肉蓯蓉微型飲片切制工藝優化

李祥溦， 李 喆， 任曉航， 魏曉峰， 劉博男， 史 輯，，?

（1.遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧大連 116600；2.國家中醫藥管理局炮制原理解析重點實驗室，遼寧大連 116600；3.遼寧省中藥炮制工程技術研究中心，遼寧大連 116600）

肉蓯蓉為列當科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanche tubulosa（Schenk）Wight的干燥帶鱗葉的肉質莖。具有補腎陽、益精血、潤腸通便的功效[1］。其主要活性成分為苯乙醇苷類、環烯醚萜苷類、寡糖類等[2-4］。現代藥理學研究表明肉蓯蓉具有延緩衰老[5］、抗疲勞[6］等作用。臨床上主要用于腎陽不足、精血虧虛、陽痿不孕、腰膝酸軟、筋骨無力等癥，為常用的補腎壯陽藥[7-8］。

中藥飲片是經過炮制能直接用于中醫臨床和中成藥生產的處方藥，是國家基本藥物，是中醫臨床處方藥。目前臨床上肉蓯蓉飲片大多以直徑4～5 cm，厚度0.5～1 cm的大厚片為主[4］，這種傳統的飲片不僅在抓藥時難以把控質量，而且在煎煮時也不利于有效成分的煎出，不利于中藥飲片的規范使用[9］。隨著現代生活節奏加快，采用傳統秤稱手抓的調劑方式，速度慢，精準度不夠，煎出率低，勞動強度大，影響了飲片在臨床的使用。2015年賈天柱提出了微型飲片的概念[10］。所謂微型飲片是指直徑在0.5～1.0 cm左右的丁塊狀飲片，具有流動性好、煎出率高的特點。在保證藥材原有的藥效與性狀的前提下，對其進行更加精細的切制，使飲片更小更均勻，更有利調劑人員的稱定，有效成分的煎出[11］。與之相匹配的是，飲片調劑需要實現自動化和智能化[12］。因此微型飲片切制工藝研究的目的就是提高調劑人員工作效率，便于患者取藥，讓中藥調劑接近西藥調劑，讓有限的飲片煎出更多的成分。

本實驗采用正交試驗的方法，以飲片截面直徑、厚度、軟化時間、干燥溫度為影響因素，以休止角、浸出物、毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷等化學成分的含有量為評價指標，對肉蓯蓉微型飲片的切制工藝進行優化，同時建立不同產地肉蓯蓉微型飲片的指紋圖譜，為其質量標準的建立及控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 E2695-2998型高效液相色譜儀 （美國Waters公司）；KQ-250DB型數控超聲波清洗器 （超聲功率250 W，頻率40 kHz，昆山市超聲儀有限公司）；AE240型電子分析天平 （十萬分之一，瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 材料 肉蓯蓉購自內蒙古王爺地蓯蓉有限公司 （直徑約3 cm，長約15 cm）和內蒙古阿拉善藥材市場購買的荒漠肉蓯蓉藥材10批。經過遼寧中醫藥大學翟延君教授鑒定為列當科植物肉蓯蓉Cistanche deserticolaY.C.Ma干燥帶鱗葉的肉質莖；松果菊苷對照品 （批號MUST-13080801，含有量≥98%）、毛蕊花糖苷對照品 （批號MUST-13122711，含有量≥98%）、異類葉升麻苷對照品 （批號 MUST-15081001M，含有量≥99.77%），均由成都曼斯特生物技術有限公司提供。乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 有效成分測定

2.1.2 樣品溶液制備 取同一批次肉蓯蓉藥材9份，選擇飲片截面直徑 （A）、飲片厚度 （B）、軟化時間 （C）、干燥溫度 （D）為考察因素，凈制后按照正交試驗表中的潤制時間軟化，制備成表中所述的各規格微型飲片，再以不同的烘干溫度烘干，即得。見表1。

2.1.3 供試品溶液制備 精密稱定各肉蓯蓉微型飲片10 g，置于200 mL圓底燒瓶中，依次加入100、80、80 mL水加熱回流3次，每次1 h。合并提取液，置于500 mL量瓶中，定容，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，備用。

2.1.4 色譜條件 Ecosil C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相甲醇 （A） -0.1%甲酸水溶液 （B），梯度洗脫 （0～45 min， 30% ～45%A； 45～50 min， 45% ～30%A；50～60 min，30%A）；體積流量1 mL／min；柱溫25℃；檢測波長 330 nm； 進樣量 10 μL[13］。 見圖 1。

