組相比，*P<0.01

與M組相比，*P<0.01

圖4天母降壓片對小鼠痛閾提高率的影響

2.3 對ICR小鼠舔足時間、舔足次數的影響 與模型組小鼠相比，陽性藥阿司匹林腸溶片可延長組內小鼠的第一次舔足時間(P<0.05)，對于60 s內的舔足次數，沒有改善作用；給予天母降壓片各劑量組均能顯著延長ICR小鼠的第一次舔足時間(P<0.01)，天母降壓片高劑量組顯著降低小鼠60 s內的舔足次數(P<0.01)，中劑量組能明顯降低小鼠的舔足次數(P<0.05)。詳見圖5、圖6。

與M組相比，*P<0.05

圖5天母降壓片對小鼠第一次舔足時間的影響

與M組相比，*P<0.05，**P<0.01

2.4 對ICR小鼠不動時間的影響 與模型組相比，陽性藥地西泮片能顯著升高小鼠的不動時間(P<0.01)；天母降壓片各劑量組均能明顯提高小鼠的不動時間(P<0.05)。詳見圖7。

與M組相比，*P<0.05，**P<0.01

3 討 論

在高血壓的病理進程中，疼痛是病人最易感受，但在治療上往往被忽視的一個伴隨癥狀，很大程度上影響著病人的生活和生存質量。疼痛根據痛覺感受器發生部位的不同，可以分為外周性疼痛與中樞性疼痛[15]，具有疼痛緩解作用的藥物也可分為中樞性鎮痛藥和外周性鎮痛藥[16]。本研究主要采用醋酸扭體實驗[17]、熱輻射甩尾實驗[18]、熱板實驗[19]3方法，檢測天母降壓片的鎮痛作用效果及作用機制。

醋酸扭體實驗因為其方法簡便、靈敏、重現性好，并且沒有明顯的中樞性或外周性篩選區分的特點，常被用作鎮痛藥物的初篩研究中。本實驗結果顯示，天母降壓片各劑量組均具有較好的鎮痛作用。

為了進一步確定天母降壓片的鎮痛機制，本實驗進一步進行熱輻射實驗和熱板實驗。熱輻射甩尾實驗是一種將強光照射到動物尾部，一段時間后，動物因熱刺痛而產生逃跑反應或者避害甩尾反應的實驗方法。因為逃跑反應是由大腦所控制的復雜生物現象，甩尾是脊柱反射調節的現象，所以，熱輻射甩尾實驗常被用作評價效價較強，并且作用機制可能涉及中樞鎮痛的鎮痛藥物藥效評價。本實驗結果顯示，天母降壓片各組能夠顯著提高動物的痛閾值，并且可能是由于其對神經中樞突觸信號的阻斷而使動物痛閾值升高所導致的。同時，熱板實驗也對天母降壓片可能作用于中樞鎮痛給予驗證。熱板實驗是一種將動物放置于熱板上，動物在一段時間后會舔足以降溫的實驗方法。在該實驗中，將動物放置于熱板上到動物出現第一次舔足的動作時間間隔，被定義為痛閾；而在規定時間內舔足次數的多少，反應動物對熱板刺激所帶來疼痛的敏感程度。因為舔足反應需要由中樞神經系統對動物的行為做出協調性的指示，所以這一模型常用作效價較強的中樞鎮痛藥物的評價研究中。本實驗中，天母降壓片各劑量組能顯著增加第一次舔足時間，提高動物的痛閾值；天母降壓片各劑量組能明顯提高實驗動物對熱刺激的耐受程度。其作用機制與天母降壓片的中樞鎮痛作用有關。

本實驗采用懸尾實驗檢測天母降壓片的鎮靜作用。在連續給藥3 d后，天母降壓片可顯著延長不動時間，增加不動時間的延長時間，提示天母降壓片能夠對高血壓病理進程中的煩躁現象有一定程度的改善作用。

天母降壓片具有較為顯著的鎮靜和鎮痛作用，提示天母降壓片能在降壓的同時，通過改善病人的疼痛和精神狀態，起到對高血壓的綜合治療作用。