布拉酵母菌對潰瘍性結腸炎大鼠核因子-κB及腫瘤壞死因子-α表達的影響

顏玉 任秀英 鮑秀琦 姜威 羅蘭 鄭強 王雪 薛勇

(佳木斯大學附屬第一醫院消化一科，黑龍江 佳木斯 154002)

潰瘍性結腸炎(UC)是一種常累及直腸和結腸的慢性炎性疾病。研究顯示其發病與宿主遺傳易感性與免疫應答及腸黏膜免疫識別失調關系密切〔1〕，腫瘤壞死因子(TNF)-α是炎癥性腸病發病過程中關系最為密切的促炎性因子之一，動態監測TNF-α的水平變化對UC的臨床診斷、分期、疾病活動情況及嚴重程度有重要臨床意義。核因子(NF)-κB在細胞因子的釋放與轉錄的過程中起重要調控作用。本研究觀察布拉酵母菌(億活)治療UC的效果。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器 億活(布拉酵母菌散，法國百科達制藥廠)，美沙拉秦(莎爾福，Losan Pharma GmbH，德國)，兔抗鼠NF-κB(艾博抗貿易有限公司)，TNF-α酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司)，免疫組化試劑盒(齊一生物科技有限公司)。Leica RM2265半薄全自動輪轉式切片機，SAF-680T酶標儀(上海巴玖實業有限公司)，XSP-22CE顯微鏡(上海比目儀器有限公司)。

1.2實驗動物及分組 選用清潔級健康6～8周齡Wistar大鼠30只，雌雄各半，體質量(250±50)g，由佳木斯大學實驗動物中心提供，飼養條件均適宜，常規適應性飼養1 w后按照隨機分組原則分為5組：對照組、模型組、莎爾福組、億活組、聯合治療組，每組各6只。

1.3UC大鼠動物模型及治療組模型制備 30只大鼠禁食24 h，無水乙醚麻醉。①對照組：大鼠2 ml生理鹽水灌腸。②模型組：大鼠稱重，仰臥位以2.4%水合氯醛1.2～1.4 ml/100 g腹腔注射，麻醉后，用石蠟油潤滑經肛門輕緩插入輸液管至距肛門8 cm處，100 mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)加入相同體積50%乙醇注入大鼠結腸內，隨后注入0.5 ml空氣，處理后的大鼠頭向下45°傾斜放置1 min，稍后保持平躺自然清醒，按此方法每7 d重復灌腸造模，持續至第8周〔2〕。③莎爾福組：模型大鼠用5%乙酸1.0 ml灌腸2 d后，用莎爾福溶液2.5 ml 0.5 g/(kg·d)灌胃1次。④億活組：模型大鼠用5%乙酸1.0 ml灌腸2 d后，用億活溶液2.5 ml 0.1 g/(kg·d)灌胃1次。⑤聯合治療組：模型大鼠用5%乙酸1.0 ml灌腸2 d后，用莎爾福溶液2.5 ml 5 g/(kg·d)和億活溶液2.5 ml 0.1 g/(kg·d)灌胃1次。各組大鼠經相應處理7 d后禁食不禁水24 h，麻醉取全血分離血清后處死大鼠剖開腹腔，分離結腸組織，生理鹽水反復輕柔沖洗干凈，肉眼觀察，選擇結腸病變最嚴重部位結腸組織，置于甲醛溶液中固定后常規石蠟包埋并切片待檢。

1.4ELISA檢測 按照ELISA試劑盒方法檢測NF-κB及TNF-α水平。

1.5統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1各組大鼠一般狀況比較 對照組：大鼠活動自如，毛發光澤，反應機敏，未見便血，食欲可，體重稍有增加；模型組：大鼠精神萎靡、懶動，毛發無光澤，進食差，消瘦，腹瀉、溏便、膿血便；莎爾福組：大鼠狀況逐漸好轉，溏便、膿血便稍有緩解，進食量漸增，體重稍有恢復；億活組：大鼠狀況好轉，溏便、膿血便明顯減輕，進食量逐漸增加，體重恢復；聯合治療組：大鼠活動、毛發、飲食、溏便、膿血便明顯改善，體重稍有增加。

2.2各組NF-κB與TNF-α水平變化比較 與對照組比較，模型組、莎爾福組、億活組NF-κB及TNF-α水平均顯著升高(均P<0.05)；與模型組比較，莎爾福組、億活組、聯合治療組NF-κB及TNF-α水平顯著降低(均P<0.05)。莎爾福組及億活組NF-κB、TNF-α水平均顯著高于聯合治療組(均P<0.05)。見表1。

表1 各組NF-κB及TNF-α水平變化比較

與對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05；與聯合治療組比較：3)P<0.05

3 討 論

NF-κB在細胞因子的釋放與轉錄過程中起重要調控作用，NF-κB處于炎癥調節的中樞，活化的NF-κB導致細胞因子表達增加從而引起腸道炎癥反應，致使結腸黏膜損傷。NF-κB通過調控環氧合酶(COX)-2表達介導炎癥反應〔3〕。TNF-α具有直接殺傷或抑制腫瘤細胞的作用，TNF-α主要通過促進釋放血小板活化因子生成氧自由基和白三烯，促進分泌蛋白酶與刺激前列腺素E2的釋放及誘導一氧化氮合成，上調T淋巴細胞與嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞數目引起腸黏膜損傷〔4〕。

本研究表明NF-κB在UC的發病中起重要作用，能夠引起腸道炎癥，NF-κB能夠調節各種炎癥因子與細胞因子及趨化因子轉錄因子的水平，NF-κB水平升高導致細胞因子表達增加從而引起腸道炎癥反應導致腸黏膜損傷；TNF-α水平升高，促進氧自由基和白三烯的生成，進一步加重了腸黏膜損傷，導致黏膜充血，水腫及糜爛。

菌群紊亂引起腸道固有免疫異常激活可致UC，腸道黏膜完整性的破壞及細菌屏障功能紊亂在UC患者中表現尤為明顯。有研究學者提出用益生菌及其產物來治療UC取得了一定的臨床治療效果〔5〕。更有學者提出糞菌移植治療炎癥性腸病〔6〕。

本研究結果證實億活和莎爾福對UC治療均有效，兩藥聯合治療效果較單藥治療效果更優。綜合分析億活對UC的治療作用機制可能有以下幾種：① 抑制病原微生物生長，提高定植抗力，致病菌定植遭阻止。②通過布拉菌分泌的蛋白酶可水解由梭狀芽孢桿菌產生的毒素，促進修復損傷上皮，上皮緊密連接增強，腸黏膜屏障穩定，細菌移位阻止。③調節抗炎與促炎因子平衡，促進腸道恢復免疫功能。