表1 正交試驗設計

圖1 各成分HPLC色譜圖

2.1.5 線性關系考察 取混合對照品溶液1、2、5、10、20 μL，在 “2.1.4”項條件下測定，以各成分質量濃度為橫坐標 （X），峰面積為縱坐標 （Y）進行回歸，結果見表2。

表2 各成分線性關系

2.1.6 精密度試驗 吸取同一濃度混合對照品，在“2.1.4”項條件下測定6次，測得毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷峰面積的RSD依次為1.5%、1.7%、1.8%，表明該儀器精密度良好。

2.1.7 重復性試驗 取同一批次、同一方法處理的肉蓯蓉微型飲片6份，每份精密稱取10 g，按 “2.1.3”項下方法制備供試品溶液，在 “2.1.4”項條件下測定，測得毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷峰面積RSD分別為1.7%、1.5%、1.4%，表明該方法重復性良好。

1) 一個問題可以首先被粗粒度地劃分為若干子問題，CUDA使用塊(Block)單元處理子問題，每個塊都由一些CUDA線程組成，線程是CUDA中最小的處理單元。

2.1.8 穩定性試驗 精密吸取同一份肉蓯蓉微型飲片的樣品溶液，在 “2.1.4”項條件下，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進樣，測得毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷的峰面積RSD分別為1.6%、1.7%、1.5%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.1.9 加樣回收率試驗 精密稱定含各成分，經同一方法處理的肉蓯蓉微型飲片6份，每份10 g，按比例加入對照品溶液，按 “2.1.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1.4”項條件下測定，測得毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷的含有量，并計算平均加樣回收率分別為99.7%（RSD 1.5%）、 102.1%（RSD 1.7%）、 97.3% （RSD 1.5%）。

2.2 出膏率測定 取切制的肉蓯蓉飲片各10 g，置于200 mL圓底燒瓶中，分別加入100、80、80 mL水加熱回流3次，每次1 h。將每次回流提取液過濾后合并，減壓濃縮至適量，將濃縮液轉移至干燥至恒定質量的蒸發皿中，水浴蒸干，105℃下干燥3 h，置于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質量，計算出膏率。公式為C＝M／m×100% （C為出膏率，M為藥材干質量，m為干燥浸出物質量）。

2.3 休止角測定 采用傾斜法進行測定。于矩形盒內裝滿飲片，松實程度適中，將盒子逐漸傾斜至飲片開始傾出為止，其傾斜的角度即為休止角。設傾斜角的高為H，底邊為L， 計算休止角θ， 公式為tanθ＝H／L。

2.4 最佳切制工藝優選 采用正交設計L9（34）優選肉蓯蓉微型飲片的最佳切制工藝，以毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷為評價指標，選擇飲片截面直徑 （A）、飲片厚度 （B）、軟化時間 （C）、干燥溫度 （D）為考察因素，見表3。以綜合加權評分法對實驗數據進行處理分析。見表4～5。再根據綜合水平計算公式進行評分，公式為綜合評分＝40X／Xmax+40Y／Ymax+20Zmin／Z （X 為肉蓯蓉微型飲片中毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷總量，Y為肉蓯蓉微型飲片的出膏率，Z為肉蓯蓉微型飲片的休止角。）

表3 因素水平

表4 正交試驗設計與結果

表5 方差分析

在肉蓯蓉微型飲片切制工藝中，飲片橫截面直徑（A）、飲片的厚度 （B）均具有顯著影響，而軟化時間（C）、干燥溫度 （D）均無顯著影響。根據生產需要藥材不宜過硬、干燥時間不宜過長且能耗低，因此，最優工藝確定為飲片截面直徑3～4 mm，飲片厚度1～2 mm，潤制時間2 h，干燥溫度70℃。

2.5 驗證試驗 分別按照最佳切制工藝切制肉蓯蓉微型飲片3份，每份10 g，依次加入100、80、80 mL水加熱回流3次，每次1 h。合并提取液，置于500 mL量瓶中，定容，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，在 “2.1.4”項條件下，測定毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷含有量，結果見表6，測得總含有量的平均值為1.18%，表明該切制工藝條件具有可操作性、重復性好，適用于肉蓯蓉飲片有效成分的提取。

