PCDH10在胃癌組織中的表達特點及其與患者臨床特征、預后的關系

田浩，馬翾，高峽

宜昌市第二人民醫院（腫瘤醫院）腫瘤外科，湖北 宜昌 4430000

近年胃癌的發病率明顯升高，流行病學研究證實，中國部分地區胃癌的發病率可達（272～383）/10萬人[1]。臨床上胃癌的發生可以導致患者致殘率和病死率升高，導致患者不良臨床結局的發生[2]。不同的腫瘤相關蛋白均可以促進胃癌的發生，影響腫瘤細胞的生物學特征，導致腫瘤細胞的浸潤、增殖及黏附能力的改變。原鈣粘蛋白（protocadherin 10，PCDH10）表達水平的改變，可以影響下游腫瘤信號通路的激活，提高p53抑癌基因的活性，并可以穩定腫瘤細胞的細胞周期，進而抑制腫瘤的早期發生和中晚期病情進展。部分研究者報道了PCDH10在胰腺癌等惡性腫瘤中的表達情況，認為PCDH10表達水平的下降是促進胰腺惡性腫瘤進展的重要因素[3]，但對于PCDH10表達與胃癌關系的研究不足。為了揭示PCDH10表達與胃癌臨床特征的關系，本研究收集手術后胃癌組織標本90例，分析PCDH10蛋白的表達情況及其與患者臨床特征、預后的關系，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本選取

選取2013年6月至2014年12月宜昌市第二人民醫院手術后胃癌組織標本和癌旁組織標本。納入標準：①經術后病理學檢查確診為胃癌；②術前無放化療史；③患者的臨床資料完整。排除標準：轉移性胃癌。根據納入、排除標準，分別選取術后胃癌組織標本90例和癌旁組織標本45例。胃癌組織對應患者的年齡為37～73歲，平均年齡為（57.5±12.1）歲；男52例，女38例；Lauren分型[4]：腸型33例，彌漫型57例；分化程度：高分化19例，中分化28例，低分化43例；TNM分期：I期24例，Ⅱ期29例，Ⅲ期37例。癌旁組織對應患者的年齡為42～70歲，平均年齡為（55.8±10.1）歲；男25例，女20例。兩組患者的年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫組化法及結果判定

所有組織標本均經石蠟包埋后連續切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉抗生物素蛋白-生物素-過氧化物酶復合物法（streptavidin-biotin-peroxidase complex method，SABC）染色，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色。PCDH10蛋白通用型二抗、SP試劑盒、DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察PCDH10蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

免疫組化的結果判定：PCDH10蛋白的陽性著色表達于細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色。根據著色強度評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色。根據陽性細胞比例評分：1分為陽性細胞比例≤10%，2分為陽性細胞比例占11%～50%，3分為陽性細胞比例占51%～75%，4分為陽性細胞比例＞75%。兩種評分相乘得分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 蛋白質印跡法

將蛋白樣品與上樣緩沖液以5∶1的比例混合，80～100℃煮沸5 min。根據蛋白相對分子質量不同，配制并灌注相應的12%分離膠和5%濃縮膠，按照15 g/孔蛋白量進行組織蛋白的上樣，進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDSPAGE）。電泳后根據條帶切膠，半濕法轉移至硝酸纖維素膜，牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）封閉2 h，加入含10%的BSA一抗及二抗（1∶1000），PBS清洗3次，每次5 min，進行曝光及膠片弧度的讀取。

1.4 隨訪

對兩組患者進行隨訪觀察，隨訪時間≥3年，主要通過電話、信件和患者主動到本院門診接受隨診復查的方式完成。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16-.0統計軟件分析數據。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PCDH10表達情況分析

胃癌組織中PCDH10陽性表達率為32.22%（29/90），明顯低于癌旁組織的84.44%（38/45），差異有統計學意義（χ2=32.728，P＜0.01）。胃癌組織中PCDH10相對表達量為（0.204±0.085），明顯低于癌旁組織的（0.693±0.173），差異有統計學意義（t=22.064，P＜0.01）（圖1）。

