β-地中海貧血表型兒童地中海貧血基因突變分析

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【摘要】 目的 探討分析β-地中海貧血表型兒童地中海貧血發(fā)生情況及基因突變類(lèi)型。方法 選取160例β-地中海貧血表型患兒作為研究對(duì)象， 對(duì)所有患兒進(jìn)行β-地中海貧血基因檢測(cè)、α-地中海貧血基因檢測(cè)。分析β-地中海貧血表型患兒的基因突變情況。結(jié)果 160例β-地中海貧血表型患兒中， 臨床檢查確診為β-地中海貧血152例， 占比為95.00%（152/160）， 其中合并α-地中海貧血21例， 占比為13.82%（21/152）， β-地中海貧血患兒中， 發(fā)現(xiàn)11種突變、30種基因類(lèi)型， 其中純合子突變13例（8.55%）， 以CD41-42（-TCTT）/CD41-42（-TCTT）、CD17（A→T）/CD17（A→T）純合子為主， 分別占4.60%、3.95%;雙重雜合子突變30例（19.74%）， 其中， CD41-42（-TCTT）/CD17（A→T）、CD41-42（-TCTT）/IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD41-42（-TCTT）/CD71-72（+A）位居前3位。雜合子突變109例（71.71%）， 主要以IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD41-42（-TTCT）為主。合并α-地中海貧血患兒基因突變檢測(cè)結(jié)果：6種α-地中海貧血基因突變、11種基因類(lèi)型， 其中以純合子--sea/-αα、-α3.7/-α3.7、-α4.2/-α4.2最為常見(jiàn)， 分別占19.05%、14.29%、14.29%， 其次為雜合子及雙重雜合子。結(jié)論 就本地區(qū)而言， β-地中海貧血表型患兒存在突變類(lèi)型多樣化、基因類(lèi)型多樣化的現(xiàn)狀， 且發(fā)病率較高， 應(yīng)采取積極有效的措施， 加強(qiáng)地中海貧血的相關(guān)干預(yù)工作， 可以有效減少低地中海貧血兒的出生。

【關(guān)鍵詞】 β-地中海貧血;兒童;基因;檢測(cè);突變

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.04.043

地中海貧血又被稱(chēng)之為海洋性貧血， 主要是由于珠蛋白基因缺失、珠蛋白基因存在缺陷而導(dǎo)致其在合成的過(guò)程中存在一定的障礙。臨床上， 根據(jù)患者病因所涉及的不同珠蛋白鏈， 地中海貧血可進(jìn)一步劃分為α-地中海貧血、β-地中海貧血、γ-地中海貧血和δ-地中海貧血。臨床上， α-地中海貧血、β-地中海貧血最為常見(jiàn)[1]。其中， β-地中海貧血在我國(guó)最為常見(jiàn)， 尤其是在長(zhǎng)江流域以南地區(qū)， 發(fā)病率較高。根據(jù)相關(guān)研究資料顯示， 廣西β-地中海貧血發(fā)病率高達(dá)6.43%， 嚴(yán)重影響著兒童的健康成長(zhǎng)和發(fā)育[2]。因此， 必須要了解本地區(qū)兒童β-地中海貧血的發(fā)病情況及基因突變類(lèi)型， 并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行有效的臨床治療。為此， 本院選取2017年1月～2018年1月收治的160例β-地中海貧血表型患兒作為研究對(duì)象， 旨在探究β-地中海貧血表型兒童地中海貧血發(fā)生情況及基因突變類(lèi)型及合并ɑ-地中海貧血的發(fā)生率， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1月～2018年1月本院收治的160例β-地中海貧血表型患兒作為研究對(duì)象。所有患兒均進(jìn)行血液聯(lián)合血紅蛋白組分分析， 并確診為β-地中海貧血表型。其中， 男103例， 女57例;年齡0.9～15.0歲， 平均年齡（7.95±6.05）歲。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器和試劑 擴(kuò)增儀（Thermo公司， 型號(hào)C1000PCR）、核酸提取儀（廈門(mén)致善公司， 型號(hào)Lab-Aid 820）、凝膠成像分析系統(tǒng)（BIO公司， 型號(hào)GELOOCXR）、超微量分光光度計(jì)（Thamo公司， 型號(hào)TL600B）。DNA提取試劑為儀器配套試劑， PCR反應(yīng)試劑（深圳亞能公司）。

1. 2. 2 檢測(cè)方法 靜脈抽取患兒2 ml血液， 并進(jìn)行EDTA抗凝， 再利用核酸提取儀， 并嚴(yán)格按照其操作步驟和方法， 進(jìn)行DNA提取。然后采用膽管多重PCR擴(kuò)增結(jié)合反響點(diǎn)雜交技術(shù)， 對(duì)患兒進(jìn)行17種β-地中海貧血突變檢測(cè);對(duì)于已經(jīng)確診的β-地中海貧血患兒再次進(jìn)行6種α-地中海貧血基因突變檢測(cè)。