表6 驗證試驗結果

2.6 傳統切制工藝 取傳統大厚片工藝切制的肉蓯蓉飲片3份，每份10 g，按 “2.5”項下方法提取，測定毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷含有量，結果見表7，測得總含有量的平均值為0.67%，結果表明，與傳統切制相比，微型飲片的切制工藝顯著提高了肉蓯蓉飲片中有效成分的提取效率。

表7 傳統切制工藝提取結果

3 指紋圖譜建立[4］

選取在內蒙古阿拉善藥材市場購買的荒漠肉蓯蓉藥材10批，按 “2.1.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1.4”項下條件下進樣，得到液相色譜圖，導入 “中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”2004 A版，進行校正和匹配，即得肉蓯蓉微型飲片的指紋圖譜及相似度。結果見圖2， 表 8。

圖2 10批樣品HPLC指紋圖譜

表8 10批樣品相似度

3.1 對照品溶液制備 同 “2.1.1”項下方法。

3.2 供試品溶液制備 同 “2.1.3”項下方法。

3.3 色譜條件 同 “2.1.4”項下方法。

3.4 方法學考察

3.4.1 精密度試驗 精密吸取同一產地巴戟天供試品溶液，在 “2.1.4”項條件下連續測定6次，測得各色譜峰保留時間、峰面積RSD值均小于2%，表明該儀器精密度良好。

3.4.2 穩定性試驗 精密吸取同一產地巴戟天供試品溶液，在 “2.1.4” 項條件下于 0、 2、 4、 6、 8、 10、 12、24 h分別進樣，測得各色譜峰保留時間、峰面積RSD值均小于2%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

3.4.3 重復性試驗 取同一產地巴戟天飲片，平行制備6份供試品溶液，在 “2.1.4”項條件下進樣，測得各色譜峰保留時間、峰面積RSD值均小于2%，表明該方法重復性良好。

3.5 結果分析 通過對10批次肉蓯蓉藥材的指紋圖譜鑒定，共分離得37個色譜峰，其中16個為共有指紋色譜峰，與對照品比對確定了其中3個指標性成分，分別為毛蕊花糖苷、松果菊苷、異類葉升麻苷。將原始微型飲片的色譜圖作為參照圖譜，與其他10個不同產地的肉蓯蓉微型飲片色譜圖對比，相似度均到達90%以上，符合指紋圖譜的要求，表明該工藝適用于大多數批次肉蓯蓉藥材。

4 討論

本實驗所使用的肉蓯蓉藥材均按照藥典方法進行了含有量測定，其毛蕊花糖苷、松果菊苷的含有量均符合2015年版 《中國藥典》的相關規定 （毛蕊花糖苷、松果菊苷的總量不得少于0.3%）。

傳統中藥飲片一般用水煎煮[15］，本實驗所得的微型飲片的提取工藝也均使用水為提取溶劑，加熱回流的方式進行提取。可最大程度上保證與臨床用藥煎煮習慣相吻合，提高臨床用藥的針對性。

將微型飲片與傳統大厚片的提取比較分析，表明微型飲片在出膏率、有效成分的煎出率方面明顯要優于傳統的大厚片，這可能是因為飲片體積減小，同質量飲片與提取溶劑的接觸面積增大，有效成分提取更完全，體現了微型飲片的合理性與可行性。同時，休止角概念的引入，證明微型飲片的流動性較好，有利于研制和使用相應的調劑設備[16］，提高調劑室的調劑速度，為患者和醫護人員節省更多時間。

本實驗采用含有量測定與特征性圖譜相結合的方法全面整體評價工藝的合理性，不僅能在化學成分含有量方面直觀的體現出微型飲片切制工藝的優點及合理性，也能體現其普遍適用性。

中藥飲片的炮制具有悠久的歷史，其中尤以切制歷史最為悠久。中藥材經過切制才能被稱為飲片[16］，但是長久以來中藥飲片的發展卻遠遠滯后于臨床需要。現代中藥的種植、采收、加工越來越規范，對于中藥飲片的要求也越來越高。為了使中藥飲片達到規格化一，流動可調的要求，微型飲片應運而生，將傳統飲片的規格化大為小，達到可隨意分配與調劑的程度[17］，這區別于原藥材和粉末藥材，除了具有較好的流動性外，還不失去藥材原有的性狀，煎煮時更不會糊鍋，調配也更加方便快捷。微型飲片具有廣闊的應用前景，也是中藥飲片的發展趨勢。