結直腸腺癌組織中CYR61和血管內皮生長因子的表達及相關性研究*

史 璇，張 鑫，朱金朋，邸 巍,田 蕾

錦州醫科大學附屬第一醫院消化內科三病區( 錦州 121000)

結直腸腺癌臨床最為常見，是腸粘膜上皮來源的腫瘤，由腺上皮的異型增生演變而來，伴有肌層的侵襲。病變形成中伴有間質的血管新生，可以為腫瘤細胞的增殖提高必要的營養和氧[1]。血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor ，VEGF)是血管生成的經典蛋白，可以促進間質中血管內皮細胞的繁殖，促進管腔形成，使血管具有功能[2]。目前研究其影響因素較多。高半胱氨酸蛋白61(Homocysteine protein 61，CYR61)是結締組織生長因子家族的成員，是早期促癌基因，對腫瘤形成起的作用更加直接，尤其是對血管生成的調控是其重要功能之一[3-4]。本文關注結直腸腺癌中CYR61和VEGF的表達，探討二者的關系，分析其臨床意義。

資料和方法

1 一般資料 收集近兩年在我院確診為結直腸腺癌，并行手術治療的患者作為觀察組，收集病人的完整資料，留取術后新鮮組織，共77例，其中男性40例，女性37例，年齡45～89歲，平均(59.7±9.3)歲。納入均由病理醫師復審切片，并按WHO的診斷標準分型。排除標準：①術前行放、化療的患者；②有腸道手術史的患者；③多原發癌的患者。選擇上述患者中距腫瘤邊緣大于5 cm的正常結腸黏膜新鮮組織12例作為對照組，其中男性6例，女性6例，年齡49～80歲，平均年齡(58.6±7.8)歲。兩組在性別、年齡構成等常規因素比較無統計學差異。

2 CYR61和VEGF蛋白的檢測 CYR61和VEGF的檢測應用流式細胞術(兩組蛋白的半定量表達)。術后新鮮樣本均應用70%酒精固定后，用眼科剪刀剪碎組織，在銅網上過濾后，制備單細胞懸液(1×106/ml)，取1 ml單細胞懸液，按實驗步驟加入一抗、PBS及FITC-IgG二抗。應用BC公司生產的Epics-XLII型流式細胞儀，應用數據軟件進行分析。

3 結果判定 以熒光指數(FI)表示蛋白表達的半定量。FI值計算公式為：

結果

1 CYR61和VEGF在兩組中表達的比較 CYR61和VEGF在兩組中表達的差別有統計學意義，見表1。

2 CYR61和VEGF在觀察組不同病理特征中的比較 觀察組中CYR61和VEGF的表達與腫瘤的最大徑、腫瘤的浸潤深度密切相關，CYR61與腫瘤的分化程度和增殖指數密切相關，VEGF的表達與腫瘤的淋巴結轉移密切相關,見表2。

3 觀察組中CYR61和VEGF的相關性 應用線性相關分析，結果顯示觀察組中CYR61和VEGF的表達具有正相關性(r=0.55，P<0.05)。

表1 CYR61和VEGF在兩組中表達的比較

表2 CYR61和VEGF在觀察組不同病理特征中的比較

討論

結直腸腺癌腫瘤具有侵襲性，其侵襲程度與分化和細胞增殖程度相關。血管生成不僅在癌前病變及異型增生到較大病灶形成中起重要作用，同時在腫瘤向周圍或遠處侵犯和轉移過程中發揮了重要作用，并參與了腫瘤量變的過程[5-6]。CYR61基因定位于1p22-p31，相對分子量為42kDa，含有5個外顯子和4個內含子，編碼381個氨基酸的開放閱讀框架，其中38個為保守的半胱氨酸[7]。CYR61的表達是通過RhoA激酶和P38途徑調節的，P38通過調節環磷酸腺苷反應結合蛋白，并使蛋白發生磷酸化后調節CYR61啟動子活性，其表達產物被分泌到細胞表面，具有明顯的促有絲分裂活性，同時具有明顯的趨化性[8-9]。在功能上CYR61通過不同途徑誘導細胞增殖、粘附、轉移、細胞外基質的調節和血管的新生[10]。CYR61在結直腸癌中的作用屬于早期應答基因，因此其在腫瘤中是全程參與的，其在不同階段促腫瘤生成的程度可能不同[11-12]。

本實驗應用的流式細胞術可以半定量檢測蛋白的表達，結果客觀，無主觀判斷產生的偏差，重復性好。本研究結果顯示腫瘤中CYR61和VEGF高表達是促進腫瘤形成的重要因素，使腫瘤細胞具有一定的異型性，同時腫瘤細胞具有明顯的侵襲性，此時細胞的形態發生變化，核染色深，組織結構形成篩狀和迷路狀，腫瘤趨于幼稚。結果顯示觀察組中CYR61和VEGF的表達與腫瘤的最大徑、腫瘤的浸潤深度密切相關，提示CYR61和VEGF高表達可以促進腫瘤的生長和直接蔓延。CYR61與腫瘤的分化程度和增殖指數密切相關，提示CYR61可以促進腫瘤細胞的失分化過程和細胞的繁殖，腫瘤細胞生長旺盛，腫瘤細胞數量明顯增加，腫瘤體積增大，對肌層和周圍組織的破壞能力增強，腫瘤的惡性程度明顯提高[13]。結果顯示VEGF的表達與腫瘤的淋巴結轉移密切相關，提示VEGF高表達可能對腫瘤的淋巴道播散有一定的促進作用。相關性分析顯示觀察組中CYR61和VEGF的表達具有正相關性，提示二者具有明顯的正向協同作用。CYR61參與腫瘤新生血管生成的可能機制為：①Cyr61與整合素受體結合后通過激活αvβ3以旁分泌形式調節血管生成的活動，包括促進細胞間的黏附、增殖、增加生長因子誘導的DNA的合成及介導內皮微管的形成等[14]。②CYR61可增加促血管生成調節因子[15]，如血管內皮生長因子的表達，本實驗的相關性直接證實了此觀點。③CYR61可誘導ECM降解蛋白酶和基質金屬蛋白酶的生成，抑制組織金屬蛋白酶抑制劑表達，改變ECM的結構或穩定性，間接促進血管生成[16-17]。但是由于CYR61是多向調控基因，關于CYR61的具體作用和影響因素有待更多基礎實驗證實。

總之，結直腸腺癌組織中CYR61和VEGF高表達對促進腫瘤性病變的形成和進展有重要作用。CYR61和VEGF之間具有正向協同作用。