內質網應激在壓力性負荷高血壓大鼠血管重構中的作用

顧靜 趙英 李海龍 郭超 吳紅彥 鐘靈 李龍 張正富 董轉麗 代潤景 鞏璐

(甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 730000 )

高血壓是病因機制復雜交錯的心血管綜合征，其發生發展過程中伴隨著血管結構的改變，但具體機制不清。內質網應激(ERS)是一種亞細胞層面的反應，對細胞具有雙向調節作用，早期適度的 ERS 可誘導產生內質網(ER)分子伴侶如葡萄糖調節蛋白(GRP)78和GRP94、鈣網蛋白(CRT)等，促進內質網功能的恢復〔1〕，具有細胞保護作用；隨著時間的延長，過強的ERS通過誘導凋亡相關分子CHOP的表達和caspase-12的活化而導致細胞凋亡〔2，3〕。但ERS是否影響高血壓發生發展中血管結構的變化鮮有報道。本研究檢測ERS的保護性和促凋亡分子在血壓發展不同時期的表達情況，同時檢測血管平滑肌細胞(VSMC)凋亡情況。

1 材料和方法

1.1動物、試劑 SPF級雄性Wistar大鼠90只，體重(200±10)g，來源于甘肅中醫藥大學科研實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK(甘)2011-0001。大鼠GAPDH、GRP78和CHOP等抗體購于Santa Cruz公司；TUNEL 熒光檢測凋亡試劑盒、RIPA裂解液、Tween-20、PMSF、TRIS等購自北京索萊寶科技有限公司；多聚甲醛購自天津科化。

1.2實驗方法

1.2.1腹主動脈狹窄術建立高血壓大鼠模型〔4，5〕術前禁食，水合氯醛麻醉，仰臥位固定，無菌消毒。肋弓下緣0.5 cm、腹正中線旁左側0.5 cm處行2.0～2.5 cm 縱行切口，逐層分離組織穿透腹膜進入腹腔，鈍性分離并縮窄腹主動脈〔4〕，緩慢抽離針頭，防止損傷血管，逐層縫合傷口并消毒。假手術組僅分離腹主動脈。術后肌注頭孢噻吩鈉預防感染。

1.2.2動物分組 實驗動物分為假手術(對照)組和手術(模型)組，按術后時間兩組又分為 1 w、2 w、4 w、6 w 4個亞組(各亞組10～12只動物)。……