免疫組化病理技術及質量控制方式的研究

王立山 車 超 李占林 燕東陽 姜曉靜

（遼寧省健康產業集團鐵煤總醫院，遼寧 鐵嶺 112700）

在現代醫學技術的快速發展和完善的過程中，免疫組化學技術在臨床病理診斷中的應用也越來越廣泛，該技術的應用也顯著提高了病理診斷水平[1]。免疫組化病理技術環環相扣、步步組合，每一環節失控都會影響制片質量，質量控制就成為了現階段病理學界需要及時解決的問題之一。要想對制片質量進行嚴格控制，并為臨床病理診斷提供可靠和準確的依據，病理技術室應制定科學的質量控制標準，同時加強監督[2]。本研究主要分析了質量控制對免疫組化病理技術制片質量的影響，希望能有效提高臨床病理診斷的質量和水平，具體情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本文所選70例經空心針穿刺活檢證實的乳腺癌患者均為我院2016年3月至2017年3月收治，全部患者均采用TE方案新輔助化療，不存在遠處轉移，未接受過內分泌治療、放療或者化療。將其隨機分為對照組和實驗組，每組均為35例。對照組患者年齡為33～78歲，平均為（54.4±4.6）歲；臨床分期為：21例患者為Ⅱ期，14例患者為Ⅲ期。實驗組患者年齡為34～79歲，平均為（53.8±4.2）歲；臨床分期為：20例患者為Ⅱ期，15例患者為Ⅲ期。在一般資料方面兩組患者比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法：實驗組選擇免疫組化染色：選取癌組織標本，連續切片處理，切片厚度為4 μm，對切片實施脫蠟處理，常溫狀態下將其放入到濃度為3%的雙氧水中，進行20 min浸泡；完成浸泡后應選擇PBS沖洗，清洗次數不小于3次，清洗時間應超過15 min；在1000 mL燒杯中導入pH值為6.0檸檬酸緩沖液700 mL，將其加熱沸騰；在燒杯內放入記CK19、ki67、HBcAg、HBsAg抗體的切片，而且應認真標記，加熱15 min后將其取出；常溫冷卻后選擇pH值為7.4的PBS清洗切片；對全部切片實施一抗處理，放入到溫度為4 ℃的冰箱內進行過夜孵育；選擇pH值為7.4的PBS清洗，對切片滴加二抗，并放在常溫下進行10 min孵育；選擇pH值為7.4的PBS沖洗，進行5～10 min的DAB顯色；水洗后選擇蘇木精襯染，選擇脫水透明中型樹膠封固。

對照組選擇常規HE染色：將癌組織標本及時放入到濃度為4%的中性甲醛內，進行4 h固定；分別選擇AF液、濃度為75%的乙醇、濃度為80%的乙醇、濃度為90%的乙醇、濃度為95%的乙醇、濃度為100%的乙醇Ⅰ、濃度為100%的乙醇Ⅱ各進行1 h浸泡，選擇二甲苯Ⅰ進行20 min浸泡，選擇二甲苯Ⅱ進行30 min浸泡，選擇醋缸Ⅰ和醋缸Ⅱ各進行1 h浸泡；醋缸溫度設置為60 ℃，烤箱設置為60 ℃，烤片2 h。

1.3 臨床觀察指標：①對切片優良率進行觀察，GE染色的切片優良標準為：肝臟穿刺組織的結構完全，厚薄均勻，不存在裂痕損壞，染色明顯，細胞形態比較清楚，未出現收縮，能和核物質進行有效對比。免疫組化染色切片的優良標準為：結構不存在損壞，完好，能對陽性物質進行準確定位，背景不存在干擾，沒有發生非特異性著色、脫片等情況。②對確診率進行觀察比較。

1.4 統計學分析：選擇SPSS軟件來分析和統計本實驗相關數據，計數資料選擇卡方檢驗，計量資料則選擇t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 切片優良率觀察：實驗組的切片優良率顯著高于對照組，比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 切片優良率觀察（n）

2.2 確診率觀察：對照組的確診率為74.3%（26/35），實驗組的確診率為97.1%（34/35）；實驗組的確診率顯著高于對照組，比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討 論

免疫組織化學技術也被稱為免疫細胞化學技術，是開展病理學診斷的主要方法之一，具體是指通過對特異性抗體或者抗原在組織細胞原位進行標記，利用抗體的組織化學呈色反應和抗原抗體的免疫反應，對相應抗體或抗原進行定性分析和定位[3]。在實際的臨床病理診斷中，要想讓診斷準確性顯著提高，首先就需要對免疫組化的制片質量進行嚴格控制[4]。分析免疫組化制片技術現階段的實際情況發現，常見問題主要為免疫組化染色、免疫組化試劑、組織切片以及取材等。

取材是進行免疫組化制片的基礎，在對病變組織進行選取時，如果體積不合理則會導致質量問題。針對上述問題，應合理選擇標本進行制片，取材后應及時處理標本，對標本進行合理保存，標本保存的環境應合理，防止標本發生污染，進而讓質量控制效果得以保證。對于新鮮組織來講，只有對其進行有效固定后，才能讓原有細胞的固有形態得以保留，細胞內的水解酶種類較多，當細胞發生缺氧時，則會導致細胞內的水解酶分解破壞蛋白質，讓組織發生自溶。針對上述問題，臨床中在將組織標本切除后，應及時將其放入到固定液內，充分固定標本。染色試劑會對標本的染色效果產生直接影響，臨床中應及時更新透明、脫水、浸水以及拖拉所以的酒精和二甲苯等，讓著色質量得以保證，讓著色能力顯著提高，讓制片染色質量得以保證。免疫組化的試劑質量也會對病理學診斷質量產生直接影響。在經一段時間的使用后，試劑純度會下降，進而降低組織切片的質量，對病理診斷結果造成影響。因此在臨床免疫學檢驗中，免疫組化試劑應定期更換，在配置、使用和采購試劑時應嚴格把關，在開展免疫組化工作時應嚴格遵循相關的無菌操作原則，避免發生不良現象。在對免疫組化質量進行控制時，應對免疫組化的染色過程加以關注，對染色質量進行不斷提升；首先應對抗原進行高壓修復，并設定免疫組化抗原的陽性和陰性對照；其次應嚴格遵循相關的操作規范和要求，讓染色質量得以保證，避免因染色隨意而導致的制片污染。

總之，加強質量控制能讓免疫組化病理技術的制片質量顯著提高，進而讓病理檢查診斷的質量提高。在開展免疫組化病理技術檢查時，每一環節失控都會對制片質量造成影響，因此在實際的臨床工作中應加強免疫組化病理技術的質量控制，讓臨床免疫分析的有效性和準確性得以保證，讓醫療衛生服務的形象得以保證，值得臨床推廣和應用。