2 結(jié)果

2. 1 臨床診斷結(jié)果 160例β-地中海貧血表型患兒中， 臨床檢查確診為β-地中海貧血152例， 占比為95.00%（152/160）， 其中合并α-地中海貧血有21例， 占比為13.82%（21/152）。

2. 2 β-地中海貧血患兒基因突變情況 β-地中海貧血患兒中， 發(fā)現(xiàn)11種突變、30種基因類(lèi)型， 其中純合子突變13例（8.55%）， 以CD41-42（-TCTT）/CD41-42（-TCTT）、CD17（A→T）/CD17（A→T）純合子為主， 分別占4.60%、3.95%;雙重雜合子突變30例（19.74%）， 其中， CD41-42（-TCTT）/CD17（A→T）、CD41-42（-TCTT）/IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD41-42（-TCTT）/CD71-72（+A）位居前3位。見(jiàn)表1。雜合子突變109例（71.71%）， 主要以IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD41-42（-TTCT）為主， 其次為CD17（A→T）、CD71-72（+A）、-28（A→G）、CD43（G→T）、CD27-28（+C）、βE（GAG→AAG）。

2. 3 合并α-地中海貧血患兒基因突變情況 合并α-地中海貧血患兒基因突變檢測(cè)結(jié)果：6種α-地中海貧血基因突變、11種基因類(lèi)型， 其中純合子突變10例（47.62%）， 以--sea/-αα、-α3.7/-α3.7、-α4.2/-α4.2最為常見(jiàn)， 分別占19.05%、14.29%、14.29%;其次為雜合子9例（42.86%）， 其中以ΑWSα/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα為前3位， 分別占據(jù)14.29%、9.52%、9.52%。雙重雜合子突變2例（9.52%）， 分別為β41-42/βN合并--SEA/αα、β654/βN合并--SEA/αα。見(jiàn)表2。

3 討論

根據(jù)臨床研究中顯示， 地中海貧血屬于一種單基因遺傳性疾病， 在世界上具有較高的發(fā)病率。在4種地中海貧血的類(lèi)型中， 以β-地中海貧血最為常見(jiàn)。根據(jù)流行性病學(xué)相關(guān)研究資料顯示， 地中海貧血遍布世界各地， 其中以地中海地區(qū)、中非洲、亞洲、南太平洋地區(qū)為主要病發(fā)地區(qū)[3]。在我國(guó)也具有較高的發(fā)病率， 尤其是以長(zhǎng)江流域以南的地區(qū)兩廣地區(qū)、貴州、四川等地區(qū)為首[4]。

臨床上， 輕度患兒常常表現(xiàn)輕度貧血、容易疲勞等， 多無(wú)自覺(jué)癥狀， 不易被察覺(jué);中度患兒常常出現(xiàn)中度貧血， 且大多患兒可以成長(zhǎng)至成年;重度患兒自出生之日起便出現(xiàn)貧血、肝脾重大、黃疸、發(fā)育不良， 并常常導(dǎo)致一些嚴(yán)重的并發(fā)癥， 如急性心包炎、繼發(fā)性脾功能亢進(jìn)、繼發(fā)性血色病等。就目前而言， 臨床上尚未出現(xiàn)有效的治療方法， 患兒必須要定期進(jìn)行輸血、應(yīng)用螯合劑除鐵以維持生命[5， 6]。可以說(shuō)， 地中海貧血不僅影響著患兒的生命健康， 也給家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。由于地中海貧血屬于一種單基因遺傳性疾病， 具有高度的遺傳異質(zhì)性， 可促使患者體內(nèi)的基因發(fā)生突變。因此， 在對(duì)地中海貧血兒童進(jìn)行臨床治療前， 加強(qiáng)其基因突變和疾病發(fā)生情況的分析尤為重要[7， 8]。

本次研究結(jié)果充分表明：地中海貧血兒童基因突變、基因類(lèi)型多樣。其中， β-地中海貧血患兒中， 發(fā)現(xiàn)11種突變、30種基因類(lèi)型， 其中以CD41-42（-TCTT）/CD41-42（-TCTT）、CD17（A→T）/CD17（A→T）純合子為主， 其次為CD41-42（-TCTT）/CD17（A→T）、CD41-42（-TCTT）/IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD41-42（-TCTT）/CD71-72（+A）等雙重雜合子突變;合并α-地中海貧血患兒中， 發(fā)現(xiàn)6種α-地中海貧血基因突變、11種基因類(lèi)型， 其中以純合子--sea/-αα、-α3.7/-α3.7、-α4.2/-α4.2最為常見(jiàn)， 雜合子以ΑWSα/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα為前3位。雙重雜合子突變分別為β41-42/βN合并--SEA/αα、β654/βN合并--SEA/αα。

綜上所述， β-地中海貧血表型患兒基因類(lèi)型多樣化， 必須要據(jù)此采取有效的措施， 進(jìn)行科學(xué)的干預(yù)， 以有效降低其發(fā)生率。

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[收稿日期：2018-07-27]