圖1 胃癌組織與癌旁組織中PCDH10蛋白質印跡檢測結果

2.2 不同臨床特征的胃癌患者胃癌組織的PCDH10表達情況

TNM分期為I～Ⅱ期、無淋巴結轉移的胃癌患者胃癌組織的PCDH10陽性表達率高于TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移的胃癌患者，差異均有統計學意義（χ2=7.370、6.420，P=0.007、0.011）；不同年齡、性別、腫瘤直徑、Lauren分型、分化程度的胃癌患者胃癌組織的PCDH10陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

2.3 胃癌組織中PCDH10表達與患者預后的關系

隨訪3年，PCDH10陽性表達患者失訪1例，死亡10例；PCDH10陰性表達患者失訪3例，死亡36例。PCDH10陽性表達患者的3年生存率為62.1%（18/29），高于PCDH10陰性表達患者的36.1%（22/61），差異有統計學意義（χ2=5.272，P=0.022）。

3 討論

胃癌的病情進展較隱匿，雖然早期可能有上腹不適的臨床癥狀，但疾病的總體早期診斷水平較低[4-8]。胃癌的治療效果仍不能令人滿意。因此，關于胃癌患者的臨床病理特點及診療一直是研究的熱點[9-12]。本研究分析胃癌組織中PCDH10的表達情況及其與胃癌臨床特征、預后的關系，不僅可以為胃癌發病機制的研究提供參考，也可以為胃癌的診斷提供潛在的臨床指標。

表1 不同臨床特征的胃癌患者胃癌組織的PCDH10表達情況（n=90）

PCDH10蛋白的表達在惡性腫瘤的發生過程中發揮了重要的作用，其參與腫瘤細胞代謝、細胞周期調控及細胞凋亡等過程。PCDH10表達水平的改變可以阻斷腫瘤信號通路，抑制下游腫瘤細胞轉錄調控因子的活性，降低腫瘤細胞DNA的擴增速度。PCDH10蛋白可以促進腫瘤細胞膜表面糖蛋白配體的激活，影響細胞周期調控依賴性蛋白激活的轉錄活性，降低上皮細胞持續性擴增的風險[13]。近年相關基礎方面的研究顯示，PCDH10蛋白對腫瘤上皮細胞形態有維持作用，可以降低腫瘤細胞的變形能力，使腫瘤細胞浸潤和轉移的能力下降[14]。部分研究者報道了PCDH10蛋白在消化系統惡性腫瘤中的異常表達情況，認為PCDH10蛋白的表達水平下降與肝癌或者胰腺癌的發生有一定的關聯[14]，但對于PCDH10蛋白的表達與胃癌患者臨床特征關系的研究不多。

本研究免疫組化的結果分析可見，PCDH10蛋白在胃癌組織中的相對表達量和陽性表達率均明顯低于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01），提示PCDH10蛋白的表達缺失可能是促進胃癌發生發展的重要因素。胃癌組織中PCDH10蛋白表達水平下降主要與下列兩個因素有關：①PCDH10蛋白的表達缺失導致腫瘤細胞浸潤能力提高，使腫瘤細胞更易突破基底膜組織；②PCDH10蛋白的表達水平下降，導致其對腫瘤細胞周期的調控作用減弱，腫瘤細胞增殖速度明顯加快。本研究在分析不同臨床特征的胃癌患者PCDH10蛋白表達變化時發現，臨床分期較晚或者有淋巴結轉移的患者PCDH10蛋白的陽性表達率下降，提示PCDH10蛋白的表達與胃癌患者的臨床分期及淋巴結轉移情況有關，這主要是由于PCDH10蛋白的表達缺失可以影響胃黏膜上皮細胞對鄰近正常組織的浸潤能力，導致疾病進展，而PCDH10蛋白的表達缺失還可以影響淋巴結的黏附分子的波動。部分研究者認為Lauren分型與胃癌組織中PCDH10蛋白相關，本研究并未得出相同結論，考慮可能與PCDH10蛋白檢測靈敏度的差別有關。生存預后的分析可見，PCDH10蛋白陽性表達的胃癌患者3年生存率高于PCDH10蛋白陰性表達的患者，差異有統計學意義（P＜0.05），提示PCDH10蛋白對胃癌患者的生存預后有影響。本研究的創新性亦在于探討了PCDH10蛋白與胃癌患者臨床預后的關系。

綜上所述，PCDH10表達水平下降可能在促進胃癌的發生過程中發揮了重要的作用，同時PCDH10表達水平下降可以增加患者生存預后惡化的風險。